Rb、p16和cyclinD1基因在早期胃癌组织中的表达及临床意义

刘卫梅

（河南省焦作市第二人民医院 病理科，河南 焦作 454001）

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，近年发病率呈上升趋势。Rb、p16和cyclinD1三者属于CDK4/cyclinD1/p16/Rb途经，它的异常与肿瘤的产生及进展相关。通过对正常胃黏膜组织、胃黏膜异常增生和胃癌早期Rb、p16和cyclinD1表达的研究，探讨三者在胃癌发生中的相互联系及其作用。

1 资料与方法

1.1 资料

选取早期胃癌22例、增生异常23例和正常胃黏膜15例，标本均为本院2011年1月‐2012年7月手术切除标本，早期胃癌均为管状腺癌（组织学类型），所有切除标本均用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片（4 μm厚），免疫组织化学试剂盒、抗体和显色剂均购于武汉博士德生物有限公司。

1.2 方法

应用免疫组织化学S-P法检测Rb、p16和cyclinD1基因在22例早期胃癌、23例异型增生以和15例正常胃黏膜组织中的表达。免疫组化S-P法：切片常规脱蜡、水洗和电磁炉抗原热修复，依次按说明步骤进行操作。cyclinD1抗体稀释度为1∶75；Rb抗体稀释度为1∶50；p16抗体稀释度为1∶100，用已知明确阳性的组织切片做阳性对照，阴性对照用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）替代一抗。

1.3 结果判定

棕黄色颗粒均匀一致定位于细胞核或细胞浆内为阳性；细胞核或细胞浆无棕黄色颗粒的为阴性；阳性细胞数小于20%为（+），即弱阳性；阳性细胞数在20%～50%为（++），即阳性；阳性细胞数大于50%为（+++），即强阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 11.0统计学软件进行数据处理。计数资料用百分比（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

p16阳性定位于细胞浆和细胞核，cyclinD1及Rb阳性定位于细胞核；cyclinD1低表达于正常胃黏膜中。cyclinD1在胃癌早期、异型增生和正常胃黏膜中的过表达率分别为40.9%（9/22）、30.4%（7/23）和0%（0/15），cyclinD1在胃癌早期中与正常胃黏膜过表达率相比存在表达过度（P＜0.05）；Rb在胃癌早期、增生异常和正常胃黏膜中的阳性表达率分别为63.6%（14/22）、82.6%（19/23）和100%（15/15），Rb在胃癌早期中与正常胃黏膜阳性表达率相比表达下降（P＜0.05）；p16在胃癌早期、增生异常及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为59.1%（14/22）、82.6%（19/23）和100.0%（15/15），p16在胃癌早期与正常胃黏膜阳性表达率相比表达减低（P＜0.05）。cyclinD1、Rb和p16在胃癌早期与异型增生、异型增生与正常黏膜之间的差别均无统计学意义（P＞0.05）。在胃腺癌早期中，9例cyclinD1表达过度的标本中Rb表达全部为（+），其中有3例p16表达（-）；10例Rb表达（-）标本中cyclinD1全部为（-），无过度表达，其中有6例p16（-）；胃早期腺癌22例患者中有16例存在上述cyclinD1、Rb和p16三种基因的异常。

3 讨论

cyclinD1基因位于11q13,CDK4和CDK6激酶通过其蛋白结合并激活，Rb被磷酸化，E2F的抑制影响被Rb消除，并且DNA的合成开启，使细胞从G1期过度到S期，细胞失去控制的增值及生长，cyclinD1的过度表达在很多恶性肿瘤中都存在，比如乳腺癌[1]、头颈部鳞癌[2]和食管鳞癌[3]等；CDK4/CDK6的抑制因子是P16，它定位于9p21，在肿瘤增殖的调控中，CDK4/CDK6被cyclinD1和p16蛋白竞争结合，起到负性调控作用，一起协助对肿瘤增殖周期的调控，CpG岛的甲基化异常是P16失活的原因[4]，p16表达缺失在肝癌等许多肿瘤中都存在；视网膜母细胞瘤易感基因，即Rb基因，长约180 kb，基因定位在13q14.2和q14.3，表达于人类各种组织之中，110 kD蛋白为其编码的蛋白产物，其蛋白产物抑制细胞的生成，这种正常的产物的缺少或缺失，会引起肿瘤细胞失去控制的生长、增殖。Rb基因突变、丢失和重排的变化很早就被发现，并且它是第一个被确定的抑癌基因。笔者探讨应用免疫组织化学S-P法检测正常胃黏膜15例，异型增生23例，胃腺癌早期癌22例标本中p16，Rb及cyclinD1三者的表达情况，结果表明cyclinD1胃腺癌早期与正常胃黏膜过表达率相比存在差异（过度表达）（P＜0.05）；p16及Rb胃腺癌早期与正常胃黏膜阳性表达率存在差异（表达降低）（P＜0.05）；异型增生中存在3种基因的异常；但与正常胃黏膜相比，阳性表达率差异不明显（P＞0.05）。以上结果表明Rb、p16及cyclinD1的异常在胃腺癌的早期发生中起到异常重要的作用，是胃腺癌早期发生的根本缘由。在本身表达缺失和cyclinD1过度表达都可能引起Rb抑癌基因功能丧失，两者中有其一非正常就具有同样的结果，无需同时存在两者非正常，Ralhan等[5]的研究与此大致相同。这充分说明了在胃管状腺癌的早期发生及进展过程中一般都存在CDK4/cyclinD1/p16/Rb途径的非正常，此途径在胃癌早期的发生过程中起异常重要的作用。

[1]Weinstat-Saslow D,Merino MJ,Manrow RE,et al.Overexpression of cyclin D mRNA distinguishes invasive and in situ breast carcinomas from nun-malignant lesions[J].Nat Med,1995,1(12):1257-1260.

[2]Xing EP,Nie Y,Wang LD,et al.Aberrant methylation of p16INK4a and delelion of p15INK4b are frequent events in human esophageal cancer in Linxian,China[J].Carcinogenesis,1999,20(1):77-84.

[3]Liew CT,Li HM,Lo KW,et al.High frequency of p16INK4A gene alterations in hepatocellular caminoma[J].Oncogene,l999,18(3):789-795.

[4]Shinohara M,Aoki T,Sato S,et al.Cell cycle-regulated factors in esophageal cancer[J].Dis Esophagus,2002,15(2):149-154.

[5]Ralhan R,Mathew R,Arora S.Frequent alterations in the expression of tumor suppress or genes p16INK4A and pRb in esophageal squamous cell carcinoma in the Indian population [J].J Cancer Res Clin Oncol,2000,126(11):655-660.