褐鳟Salmo trutta血液生理生化指标的测定

谷伟，户国，孙鹏，白庆利，王炳谦

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室，黑龙江 哈尔滨 150070）

褐鳟Salmo trutta血液生理生化指标的测定

谷伟，户国，孙鹏，白庆利，王炳谦

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室，黑龙江 哈尔滨 150070）

选择健康的体质量约为336g的褐鳟Salmo trutta 20尾，雌雄各半，在常规环境中暂养观察10d，禁食12h后，尾静脉采血，利用BT-2100全自动血液分析仪测定16项血液生理值，利用DXC800型贝克曼全自动生化分析仪测定31项血清生化值，以建立2龄褐鳟的血液正常生理生化指标。结果表明：雌雄褐鳟血液生理指标差异不显著（P＞0.05），但血液中Mg、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）和直接胆红素（DBIL）含量及白球比（A/G）显著差异（P＜0.05），说明褐鳟生理指标不受性别影响，而某些生化指标却受性别的影响。

褐鳟；血液生理指标；血液生化指标

血液是动物生命的核心，有运输、调节机体温度、防御、调节渗透压和酸碱平衡的功能。鱼类血液指标是反映鱼体生理状态的标尺，与代谢、营养状况及疾病有密切关系。可根据血液生理生化指标评价鱼类的生理、营养及对环境的适应状况，在养殖中有助于预防和控制鱼类疾病[1-4]。大量研究表明：不同鱼类或同种鱼类的不同种群的血液学指标会因生物和环境条件的改变而变化[5-10]。因此，测定养殖条件下鱼类血液指标就显得尤为重要。

褐鳟Salmo trutta原产于欧洲、非洲北部和西亚地区[11]，在我国仅见于西藏亚东县，是十九世纪由英国人引种至此形成的种群，命名为亚东鲑[12]，1992年被列入西藏自治区二级重点保护水生动物[13]。褐鳟营养丰富，氨基酸种类齐全，是一种优质脂肪酸的食物源[14]，我国已对其养殖、遗传和生物学开展了相关研究工作[15-18]。本研究通过测定褐鳟的血液常规值范围，建立褐鳟的血液生理生化指标数据库，以期为褐鳟养殖和疾病防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验在中国水产科学研究院黑龙江水产研究所渤海冷水性鱼类试验站进行。选用体质健壮的2+龄雌雄褐鳟，体质量分别为（334±61.86）g和（338±46.32）g，体长分别为（28.77±1.28）cm和（29±1.31）cm。试验开始前各取10尾，于4m× 1.50m×0.60m、水深0.45m的水泥池中暂养10d，试验用水的pH 6.9～7.6，溶氧 9.8～11.5mg/L，水温6～8.5℃。

1.2 血样制备

禁食12h的试验鱼取出后，立即放入装有0.5mL/L的苯氧乙醇溶液中麻醉30min，经尾静脉采血8～9mL，立刻分装到采血管中。其中，3.5mL血样置于含有肝素钠的采血管中抗凝，1mL加入到含EDTA的采血管中抗凝，3mL血样于4℃下自然析出血清，经离心后取适量血清用于测定生化指标。

1.3 生理生化指标及其测定方法

参照徐革锋等[19]的方法测定16项生理指标：中性粒细胞比率（NE，%）、淋巴细胞比率（LYM，%）、单核细胞比率（MO，%）、嗜酸性细胞比率（EO，%）、嗜碱性细胞比率（BA，%）、红细胞数（RBC，1012/L）、血红蛋白含量（HGB，g/L）、红细胞压积（HCT，%）、红细胞体积（MCV，fl）、红细胞蛋白含量（MCH，pg）、红细胞蛋白浓度（MCHC，%）、红细胞分布宽度（RDW，%）、血小板数（PLT）、血小板压积P（CT）、血小板体积（MPV），和血小板分布宽度（PDW）。

