胶质瘤组织中microRNA-200a的表达及其与患者预后的关系

季玉陈，李　妍，胡京霞，张红波，左焕琮#

1)清华大学玉泉医院神经外科 北京 100049　2)湖北省新华医院神经外科 武汉 430015



胶质瘤组织中microRNA-200a的表达及其与患者预后的关系

季玉陈1)，李妍1)，胡京霞1)，张红波2)，左焕琮1)#

1)清华大学玉泉医院神经外科 北京 1000492)湖北省新华医院神经外科 武汉 430015

关键词microRNA-200a;胶质瘤;预后

摘要目的：探讨胶质瘤组织中microRNA-200a的表达及其在预测胶质瘤患者预后中的价值。方法：采用RT-PCR方法检测63例胶质瘤及14例正常脑组织中microRNA-200a的表达水平。结果：胶质瘤组织中microRNA-200a的表达水平高于正常脑组织中的表达水平(P<0.001)。胶质瘤组织中microRNA-200a的表达水平与胶质瘤组织学分级有关(P<0.001)，而与患者年龄、性别、KPS评分、肿瘤直径等均无关(P均>0.05)。microRNA-200a高表达的胶质瘤患者死亡风险较低表达的胶质瘤患者高(P<0.001)。结论：microRNA-200a在胶质瘤组织中表达增高，可作为评价胶质瘤预后的独立因素。

AbstractAim: To investigate the relationship between microRNA-200a expression and clinicopathologic factors in glioma tissue and assess its value in predicting the prognosis of glioma patients.Methods: The microRNA-200a expression of 63 cases of glioma and 14 cases of normal brain tissue were detected by RT-PCR.Results: The microRNA-200a expression in glioma tissue was significantly higher than that in normal brain tissue(P<0.001). The high expression of microRNA-200a was related with histological grade(P<0.001), but not with age，gender，tumor size，or KPS scale(P>0.05).The microRNA-200a appeared as an independent prognostic factor(P<0.001).Conclusion: Increased microRNA-200a expression in glioma tissue could be an independent factor predicting poor prognosis.

微小RNA(microRNA)是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码单链RNA，通过与靶基因mRNA的3’UTR完全或不完全配对干扰相关microRNA的翻译，调节转录后基因的表达。microRNA表达水平的改变与许多肿瘤的发生发展及预后密切相关，且microRNA可通过其靶基因发挥癌基因或抑癌基因作用。该研究采用RT-PCR方法检测microRNA-200a在不同级别胶质瘤组织和正常脑组织中的表达情况，并分析其与胶质瘤临床病理特征的关系，探讨microRNA-200a在胶质瘤发生发展中的作用，从而为胶质瘤的早期诊断及治疗提供新的思路。

1材料与方法

1.1标本来源收集2004年1月至2010年12月清华大学玉泉医院收治的63例胶质瘤手术患者肿瘤切除标本，所有病例均具有完整病历资料(表1)，其中男41例，女22例；年龄17～76(46．9±8.7)岁；根据WHO 2007年中枢神经系统肿瘤分类标准进行组织学分级：Ⅰ级 11 例，Ⅱ级 17例，Ⅲ级 15 例，Ⅳ级 20 例；所有患者术前均未进行放化疗，术后行同步放化疗：采用直线加速器放疗，根据头颅MRI定位，采用局部扩大放疗，总剂量60 Gy，分30次，共6周；同时口服替莫唑胺，每日75 mg/m2，共42 d。另外14例正常脑组织标本取自同期因颅脑损伤或脑出血需行内减压术的患者，术后病理检查证实均为正常脑组织。该研究获得清华大学玉泉医院伦理委员会同意及患者家属签字认可，操作符合临床试验伦理规范。

1.2胶质瘤组织和正常脑组织中microRNA-200a的检测采用Trizol法提取标本的总RNA，提取的RNA分装保存于-80 ℃冰箱或立即用于逆转录。逆转录及RT-PCR按照试剂盒说明书采用两步法完成，以RNU6B为内参，采用相对定量法进行计算。所用试剂中Trizol购自美国Invitrogen公司，TaqMan microRNA逆转录试剂盒、TaqMan 2×PCR Master Mix、逆转录特异性引物、RT-PCR引物及探针均购自美国ABI公司。

1.3随访采用电话或者门诊随访方式对患者进行随访，计算生存期时以患者初次手术治疗为起点，以因肿瘤进展所致死亡为观察终点，随访至截止日期前已死亡者获完全数据，仍存活者、期间失访者或死于其他疾病者获删失数据。

