薯莨鞣质粗提物体外抗霉菌作用及对人肿瘤细胞生长的影响

邓先扩　陈　明　许义红　张林甦*

（贵州省黔南民族医学高等专科学校药学教研室，贵州 都匀 558000）

· 实验研究 ·

薯莨鞣质粗提物体外抗霉菌作用及对人肿瘤细胞生长的影响

邓先扩陈明许义红张林甦*

（贵州省黔南民族医学高等专科学校药学教研室，贵州 都匀 558000）

目的 考查薯莨水提物的化学成分及其鞣质粗提物的体外抗霉菌等药理作用。方法 经典鉴定方法鉴定薯莨的化学成分；纸片法考查薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉的作用；MTT法检测其对人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780、人胃癌细胞SGC-7901生长的影响。结果 薯莨水溶性成分包括蛋白类、糖类或苷类、鞣质和有机酸等，未检测到生物碱；薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，对黑霉没有抑制作用；薯莨鞣质粗提物在体外对人肺癌细胞A549和人胃癌细胞SGC7901有刺激作用，对人卵巢癌细胞A2780生长没有影响。结论 薯莨鞣质粗提物具有一定的抗霉菌活性，对某些肿瘤细胞有刺激作用，作用机制还有待深入研究。

薯莨；成分分析；细菌；癌

薯莨（Dioscorea cirrhosa Lout.）是薯蓣科薯蓣属的一种多年生藤本野生植物，分布在我国中、南部地区，药用其块茎。薯莨的化学成分主要是鞣质，还含有酚类，苷类及蛋白质、糖类、黏液等成分，具有止血、抗菌、抗氧化和清热化瘀等功效，也有抗辐射和延缓衰老作用。但有关其药理活性研究也仅基本上局限于传统的民间用法，有效部位、有效成分尚不明确［1］。为了深入研究薯莨的药理活性，我们对其鞣质粗提物的抗霉菌、对肿瘤细胞生长的影响作用进行了研究。

1　资料与方法

1.1资料

1.1.1药材：薯莨（干药材）由贵州青草堂药业有限责任公司提供，品种鉴定由贵阳医学院药学院覃容贵教授完成。

1.1.2供试菌种及肿瘤试剂：大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉菌种由贵州大学生命学院韩丽珍副教授惠赠。人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780、人胃癌细胞SGC-7901由中国医学科学院药用植物研究所药理中心提供。

1.1.3试剂与仪器：YX-400智能型全自动不锈钢立式电热高压灭菌锅，常州诺基有限公司生产；DHP-2000型电热恒温培养箱，天津市华北试验有限公司；RE-52AA型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；HWS-24型电热恒温水浴锅，上海一恒科技仪器有限公司；VERT.A1倒置显微镜，ZEISS公司；HF 151UV二氧化碳培养箱，由上海力申科学仪器有限公司；VICTOR X3型酶标仪，PerkinElmer公司；无菌操作台，江苏苏州洁净技术研究所。噻唑蓝（MTT）和胰蛋白酶为Sigma公司产品，PRMI-1640培养基GIBCO公司产品，胎牛血清杭州四季青公司产品，胰蛋白胨，酵母提取物，琼脂粉为国产微生物培养用，氯化钠、乙酸锌、氨水、氯化铵、乙二胺四乙酸二钠（EDTA·2Na）、铬黑T、乙醇等其余试剂均为国产分析纯。

1.2方法

1.2.1薯莨水提物性质鉴定：薯莨块10 g磨粉加水浸没，浸泡过夜，得水提物，按常规方法检测氨基酸、蛋白质，糖类、多糖、苷、皂苷、有机酸、生物碱、鞣质等项目。

1.2.2提取与分离：薯莨块100 g粉碎成粗粉，加75%的酒精250 mL， 4 ℃下浸泡2 d，过滤，得乙醇滤液220 mL，用旋转蒸发仪50 ℃浓缩，60 ℃水浴过夜，得干燥的深红色鞣质粗提物17.33 g。

1.2.3测定鞣质含量：采用络合滴定法［2］测定，利用锌离子只与鞣质反应的特性，用锌离子沉淀溶液中的鞣质，剩余锌离子以铬黑T作指示剂，用EDTA-Na溶液滴定。称取样品适量50 mg，置100 mL量瓶中，精密移取配制好的0.05 mol/L的锌滴定液10 mL及氨一氯化铵缓冲溶液（pH=10）10 mL，加入100 mL量瓶中，以蒸馏水定容至100 mL，超声3 min，待沉淀稳定后过滤，精密吸取续滤液10 mL，置锥形瓶中，加配制好的氨一氯化铵缓冲溶液（pH=10）10 mL、铬黑T指示剂适量，用0.05 mol/L的EDTA-Na滴定液滴定至溶液显蓝绿色，即为终点。测得鞣质纯度为78.4%。

