养血解毒汤对咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损的干预作用*

阮智通，　底婷婷，　王　燕，　赵京霞，　解欣然，　王明星，　谢湘江，　蒙玉娇，　李　萍

(首都医科大学附属北京中医医院，银屑病中医临床基础研究北京市重点实验室，北京市中医研究所，北京 100010)



养血解毒汤对咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损的干预作用*

阮智通，底婷婷，王燕，赵京霞，解欣然，王明星，谢湘江，蒙玉娇，李萍△

(首都医科大学附属北京中医医院，银屑病中医临床基础研究北京市重点实验室，北京市中医研究所，北京 100010)

[摘要]目的： 观察养血解毒汤对咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损的干预作用。方法:STAT3转基因小鼠24只，随机分为正常对照组、模型组、养血解毒汤组和甲氨蝶呤组，每组6只，采用外用咪喹莫特诱导皮肤银屑病样模型。分别观察皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index, PASI)，光镜下观察皮损组织形态学变化和表皮层厚度；采用皮肤水分油分测试笔检测小鼠背部皮肤水分和油分含量；免疫组织化学法检测皮损中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和T淋巴细胞表面标志CD3表达；采用实时荧光定量PCR技术检测皮损Th17类细胞因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)mRNA表达；采用Western blot检测皮损STAT3通路蛋白(STAT3、p-STAT3、JAK3、p-JAK3和SOCS3)的表达水平。结果: (1)养血解毒汤组PASI评分明显低于模型组，HE染色观察发现养血解毒汤组皮损表皮增生较模型组少，角化不全的细胞明显减少，皮肤厚度降低(P<0.01)；(2)养血解毒汤组皮损油分和水分含量均明显高于模型组(P<0.05)；(3)养血解毒汤组PCNA阳性表达远低于模型组(P<0.01)；(4)养血解毒汤组脾脏重量低于模型组(P<0.05)；(5)养血解毒汤组Th17相关因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)表达水平均低于模型组，此外，p-STAT3和p-JAK3表达量亦低于模型组，而SOCS3的表达高于模型组。结论: 养血解毒汤可能通过抑制STAT3的磷酸化，减少Th17相关因子(IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt)的分泌，由此改善咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损改变。

[关键词]银屑病; 养血解毒汤; 咪喹莫特; STAT3信号转导通路

银屑病一种常见的慢性炎症增生性皮肤病，易复发、难治愈，属于自身免疫性疾病。辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)的活化参与了其中的病理生理过程，而信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路的激活在这一过程中有重要的作用，是银屑病发病过程中重要的信号转导与转录激活因子[1]。养血解毒汤(Yangxue-Jiedu decoction, YXJD decoction)是北京中医医院在皮肤病名家赵炳南老先生治疗银屑病的经验方基础上优化而得，在随机对照的临床研究证实该方治疗银屑病血燥证有较好的疗效，有效率为67.9%[2]，但其作用机制尚不明确。本实验在STAT3转基因小鼠上，经咪喹莫特诱导银屑病样皮损，观察养血解毒汤对Th17细胞活化及STAT3的干预作用，探究养血解毒汤的作用机制和药物靶点，为其临床应用提供依据，为药物优化和进一步开发提供理论支持。

材料和方法

1动物

C57BL/6J野生小鼠，体重18～20 g，由华阜康生物科技股份有限公司提供。在无特定病原体(specific pathogen free,SPF)三级动物室无菌饲料喂养。经构建质粒、纯化表达载体、显微注射后制备STAT3转基因小鼠模型。离乳3周后剪尾检测鉴定。选取STAT3转基因小鼠24只(首都医科大学附属北京中医医院北京市中医研究所动物房制备)，雌雄各半，体重18～20 g。

