MatrixTM生物膜专用清洗剂用于内镜清洗的效果观察

李良芳，刘婉薇，郑　跃，陈　浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)



MatrixTM生物膜专用清洗剂用于内镜清洗的效果观察

李良芳，刘婉薇，郑跃，陈浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)

摘要：[目的]评价MatrixTM生物膜专用清洗剂在内镜消毒中的应用效果。[方法]选取使用后的内镜60条次，采用ATP生物荧光技术检测MatrixTM生物膜专用清洗剂和ENZYCARE2多酶清洗剂清洗后内镜活检孔ATP含量；并建立人工模拟内镜管腔生物膜模型，采用细菌培养法和蛋白定量法评价两种内镜清洗剂去生物膜清除率。[结果]两种内镜清洗剂清洗后，内镜相对光单位(RLU值)均显著减少，其中应用MatrixTM生物膜专用清洗剂清洗效果更佳，差异具有统计学意义(P<0.05)；生物膜清除实验经细菌培养法和蛋白定量法检测结果显示，MatrixTM组对生物膜清除率分别为99.9%和94.8%，而ENZYCARE2组分别为52.4%和42.6%，两组差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]与常规的多酶清洗剂相比，MatrixTM生物膜特效清洗剂能有效祛除内镜腔内生物膜，明显提高内镜清洗、消毒质量。

关键词：MatrixTM生物膜专用清洗剂；多酶清洗剂；生物膜；清洗效果

医疗器械清洗和消毒不彻底造成的院内感染已成为当前一个重要的临床问题。消化道内镜作为一种侵入性诊疗设备，易沾染血液等污染物，同时由于其结构复杂、材质特殊，清洗消毒尤为困难[1]。内镜相关感染已有较多报道[2-3]，其中存在于内镜管腔的生物膜是造成这一现象的重要原因[4-5]。国际上近年来已出现非含酶的生物膜专用清洗剂对内镜生物膜清除效果较好的相关报道[6-8]。本研究通过临床内镜标本和人工模拟内镜管腔生物膜模型相结合的方式，通过多种方法对MatrixTM生物膜专用清洗剂和常规多酶清洗剂对内镜生物膜清除效果进行对比研究。现将结果报告如下。

1材料和方法

1.1材料ATP荧光检测仪BT-112D(北京创新世纪生化科技发展公司)，清洁剂(明泰科MatrixTM生物膜专用清洗剂和STERIS公司生产的ENZYCARE2全效多酶清洗剂)，LB肉汤培养基及琼脂，BCA蛋白试剂盒(Promega公司)，0.3%结晶紫，酶标仪(Bio-Red公司)，循环式灌流器，超声波振动器(Olympus公司)。

1.2分组

1.2.1临床内镜检测分组MatrixTM组：使用生物膜专用清洗剂MatrixTM完成清洗步骤ENZYCARE2组：使用ENZYCARE2多酶清洗剂完成清洗步骤。

1.2.2人工模拟内镜生物膜模型分组对照组：内镜管腔生物膜模拟物2 cm×20段，处理方式为0.1 mol/L的PBS浸泡15 min；MatrixTM组:内镜管腔生物膜模拟物2 cm×20段，处理方式为MatrixTM生物膜专用清洗剂按照1∶20比例配制后浸泡15 min；ENZYCARE2组:内镜管腔生物膜模拟物2 cm×20段，处理方式为全效多酶清洗剂按照1∶270比例配制后浸泡15 min。

1.3清洗及检测方法

1.3.1临床内镜清洗及检测方法

1.3.1.1清洗方法严格按照2004年卫生部《内镜清洗消毒技术操作规范》的要求，按初洗、酶洗、漂洗程序清洗使用后的内镜。内镜使用后，立即用湿纱布擦拭镜身，反复送气送水10 s。取下内镜装好防水盖，送至清洗消毒间。

1.3.1.2采样与ATP生物荧光检测连续6 d分别使用MatrixTM生物膜专用清洗剂(第1天、第3天、第5天清洗)和ENZYCARE2全效多酶清洗剂(第2天、第4天、第6天清洗)清洗内镜，清洗前后采样，采样时记录内镜编号，两组均为30条次。用无菌注射器抽取15 mL无菌生理盐水从内镜活检孔注入，在出口处采集后快速挤入裂解液和荧光素酶，应用ATP荧光检测仪测定相对光单位值(relative light unit，RLU)。

1.3.2人工模拟内镜生物膜模型的建立和检测方法

1.3.2.1人工模拟内镜生物膜模型的建立将少量大肠埃希菌菌株接种到营养琼脂斜面，于37 ℃培养24 h，用无菌营养肉汤洗菌，并用其配制成106cfu/mL的菌悬液，取菌悬液2 mL加入到装有200 mL营养肉汤的三角烧瓶中，使其菌液浓度调整为100 cfu/mL备用。用带有通气孔(过滤层0.22 mm)的塞子将烧瓶塞住，将另一根软管通过通气孔置于营养肉汤液面上，通过蠕动泵和聚四氟乙烯管相连接组成管道系统。在37 ℃的条件下用蠕动泵以10 mL/min的流量循环流动，每天4 h，连续培养5 d后用无菌生理盐水以10 mL/min的流速冲洗管腔。培养后的聚四氟乙烯管每10 cm截取1 cm的小段，作为生物膜样本备用。