1.4统计学处理应用SPSS 17.0进行统计学分析。根据胶质瘤组织中microRNA-200a表达水平的均值将其分为高表达组和低表达组。microRNA-200a在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达水平比较采用两独立样本的t检验；胶质瘤组织中microRNA-200a的表达水平与患者临床病理特征的关系采用χ2检验进行分析；采用Kaplan-Meier分析、Log-rank检验和Cox比例风险模型评价不同临床病理特征与生存期的关系。检验水准α=0.05。

2结果

2.1microRNA-200a在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达microRNA-200a在胶质瘤组织和正常脑组织中的相对表达水平分别为(23.42±0.32)和(9.12±0.45)(t=21.520,P<0.001)。

2.2microRNA-200a的表达水平与胶质瘤患者临床病理特征的关系microRNA-200a的表达水平与胶质瘤的组织学分级有关，与其他病理特征如年龄、性别、KPS评分、肿瘤直径等无关(表1)。

表1　microRNA-200a在胶质瘤组织

2.3microRNA-200a的表达与胶质瘤患者预后的关系microRNA-200a高、低表达组患者的生存曲线见图1(χ2=9.063，P=0.032)，随访截止至2014年12月，共47例患者死亡，其中microRNA-200a高表达组28例，microRNA-200a低表达组19例。Cox分析结果见表2。

图1　microRNA-200a在胶质瘤组织中的表达水平与患者预后的关系

临床病理特征单因素分析χ2P多因素分析95%CIPWaldχ2年龄2.3540.3810.692～2.3400.8634.049性别1.5530.8900.535～1.9170.7549.753组织学分级12.327<0.0011.064～4.122<0.00113.847KPS评分1.4060.3241.381～5.2850.3565.093肿瘤直径2.0050.4450.652～2.6310.2947.127辅助治疗5.7800.5170.574～3.682<0.0018.214microRNA-200a表达水平29.640<0.0011.352～5.421<0.0015.170

3讨论

胶质瘤是颅内最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，其恶性程度高，易复发，预后较差，5 a生存率为30%～70%,生存期仅为9～12个月[1]。已有研究[2]表明胶质瘤患者的临床预后与许多因素有关，如病理分级、患者术前KPS评分、肿瘤的生长部位等，但是患者的异质性使得这些因素不能精确评估患者预后。因此深入探讨胶质瘤发生发展的分子机制，从而为胶质瘤的治疗提供新的思路非常重要。

目前发现，microRNA可通过调控其靶基因在胶质瘤发生发展、侵袭和转移过程中起到促进或者抑制作用，并且与胶质瘤临床病理特征密切相关，因此通过检测胶质瘤组织中microRNA的表达情况可为判断患者预后提供依据，如microRNA-34a[3]、microRNA-206[4]、microRNA-200b[5]在胶质瘤组织中表达下调，microRNA-210[6]、microRNA-155[7]、microRNA-132[8]等在胶质瘤组织中表达上调均与胶质瘤患者预后密切相关。microRNA-200a定位于染色体1p36.33[9]。在该研究中作者发现，microRNA-200a在胶质瘤组织中的表达水平高于正常脑组织中的表达水平。作者进一步分析了microRNA-200a在胶质瘤组织中的表达水平与患者临床病理特征的关系，结果显示：microRNA-200a的表达水平与组织学分级有关，而与胶质瘤患者其他临床病理特征如性别、KPS评分、肿瘤直径、患者年龄无关，与以往研究[10-13]结果一致。

已有研究[14]表明microRNA-200a在卵巢癌组织中的表达水平与肿瘤侵袭、淋巴结转移密切相关，可作为判断卵巢癌预后的独立因素。同时，也有研究者[15]发现microRNA-200a也可以作为肝细胞癌预后判断的独立因素。该研究中作者发现，胶质瘤组织学分级直接影响患者总生存期，这与之前的研究[16-17]结果一致；另外，microRNA-200a在胶质瘤组织中的表达水平与患者的总生存期有关。

总之，在该研究中作者发现microRNA-200a在胶质瘤组织中表达增高，且与胶质瘤患者的预后有关，可作为评价胶质瘤预后的独立因素。但关于microRNA-200a在胶质瘤中的作用机制有待进一步探讨。

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MicroRNA-200a expression in glioma tissue and its value in predicting prognosis

JIYuchen1),LIYan1),HUJingxia1),ZHANGHongbo2)，ZUOHuancong1)

1)DepartmentofNeurosurgery,YuquanHospital,TsinghuaUniversity,Beijing1000492)DepartmentofNeurosurgery,XinhuaHospitalofHubeiProvince,Wuhan430015

Key wordsmicroRNA-200a;glioma;prognosis

中图分类号R730.264

通信作者#，男，1945年6月生，硕士，教授，主任医师，研究方向：颅脑疾病的临床与基础，E-mail:zuohc@tsinghua.edu.cn

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.01.027