2主要试剂

养血解毒汤所含土茯苓、鸡血藤、当归、丹参、玄参、板蓝根、草河车、车前子、生地、麦冬等由首都医科大学附属北京中医医院中药房提供，制剂室负责质量控制，按成人剂量换算为小鼠用量制备水煎剂。咪喹莫特乳膏(四川明欣药业有限责任公司)；甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)片购自上海信谊药厂有限公司，使用时溶于纯净水(1 mg/kg)；兔和鼠二步法检测试剂盒、3% H2O2去离子水、DAB显色液(中杉金桥生物技术有限公司)；增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)抗体、CD3单克隆抗体(Abcam)；TRIzol总RNA提取试剂(天根生化科技有限公司)；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR® Premix Ex TaqTMII、ROX plus、DL2000 DNA Marker(TaKaRa)；白细胞介素17A(interleukin-17A,IL-17A)、IL-17C、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid acid-related orphan receptor γt,RORγt)和β-actin引物合成(Invitrogen)；山羊抗兔、小鼠IgG(H+L)和GAPDH鼠单抗(天德悦)；蛋白抽提试剂和BCA蛋白定量试剂盒(赛诺博)；STAT3单克隆抗体、磷酸化STAT3(p-STAT3)单克隆抗体、Janus激酶3 (Janus kinase 3,JAK3)单克隆抗体、磷酸化JAK3(P-JAK3)单克隆抗体和细胞因子信号阻抑蛋白3 (suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)单克隆抗体(CST)。

3模型制备及分组

参考Leslie等模型制备方法。实验前24只STAT3转基因小鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(80 mg/kg)，背部去毛后，随机分为正常对照组、模型组、养血解毒汤组和甲氨蝶呤组(阳性药物对照组)。各组小鼠每天拍照,进行银屑病样皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index，PASI) 评分，除正常对照组外各组均在背部皮肤涂抹5%咪喹莫特乳膏42 mg，同时模型组每天口服纯净水0.2 mL，养血解毒汤组每天口服养血解毒汤水煎剂0.2 mL，甲氨蝶呤组每天口服甲氨蝶呤片水溶液0.2 mL，持续6 d。第7天检测小鼠背部皮肤水分和油分含量，颈椎脱臼处死后取背部皮肤，三等分后分别用于病理组织检测、Western blot法检测和实时荧光定量PCR检测；取脾脏称重并记录。

4检测指标与方法

4.1皮损大体观察以及PASI评分实验期间每天对小鼠进行拍照和评分。评分参考人类PASI评分标准给予小鼠相应红斑、鳞屑及浸润增厚程度的积分，将三者积分相加得到总积分。

4.2皮损表皮屏障功能检测采用皮肤水分油分测试笔，在第7天对小鼠背部皮肤水分和油分进行检测评价。在温度为20～25 ℃，空气相对湿度为40%～60%环境下，皮肤与测量仪器紧密接触，记录测量结果。

4.3皮损病理改变采用苏木精-伊红(HE) 染色观察小鼠皮肤经4%甲醛固定、常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，经HE染色，观察皮肤组织学改变，并在400倍镜下测量表皮厚度。

4.4皮损角质形成细胞的增殖细胞核抗原表达取各组小鼠背部皮肤，经4%甲醛固定、常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋。5 μm厚连续切片，免疫组化染色观察PCNA的表达。石蜡切片经脱蜡水化、过氧化氢孵育，滴加PCNA抗鼠单克隆抗体，DAB显色后封片。PCNA表达阳性者在表皮基底层见清晰棕黄色颗粒沉积为准。在400倍镜下，每例标本随机选取5个视野，观察每例标本皮肤组织学改变，记录5个不同区域PCNA阳性细胞表达的数据。

4.5小鼠脾脏的重量第7天观察小鼠脾脏组织，电子天平称取脾脏的重量，并记录数据。

4.6皮损表皮与真皮中CD3的表达小鼠背部皮肤，经4%甲醛固定、常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋。5 μm厚连续切片，免疫组化染色观察CD3的表达。过程同上，采用CD3抗鼠单克隆抗体，DAB显色后封片。CD3表达阳性者在表皮和真皮见清晰棕黄色颗粒沉积。在400倍镜下，每例标本随机选取5个视野，观察每例标本皮肤组织学改变，记录5个视野CD3阳性细胞表达的数据。

4.7皮损IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt mRNA的检测取各组小鼠背部皮肤，采用TRIzol总RNA提取试剂进行样本RNA提取，采用PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser进行cDNA反转录，用ABI 7500型荧光定量PCR仪扩增，扩增条件为:95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s,60 ℃ 40 s, 45个循环，采用2-ΔΔCt法进行数据的相对定量分析。具体引物序列见表1。

4.8皮损STAT3相关通路蛋白(STAT3、p-STAT3、JAK3、p-JAK3和SOCS3)表达取小鼠背部皮肤，采用蛋白抽提试剂盒提取皮损组织蛋白，采用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。经电泳、电转、封闭、加入STAT3、p-STAT3、JAK3、p-JAK3、SOCS3和GAPDH单克隆抗体，反应信号经Odssey远红外成像仪检测，最后换算为灰度值表示。

F: forward; R: reverse.