参照张永泉等[20]的方法用DXC800型贝克曼全自动生化分析仪（美国BECKMAN公司）测定31种血液生化指标，具体参数如下：总蛋白（TP，g/L）、白蛋白（ALB，g/L）、球蛋白（GLB，g/L）、白球比A/G、谷丙转氨酶（ALT，IU/L）、谷草转氨酶（AST，IU/L）、谷草转氨酶/谷丙转氨酶（AST/ALT）、r-谷氨酪转肽酶（GGT，IU/L）、碱性磷酸酶（ALP，IU/L）、钾（K，mmol/L）、钠（Na，mmol/L）、氯（Cl，mmol/L）、钙（Ca，mmol/L）、磷（P，mmol/L）、镁（Mg，mmol/L）、尿素氮（BUN，mmol/L）、肌酐（CREA，μmol/L）、尿酸（URIC，μmol/L）、血浆渗透压（OSM，m OSM/L）、葡萄糖（GLU，mmol/L）、血淀粉酶（PAMY，IU/L）、总胆红素（TBIL，μmol/L）、直接胆红素（DBIL，μ mol/L）、间接胆红素（IBIL，μmol/L）、甘油三酯（TG，mmol/L）、总胆固醇（CHOL，mmol/L）、高密度脂蛋白（HDL，mmol/L）、低密度脂蛋白（LDL，mmol/L）、乳酸脱氢酶（LDH，IU/L）、肌酸激酶（CK，IU/L），和a-羟丁酸脱氨酶（HBDH，IU/L）。

1.4 血液流变学指标测定

在室温条件下，选用10s-1、60s-1和150s-1三个切变率（γ）测定全血粘度ηb。

1.5 数据分析

试验数据用平均值±标准差（x±SD）表示，用SAS9.0统计软件处理分析，利用独立样本的t检验，采用Duncan多重比较进行两两比较，当P＜0.05时差异显著，P＜0.01时差异极显著。

2 结果与分析

2.1 褐鳟血液的生理指标

雌雄褐鳟血液生理指标差异不显著（P＞0.05），其中雄褐鳟的HGB、MCH和MCHC值高于雌性，而雌性褐鳟仅PLT高于雄性（表1）。

2.2 褐鳟血液的生化指标

雌雄褐鳟血液生化指标见表2。由表2可知：雌雄个体的Mg、TP、ALB、GLB、A/G和DBIL指标呈显著性差异（P＜0.05），其余指标差异不显著（P＞0.05）。

2.3 褐鳟血液流变学指标

雌雄褐鳟在10s-1、60s-1和150s-1三个切变率下的全血粘度曲线（图1），随着切变率的增加呈典型的对数模式降低，雌雄褐鳟方程分别为：

y=12.23+63.65/x，R2=0.9404；

y=13.79+76.83/x，R2=0.9302。

从图1中看出，在不同切变率下，雌褐鳟血液的全血粘度值低于雄性个体。

图1 雌雄褐鳟在不同切变率下的全血粘度Fig.1 Blood viscosity of male and female brown trout Salmo truttas under different shearing rates

表1 雌雄褐鳟血液生理指标比较Tab.1 Comparison of blood physiological indices between male and female brown trout Salmo truttas

表2 雌雄褐鳟血液生化指标比较Tab.2 Comparison of serum biochemical indices between male and female brown trout Salmo truttas

3 讨论

3.1 褐鳟血液生理指标

目前认为，鱼类血液的某些性状指标与其活动能力及食性密切相关，大多数情况下，活动能力强的鱼类高于活动能力弱的鱼类[21]。本研究中，褐鳟血液生理特点与其活动特性也表现出了上述规律。褐鳟泳动迅捷，喜逆流，可离水1m多高，颇具垂钓价值。从表1可知，雄褐鳟的HGB、MCH和MCHC三个指标高于雌性，而雌褐鳟仅PLT指标高于雄性，但差异均不显著，说明褐鳟性别对血液生理指标没有显著影响。通常情况下，鱼类血液中的血红蛋白数量与鱼类耐低氧能力和水环境中的含氧量有关[22]。美洲红点鲑Salvelinus fontinalis血红蛋白含量为（118.60±14.14）g/L，红细胞血红蛋白为（106.85±12.74）pg，平均红细胞血红蛋白浓度为（79.93±8.78）%[23]。虹鳟Oncorhynchus mykiss血红蛋白含量为（101.85±3.53）g/L[19]。山女鳟 Oncorhynchus masou血红蛋白含量为（107.33±23.00）g/L，平均红细胞血红蛋白为（235.12±76.32）pg[24]。本研究中，褐鳟血红蛋白含量为45.4～66.55g/L，平均红细胞血红蛋白为63.42～95.66pg，平均红细胞血红蛋白浓度为153.2%～179.88%。褐鳟的红细胞数量及血红蛋白含量较低，耐低氧能力较其他几种冷水性鱼类差，这与实际情况一致。所以，在褐鳟养殖中要注意保证水中的溶氧量，尤其在活鱼运输过程中。与某些鱼类相似的是，褐鳟白细胞中的淋巴细胞数量比例较大（86.84%～88.81%），单核细胞（6.13%～6.32%）和嗜中性粒细胞（3.67%～5.1%）次之，嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞占比最小。淋巴细胞数量比例较大时有三种情况，即嗜中性粒细胞高，单核细胞低；单核细胞高，嗜中性粒细胞低；嗜中性粒细胞和单核细胞均高而淋巴细胞偏低[21]。本研究中，褐鳟血液白细胞的分类计数中单核细胞高，嗜中性粒细胞低。

