乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用研究

甄时建（湖南中医药高等专科学校附属第一医院 病理科，湖南 株洲 412000）

乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用研究

甄时建
（湖南中医药高等专科学校附属第一医院 病理科，湖南 株洲 412000）

目的 探讨分析乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用效果。方法 选取我院收治的80例乳腺癌患者（观察组），以及80例健康志愿者（对照组）作为观察对象，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性。结果 观察组和对照组之间的rs1799793位点野生基因型、等位基因比较无显著差异（P＞0.05）；观察组和对照组之间的rs238416位点在基因型、等位基因比较具有显著差异（P＜0.05）。结论 ERCC2基因rs1799793和rs238416位点多态性与肿瘤大小、三阴性乳腺癌、PR状态的表达有一定的关联，在乳腺癌的早期诊断和预后中，具有可观的应用价值。

乳腺癌；分子病理诊断；ERCC2基因多态性

乳腺癌是临床上常见的恶性肿瘤疾病，近年来，恶性肿瘤在中国女性肿瘤的发病率呈现上升趋势［1］。随着医学技术的发展与不断成熟，近年来，有相关研究表明，在癌症的易感性多分布有ERCC2基因多态性的分析，多个位点与癌症的易感性相关的有乳腺癌、肺癌、胃癌等［2］。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取我院2012年1月至2015年4月收治的80例乳腺癌患者（观察组），以及与患者生活环境相似、年龄相似的同民族健康人群（对照组）作为观察对象。观察组患者年龄28～65岁，平均年龄（46.2± 3.8）岁，对照组27～65岁，平均年龄（47.2±4.6）岁。两组观察对象均为女性，且均签署知情同意书。组间年龄对比无显著差异（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采用的仪器有PCR仪、凝胶成像系统、琼脂糖、电泳系统、Universal genomic DNA Extraction Kit VER.3.0以及2×GoTaq Green Master Mix、限制性内切酶Taql和Csp61。先用试剂盒提取两组标本的抗凝血中的外周基因组DNA，在-85 ℃的温度中将其保存。利用Tagger程序，根据最小等位基因频率≥0.05，以及连锁不平衡系数≥0.8的标准，来进行ERCC2基因多态性的初级筛选，再使用Fast SNPs软件筛选出最典型的Tag SNPs，即是rs1799793和rs238416来进行试验。

1.2.2 PCR反应体系是2×GoTaq Green Master Mix 20 μL，其总体积是35 μL，将PCR进行5分钟的95 ℃的预变，在71 ℃时进行20 s的延伸，将其扩增至33个循环后，再在72 ℃中延伸10 min。接着分别用内切酶Taql以及csp61进行15 μL rs1799793和rs238416的PCR产物的酶切，在用2%琼脂糖凝胶电泳对酶切产物进行鉴定。

1.2.3 选用免疫组化SP法，对乳腺癌术后组织切片的ER、HER-2以及PR的表达进行检测。

1.3 观察指标：核阳性细胞数＞10%、Allred评分≥3，ER、PR为阳性；HER-2的阳性判断标准是：+++是膜强染色细胞数＞30%；++是膜强染色细胞数在10%～30%；+是膜不持续染色的细胞数在10%以上；-是膜染色细胞数在10%以下。

1.4 统计学分析：本研究数据以SPSS20.0软件进行分析，计量资料以（±s）表示，比较以t检验；计数资料的比较经χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

ERCC2基因rs1799793和rs238416位点在对照组之间的分布符合平衡规律，也就是说该试验对象具有群体代表性。通过野生基因型和等位基因作参考，观察组和对照组之间的rs1799793位点野生基因型、等位基因比较无显著差异（P＞0.05）；观察组和对照组之间的rs238416位点在基因型、等位基因比较具有显著差异（P＜0.05）。缺失杂合突变基因型、缺失纯合突变基因型GA与rs238416基因型GG相比，其个体患乳腺癌的风险要高。通过研究结果发现，以rs1799793位点中的GG基因型为参考，PR阴性者多携带的GA基因型频率要高于PR阳性者；而三阴性乳腺癌患者所携带的CT基因型频率要高于非三阴性乳腺癌患者。rs238416和rs1799793位点的多态性分布与乳腺癌患者的临床病症、ER、HER-2D的表达没有显著差异（P ＞0.05），不具统计学意义。

3 讨 论

肿瘤的出现是细胞分化，再到增殖，最后到死亡机制的一个非常复杂的异常过程。在DNA被损伤之后，没有进行及时的修复，等到了一定的程度就会使细胞遗传出现不稳定升高，引起细胞增殖和分化的失控，最后就会造成肿瘤的出现。所以导致肿瘤易感性的主要因素之一就是DNA修复能力的差异［3-5］。所以ERCC2在乳腺癌发病的过程中有着重要的作用。本研究通过对rs1799793和rs238416位点多态性分布与乳腺癌的发生进行相关的分析，通过研究发现，rs1799793与乳腺癌的发生没有关系，其中的纯合突变基因AA没有被检测出来；而rs238416位点的内含子增强子功能，会受到杂合基因型GA的缺失受到阻碍，同时其也会对ERCC2基因mRNA的转录水平造成影响，并降低DNA修复能力，影响基因组多部分损伤的修复功能，在加上各种致癌原因、年龄增加以及基因位点突变等，最后就会造成癌症的出现。

［1]张灵小.多基因单核苷酸多态与三阴性乳腺癌预后及疗效的关联研究［D］.北京:北京协和医学院，2012.

［2]王涛，张永东，郭欢，等.检测ERCC2基因多态性在乳腺癌分子病理诊断中的应用［J］.临床与实验病理学杂志，2015，12（3）:277-281.

［3]张伟，李志刚，张蕾，等.Hcy及CBS T833C基因多态性与新疆汉族乳腺癌的关系［J］.实用医学杂志，2016，32（6）:897-899.

［4]刘新兰，张海霞，刘尧邦，等.C1236T、G2677T/A和C3435T基因多态性与乳腺癌分子分型的关系及意义［J］.天津医药，2016，44（4）:389-393.

［5]张灵小，马飞，王佳玉，等.ERCC2rs1799793多态性与三阴性乳腺癌铂类化疗疗效的关系［J］.中国癌症杂志，2012，22（5）:358-362.

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1671-8194（2016）18-0048-01