5统计学处理

用SPSS 16.0统计软件进行分析。数据均采用均数±标准差(mean±SD)表示，多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1养血解毒汤对缓解咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损改变

观察各组小鼠背部皮肤可见：与正常对照组相比，模型组皮肤出现红斑、鳞屑和浸润，产生类似银屑病样皮损。随着药物作用的持续，模型组皮损从第2～3天开始出现，随着时间的推移，皮损日益严重，红斑由淡粉色斑点变为大面积深红色斑块、鳞屑增多增厚、皮肤浸润明显。养血解毒汤组和甲氨蝶呤组皮损与模型组相比同期的皮损症状均明显减轻，皮肤较光滑，鳞屑较少，红斑色浅，浸润增厚较轻，见图1。

Figure 1.Gross observation of mice at day 7 of treatment (A) and PASI scores of mouse skin lesions induced by imiquimod (B). Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

图1各组小鼠第7天皮损大体表现和各组小鼠皮损PASI评分趋势

HE染色显示：正常对照组皮肤表皮层薄，仅2～3层，真皮炎症细胞稀疏。模型组表皮增生明显，表皮层达到8～10层，伴有角化不全，表皮棘细胞层增厚，基底细胞核有丝分裂旺盛，形成类似银屑病样的皮损。养血解毒汤组皮损中表皮层较模型组薄，约3～5层，角化不全的细胞明显减少，表皮层厚度明显低于模型组。MTX组的作用与养血解毒汤相似，见图2。通过测量表皮层的垂直厚度发现：模型组表皮层增厚明显，约为正常对照组小鼠表皮厚度的4～5倍，养血解毒汤组表皮增厚程度低，与模型组比较有显著差异(P<0.01)，养血解毒汤组表皮增厚程度与甲氨蝶呤组相似，见表2。

Figure 2.Histological changes of skin lesions of mice at day 7 of treatment (HE staining,×400). △ indicates parakeratosis.

图2各组小鼠第7天皮损组织学改变

表2各组小鼠第7天表皮层厚度比较

Table 2.Comparison of epidermis thickness in skin lesions at day 7 of treatment (μm. Mean±SD.n=6)

**P<0.01vsmodel.

2养血解毒汤可改善咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损表皮屏障功能异常

根据检测结果发现模型组小鼠皮肤的水分与油分含量均明显低于正常对照组，而养血解毒汤组小鼠皮损明显改善，油分与水分含量均较模型组升高，差异有统计学意义。甲氨蝶呤组皮肤的油分与水分含量与模型组比较差异无统计学意义，见表3。

3养血解毒汤显著抑制咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损角质形成细胞增殖分化异常

PCNA阳性表达位于表皮基底细胞。正常对照组小鼠皮肤仅基底层细胞增殖明显，约1～2层，呈线状排列；模型组阳性细胞层数明显增多，达到5～6层，而养血解毒汤组着色细胞表达少于模型组，约有2～3层，接近甲氨蝶呤组，与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)，见图3、表4。

表3各组小鼠皮肤第7天油份与水份含量比较

Table 3.Comparison of oil and water components in skin lesions at day 7 of treatment (%. Mean±SD.n=6)

*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

4养血解毒汤可降低咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠脾的重量

结果发现模型组脾重高于空白组(P<0.01)，养血解毒汤组和甲氨蝶呤组小鼠脾的重量都低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

Figure 3.PCNA expression of skin lesions at day 7 of treatment (immunohistochemical staining，×400).

图3各组小鼠治疗7 d 皮损PCNA 表达

表4各组小鼠第7天表皮皮损高倍镜视野PCNA表达个数

Table 4.Comparison of the number of PCNA under high-power microscope (Mean±SD.n=6)

**P<0.01vsmodel.

5养血解毒汤显著抑制咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损CD3+T细胞的表达

免疫组化染色显示：正常对照组小鼠皮肤CD3+T细胞的表达水平低于模型组，二者有显著性差异(P<0.01)，养血解毒汤组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤CD3+T细胞的表达水平低于模型组，差异有统计学意义(P<0.01)，见图4。

表5各组小鼠第7天脾的重量比较

Table 5.Comparison of the weight of spleen at day 7 of treatment (g. Mean±SD.n=6)

*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

Figure 4.CD3 expression of skin lesions at day 7 of treatment (immunohistochemical staining，×400).Mean±SD.**P<0.01vsmodel. Arrow indicates positive expression.