1.2.4抗霉菌实验

1.2.4.1薯莨鞣质粗提物用水溶解，配制成高剂量（100 mg/mL）和低剂量（25 mg/mL）组。

1.2.4.2菌液的制备：将大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉菌种的单个菌落分别接种于培养基中，37 ℃恒温增菌培养18～24 h，用无菌水配制成1×106～1×107CFU/mL的菌液（OD590=0.6）。

1.2.4.3药敏纸片法：制作含有不同浓度薯莨且直径为10 mm的药敏纸片。将不同的菌种100 µL涂布于琼脂培养基，当培养基表面干燥后，将纸片贴于培养基表面，37 ℃培养24 h后，观察并测定抑菌环直径。

1.2.5体外抗肿瘤实验：按文献方法培养细胞至对数生长期，调节细胞浓度为1×105个/mL，各取100 µL加入96孔板，置5% CO2培养箱37 ℃培养48 h，加入不同浓度供试品，将薯莨鞣质用DMSO溶解成高剂量100 µg/mL和低剂量20 µg/mL组，每组设3个平行，继续培养48 h，每孔加入10 µL 0.5 g/L MTT，4 h后终止反应，倾弃培养液，加入100 µL DMSO，酶标仪上490 nm处测吸光值A，按下式计算细胞生长抑制率：细胞生长抑制率=｛［（阴性组OD值的平均值一空白组OD值的平均值）一（实验组OD值的平均值一空白组OD值的平均值）］/（阴性组OD值的平均值一空白对照组OD值的平均值）｝×100%。

2　结　果

2.1薯莨化学成分鉴定结果：薯莨水溶性物质含有蛋白类、糖类或苷类、鞣质和有机酸，未检测到生物碱类成分。

2.2薯莨主要成分鞣质抑菌结果：薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，呈现剂量依赖性，但是对黑霉没有抑制作用。

2.3薯莨主要成分鞣质体外抗肿瘤实验结果：MTT法检测薯莨鞣质粗提物对肿瘤细胞生长的影响，薯莨鞣质粗提物在高剂量时对人肺癌细胞A549和人胃癌细胞SGC7901有刺激作用，而对人卵巢癌细胞A2780没有影响。低剂量组对以上三种细胞的影响都不显著（数据未展示）。

3　讨　论

从薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉菌的抗菌作用来看，其对大肠杆菌TG1、黄曲霉、木霉菌有一定抗菌作用，而大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉菌均与食品保鲜有关，这进一步证实薯莨可用于食品保鲜，其有效部位可能是鞣质。当然薯莨鞣质粗提物需进一步分离纯化，抗菌有效部位需进一步确定，抗菌机制也需阐明，有报道认为薯莨鞣质能与蛋白质作用，凝固微生物体内的原生质而具有抑菌作用，这有待进一步探明［1-2］。

薯莨抗肿瘤作用目前未见报道，我们对薯莨鞣质粗提物进行了体外抗肿瘤实验探索，实验结果证实一定剂量薯莨鞣质粗提物在体外对A549人肺癌细胞株及人胃癌细胞株SGC-7901有刺激生长的作用，而对人卵巢癌A2780细胞株的生长则无明显影响。鞣质具有一定的抗癌活性［2］，但薯莨鞣质粗提物表现出刺激A549人肺癌细胞株及人胃癌细胞株SGC-7901生长作用，究竟是薯莨鞣质引起还是其他成分引起，或者是对哪些肿瘤细胞有抗癌活性，哪些肿瘤细胞没作用这有待进一步研究。各种肿瘤细胞生长的微环境不同，受到不同因子的影响从而不断生长。目前的认知中，鞣质作为可以直接与蛋白作用的物质，可能可以更加直接参与影响信号通路中的某些因子，从而刺激了某些肿瘤细胞的生长。

［1］ 王庆蓉，马丽，雷呈祥.薯莨的药用价值［J］.职业与健康，2009，25（6）:647-649.

［2］ 安静波，郭健，宋文东等.薯莨提取物止血效果及化学成分的初步研究［J］.食品工业科技，2013（12）:344-346.

R282.710.5；R73

B

1671-8194（2016）29-0022-02

贵州省黔南州科技基金

E-mail：linsuzhang009@163.com