3.2 褐鳟血液的生化指标

众所周知，血液中各种无机离子的浓度对鱼体渗透压和血液pH的调控及应激反应有重要作用。本研究结果显示，雌性褐鳟仅Mg2+含量显著高于雄性褐鳟，其他离子浓度水平雌雄间无显著性差异，无机离子浓度水平与尾崎久雄研究结果[25]基本一致。

鱼体血糖（GLU）水平为衡量机体营养状况的指标，与生长速度有直接关系，血糖含量高，意味着鱼摄食积极、生长迅速、运动活泼、健康状况良好[26]。本研究发现，雌雄褐鳟的血糖含量无显著性差异，高于其他鲑科鱼类，这与褐鳟机警、快速泳动的生活特性相一致。

雌雄褐鳟的TP、ALB、GLB、A/G和DBIL指标差异显著（表2）（P＜0.05），这表明褐鳟血液生化指标在正常情况下雌雄有别，以生化指标的变化作为疾病诊断的依据时，不能以单一性别判断。同时，也可利用血液指标值判断鱼的性别。球蛋白作为鱼类的免疫成分，增高意味着免疫力增强。雌雄褐鳟的球蛋白含量分别为（25.8±7.11）g/L和（10.9±5.44）g/L，且差异显著，说明雌性个体较雄性个体抗性更强，这与养殖中的观察一致，也可能与性腺发育中蛋白质合成加快有关。

综上所述，本研究结果与养殖实践中雌雄褐鳟的表现基本一致。本实验获得的生理生化数据作为褐鳟血液常值，可为疾病诊断、防控和养殖实践提供参考。

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Physiological and Biochemical Indices of Brown Trout Salmo trutta

GU Wei,HU Guo,SUN Peng,BAI Qing-li,WANG Bing-qian
（National and Local Joint Engineering Laboratory of Freshwater Fish Breeding,Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China）

The normal physiological（16 items）and biochemical（31 items）indices were determined in blood sampled from caudal veins of twenty healthy two-year old brown trout Salmo trutta with body weight of about 336g（ratio of male to female=1:1）cultured in conventional environment for 10 days by an automatic animal analyzer and by automatic Beckmann-DXC800 BT-2100 analyzer after the fish were fasted for 12 h.The results showed that there were no significant differences in blood physiological indices between male and female（P＞0.05）.However,significant differences in serum biochemical indices including levels of Mg,total protein（TP）, albumin（ALB）,globulin（GLB）,and direct bilirubin（DBIL）and albumin/globulin（A/G）value were observed between male and female（P＜0.05）,suggesting that blood physiological indices between male and female be coincident basically,being not affected by gender.The male and female brown trout,however,had some different serum biochemical indices.

Salmo trutta;physiological index;biochemical index

S965.1

A

1005-3832（2016）05-0012-05

2016-03-25

公益性行业（农业）科研专项（201403012）；农业部948引进项目（2014-Z57）.

谷伟(1978-)，男，助理研究员，硕士，从事冷水鱼遗传育种研究.E-mail:guwei@hrfri.ac.cn

王炳谦，研究员.E-mail:bingqianwang@yeah.net