图4各组小鼠治疗7 d皮损CD3表达

6养血解毒汤显著抑制咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损中Th17类细胞因子的分泌

经咪喹莫特诱导的STAT3转基因阳性小鼠银屑病样皮损中IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt的相对表达量均高于正常对照组，而养血解毒汤组小鼠皮损中Th17相关细胞因子基因的相对表达量均有所降低，见图5。

7养血解毒汤可显著抑制咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损中STAT3通路相关蛋白表达

结果显示模型组STAT3的表达量与正常对照组相似，但p-STAT3和JAK3的表达量均高于正常对照组；此外，SOCS3的表达水平也高于正常对照组。相对于模型组，养血解毒汤在p-STAT3、JAK3和p-JAK3的表达较少，STAT3的表达水平与模型组相似，SOCS3的表达水平高于模型组，见图6。

讨论

银屑病是常见的慢性炎症增生性皮肤病，易复发，可造成全身系统损害，其主要的组织病理学改变为角质形成细胞异常增生、角化不全、角化过度、血管生成和炎性细胞浸润。银屑病病因和发病机制尚未完全明确，目前仍无特效治疗药物和有效根治方法，严重影响患者的生活质量，是国内外重点关注的皮肤疾病之一。

大量研究发现Th17细胞在银屑病发病中起着重要作用，其分泌的细胞因子如IL-17、IL-22等，参与了银屑病的免疫发病过程[3]。在银屑病血热证和血瘀证患者中IL-17、IL-22、IL-6的表达明显升高[4]，患者外周血中IL-17水平也高于正常对照组[5]。IL-23诱导小鼠小鼠皮肤可引起IL-17高表达，产生类似人银屑病的皮损症状[6]。此外临床观察发现使用拮抗IL-17受体的药物能明显改善斑块型银屑病的临床症状[7]。STATs为胞质蛋白家族, 参与将细胞外信号转运至胞核内[8]。研究发现银屑病皮损中STAT3处于高表达状态，高表达STAT3通路的K5. STAT3C转基因小鼠可自发出现类似银屑病样皮损改变[9]，另外，STAT3通路可调控Th17细胞的分化，进而影响银屑病的发病进程[10]，因此，我们认为在银屑病发病过程中，Th17细胞及其细胞因子起到重要作用，而STAT3通路则参与Th17细胞的分化与分泌。

Figure 5.Comparison of the expression of IL-17A, IL-17C, IL-22 and RORγt mRNA in skin lesions at day 7 of treatment. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

图5各组小鼠第7天皮损IL-17A、IL-17C、IL-22和RORγt的相对表达量

Figure 6.The expression of STAT3, p-STAT3, JAK3, p-JAK3 and SOCS3 in skin lesions at day 7 of treatment. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

图6各组小鼠第7天皮损STAT3相关通路的蛋白表达量

咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损模型是银屑病的经典动物模型之一。咪喹莫特是Toll样受体激动剂，可激活小鼠体内的Toll样受体，启动机体的炎症免疫应答，产生类似银屑病样皮损的表现[11]。我们前期研究[12]发现咪喹莫特诱导的小鼠模型在前8 d的皮损症状和病理学特征以及细胞因子改变都与银屑病相似，皮损处Th17细胞的活化参与了该模型皮损的产生。我们进一步转入STAT3基因，观察STAT3高表达小鼠在咪喹莫特诱导下银屑病样皮损改变，结果显示该模型可产生更接近人类银屑病的改变，例如表皮增殖导致的指状下沿、角化不全和角化过度、微脓肿的增多、T淋巴细胞尤其是Th17细胞的炎症浸润和细胞因子的释放，此外，该模型皮损中IFN、IL-6和IL-17都高于咪喹莫特诱导的野生型小鼠；同时IL-4低于诱导的野生型小鼠。这提示咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样的皮损在分子水平、细胞水平和组织病理改变比单独咪喹莫特诱导的小鼠皮损模型严重，且靶点明确。尽管该模型不能完全代表典型的血燥证模型，但是对于中药的药理作用环节也不失为一个合适的选择。

养血解毒汤是由北京中医医院参考赵炳南老先生宝贵经验，联合北京地区的多家医院,在深入研究血燥证的基础上，达成专家共识，形成银屑病血燥证的优化方案。临床研究[13]发现应用临床应用养血解毒汤治疗血燥型银屑病患者，总有效率达63.63%，临床主要症状如鳞屑、瘙痒等均得到有效缓解；动物实验[14]发现养血解毒汤能改善咪喹莫特诱导的BALB/c小鼠银屑病样皮损；这些都提示养血解毒汤治疗银屑病可靠有效。养血解毒汤以养血的鸡血藤、解毒的土茯苓为君药，佐以当归、丹参养血润肤，板蓝根、草河车、玄参祛湿解毒，体现了养血活血、祛湿解毒的主要治则。养血解毒汤中鸡血藤性温，味苦、甘，具有养血活血通络的功效。现代药理研究发现鸡血藤中主要含有黄酮类、酚类、三萜及甾醇等类化合物[15]，鸡血藤中有效成分黄酮有促进造血功能的作用[16]，同时对异常免疫功能具有双向调节作用[17]，我们的研究还发现鸡血藤黄酮有效部位SSCE具有抗肿瘤作用，与诱导肿瘤细胞发生线粒体细胞凋亡有关[18]，表明鸡血藤具有多方面的作用；土茯苓味甘、淡,性平，具有解毒利湿、凉血解毒、祛风止痛的功效。其中主要成分有落新妇苷、异落新妇苷、胡萝卜苷、花旗松素等[19]，我们的实验发现土茯苓的有效成分落新妇苷可通过Jak/STAT3信号通路调控Th17细胞的分化，降低IL-17A、IL-10等炎症因子的分泌，改善咪喹莫特诱导的BALB/c小鼠银屑病样皮损[20]；那么养血解毒汤治疗银屑病中的养血、解毒作用是否与中药及其主要成分对血液系统、免疫系统调节作用有关？

本实验发现养血解毒汤可降低银屑病样皮损的PASI评分，说明养血解毒汤能改善咪喹莫特诱导的STAT3转基因小鼠银屑病样皮损红斑、鳞屑、浸润等典型银屑病改变。角质形成细胞的异常增殖与活化是银屑病皮损主要病理表现之一，研究中发现养血解毒汤可显著降低表皮层厚度，PCNA所反映的增殖的细胞数减少也提示了养血解毒汤抑制角质形成细胞异常增殖的作用。同时皮损处皮肤水分和油分含量趋向正常，提示养血解毒汤调节了角质形成细胞异常分化，促进细胞角质化进而维持表皮细胞的屏障功能。这可能与该方中养血中药的作用有关。

目前研究认为，角质形成细胞的异常改变主要是由于浸润的T淋巴细胞及其分泌的细胞因子介导的[21]。实验中模型组STAT3转基因小鼠皮损中CD3+T细胞明显高于正常，脾脏作为机体重要的外周免疫器官，在模型小鼠体内显著增大，提示该模型发生的全身系统免疫反应。养血解毒汤可减轻脾脏的重量，降低CD3的表达量，提示养血解毒汤可减轻STAT3转基因小鼠全身免疫反应，降低皮损处的炎症程度，由此提示养血解毒汤解毒功效可能与该方抑制机体，尤其是皮损部位的炎症程度有关。Th17细胞分泌的细胞因子如IL-17、IL-22等在银屑病发病中起到关键作用。实验发现养血解毒汤可有效降低IL-17A、IL-17C和IL-22在皮损处的相对表达量，提示养血解毒汤的作用机制可能通过降低Th17类细胞因子的分泌有关。这也是我们今后将要深入研究的重点。

银屑病发病过程中STAT3通路参与调控Th17类细胞因子的分泌，通过对STAT3通路相关蛋白表达的检测发现养血解毒汤减少p-STAT3和p-JAK3蛋白表达，表明养血解毒汤可一定程度上抑制STAT3通路的异常活化；由于转基因小鼠高表达STAT3基因，实验组小鼠皮损中STAT3的表达量相似；SOCS3是STAT3通路的下游蛋白，可负调控STAT3通路的活化。实验发现养血解毒汤组SOCS3的表达显著高于模型组，提示养血解毒汤可能是通过促进SOCS3的分泌，抑制STAT3通路的磷酸化，降低Th17类细胞因子的分泌，从而达到治疗银屑病的目的。

综上所述，养血解毒汤可抑制角质形成细胞的过度增殖与分化，改善STAT3转基因小鼠银屑病样皮损病理表现；减轻STAT3转基因小鼠全身免疫反应，降低皮损处的炎症浸润程度；其作用机制可能是通过抑制STAT3通路的磷酸化，促进SOCS3的分泌，降低Th17类细胞因子如IL-17A、IL-17C和IL-22的分泌，从而达到治疗银屑病的目的。另外，养血解毒汤的养血作用可能与保持皮肤组织中水分和油分含量，改善银屑病皮损屏障功能有关；解毒作用可能与抑制T淋巴细胞表达，降低IL-17A、IL-22和IL-17C的分泌有关。本研究为临床使用养血解毒汤治疗银屑病提供理论依据，为今后进一步研究提供证据与方向。

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(责任编辑： 林白霜， 罗森)

Effects of Yangxue-Jiedu decoction on imiquimod-induced psoriasis-like lesions in STAT3 transgenic mice

RUAN Zhi-tong, DI Ting-ting, WANG Yan, ZHAO Jing-xia, XIE Xin-ran, WANG Ming-xing, XIE Xiang-jiang, MENG Yu-jiao, LI Ping

(BeijingInstituteofTraditionalChineseMedicine,BeijingKeyLaboratoryofClinicandBasicResearchwithTraditionalChineseMedicineonPsoriasis,BeijingHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoCapitalMedicalUniversity,Beijing100010,China.E-mail:liping411@126.com)

[KEY WORDS]Psoriasis; Yangxue-Jiedu decoction; Imiquimod; STAT3 signaling pathway

[ABSTRACT]AIM: To observe the effects of Yangxue-Jiedu (YXJD) decoction on imiquimod-induced psoriasis-like lesions inSTAT3 transgenic mice.METHODS:STAT3 transgenic mice (n=24) were randomly divided into 4 groups: control group (using purified water for oral administration), model group (topical 5% imiquimod 42 mg and using purified water for oral administration), YXJD groups (topical 5% imiquimod 42 mg and using YXJD decoction for oral administration), and methotrexate (MTX) group (1 mg/kg MTX solution for oral administration, with the same topical imiquimod as model group). On day 7, the skin lesions were collected for examination. The lesions were evaluated according to the psoriasis area and severity index (PASI). The skin barrier function was evaluated by assessing oil and water components in the skin. The inflammation of psoriasis-like lesions was assessed by histological method. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and CD3 was assessed by immunohistochemical staining. The mRNA expression of IL-17A, IL-17C, IL-22 and RORγt was detected by real-time PCR. The levels of JAK/STAT3 pathway-related proteins in isolated T cells were determined by Western blot.RESULTS: Administration of YXJD decoction inhibited imiquimod-induced keratinocyte proliferation and infiltration of CD3+T cells in psoriatic lesions, and ameliorated the epidermal barrier by up-regulation of the oil and water components in psoriatic lesions. Meanwhile, administration of YXJD decoction improved the systemic immune responses by reducing the weight of the spleen. The inflammatory cytokines IL-17A, IL-17C, IL-22 and RoRγt, and the levels of JAK/STAT3 pathway-related proteins STAT3, p-STAT3, JAK3 and p-JAK3 were decreased by administration of YXJD decoction.CONCLUSION: YXJD decoction likely alleviates imiquimod-induced psoriasis-like lesions in theSTAT3 transgenic mice by inhibiting the phosphorylation of STAT3, and reducing the expression of IL-17A, IL-17C, IL-22 and RORγt.

[文章编号]1000- 4718(2016)06- 1091- 08

[收稿日期]2016- 01- 22[修回日期] 2016- 04- 29

*[基金项目]国家自然科学基金资助项目(No. 81573974)；北京市科委十病十药资助项目(No. Z141100002214015)

通讯作者△Tel: 010-52176679; E-mail: liping411@126.com

[中图分类号]R275; R363

[文献标志码]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.06.022