1.3.2.2生物膜清除效果评价将样本置于含有10 mL PBS的无菌试管中，以40 kHz的频次超声振荡10 min，使生物膜从管壁材料上剥离。分别进行细菌培养法、蛋白质定量法测定。①细菌培养法：吸取洗脱后的100 μL PBS，按一定的比例稀释后接种于营养琼脂平板，置于37 ℃恒温培养箱培养48 h，观察菌落生长情况并行菌落计数。②蛋白质定量法：吸取洗脱后的100 μL PBS与2 mL BCA反应液混合，60 ℃加热30 min，冷却后测量562 nm吸光值。

2结果

2.1应用不同清洗剂清洗内镜效果比较两组内镜在使用清洁剂清洗后的RLU均值显著低于清洗前，差异均有统计学意义(P<0.05)。清洗前两组RLU值差异无统计学意义(P>0.05)。而清洁后两组RLU值差异亦有统计学意义(P<0.05)，其中MatrixTM组清洗效果优于ENZYCARE 2组，详见表1。

表1　不同清洗剂对临床内镜清洗效果比较±s)

2.2不同清洗剂对内镜管腔生物膜的清洗效果对比通过应用细菌计数法、蛋白质定量法，MatrixTM组在人工模拟内镜生物膜模型中对生物膜清除率分别为99.9%和94.8%，而ENZYCARE2组分别为52.4%和42.6%，两组清除率差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　不同清洗剂对模拟内镜生物膜的清除效果比较±s)

3讨论

3.1内镜生物膜清除的重要性内镜作为一种侵入性、微创性的诊治工具已广泛应用于临床，据统计，内镜检查引起的感染率约为0.8%[9]，经内镜检查传播幽门螺杆菌、人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的报道已见诸多报道[2-3]。而上述感染均与内镜管腔细菌生物膜的存在有着密切的关系。因此，消化内镜的清洗质量必须以能彻底去除细菌生物膜为目的。

3.2内镜生物膜的形成和危害生物膜是细菌由其分泌的含水聚合性基质(主要是胞外多糖)黏附在物体或生物组织表面形成的结构性细菌群落。由于内镜结构复杂、材料特殊，加之活检钳注射针等器械的频繁使用，容易造成内镜腔内形成许多细小的划痕和裂纹，病人的血液、体液、黏液等分泌物的污染如不能彻底地清洗干净，容易在内镜腔内尤其是划痕和裂纹处形成柱样或蘑菇样的结构即生物膜，而且在反复的“使用-处理-再使用”循环过程中逐渐累积。Hadi等[10]发现，即便严格按照感染控制原则清洗消毒内镜，仍然有2%内镜手术导致病人细菌感染，其最终原因就是内镜管腔内壁形成生物膜。多个扫描电镜试验中也发现临床使用中的内镜管腔生物膜生长现象十分普遍[11-12]。生物膜一旦在管腔器械中形成，则难以去除，并在反复使用和处理的循环过程中逐渐累积，当生物膜累积到一定厚度，常规的消毒剂很难穿透生物膜的胞外脂多糖基质杀死被黏液层包裹的细菌，造成清洗和消毒的失败。

3.3生物膜清洗剂的作用机制和内镜消毒效果比较生物膜特效清洗剂能通过渗透分解并瓦解生物膜菌落来达到去除生物膜的效果。生物膜清洗剂的祛除分子一端为亲生物膜端，另一端为亲水端，亲生物膜端与生物膜紧密结合，亲水端与水分子紧密结合，在水流动时带动分子运动进而将生物膜剥离。本实验研究结果显示，MatrixTM生物膜特效清洗剂能够有效地去除内镜管腔中的生物膜内残留活菌，其生物膜清除能力要比常规多酶清洗剂效率要高。通过抽取临床内镜标本和人工模拟内镜生物膜模型相结合的方式，应用多种检测方法更为严谨客观地评价生物膜清洗剂与常规多酶清洗剂内镜管腔对生物膜的清洗效果，与既往研究相比，更有助于为临床内镜清洗消毒提供更为客观的参考。

3.4内镜清洗消毒的注意事项本研究结果表明MatrixTM生物膜特效清洗剂是清洁内镜的理想选择。此外，在常规的内镜消毒中，为保证内镜消毒效果，还应做到：①内镜使用后迅速进行预清洗，缩短细菌与内镜接触的时间，减少生物膜形成的机会；②清洗剂现用现配，用后更换；③加强工作人员专业知识培训，熟练掌握操作流程，提高工作责任心，保证清洗过程中每个环节足够的清洗时间和清洗质量。

参考文献：

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[3]Spack DH，Siverstein FE，Stamm WE，etal.Transmission of infection by gastrointestional endoscopy and bronchoscopy[J].Ann Intern Med，1993，188(9):117.

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[5]Miner N，Harris V，Ebron T，etal.Sporicidal activity of disinfectants as one possible cause for bacteria in patient-ready endoscopes[J].Gastroenterol Nurs，2007，30(4)：285-290.

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[10]Hadi R，Vickery K，Deva A，etal.Biofilm removal by medical device cleaners comparison of two bioreactor detection assays[J].J Hosp Infect，2010，74(2)：160-167.

[11]孔金艳,周晓凡,胡珍丽,等.内镜活检管路生物膜生长与有效去除的研究[J].中华医院感染学杂志，2014，24(9)：2317-2319.

[12]任伟,黄茜,周立平,等.不同清洗剂对内镜生物膜清除的效果评价[J].中华医院感染学杂志,2011，21(7)：1382-1384.

(本文编辑李亚琴)

收稿日期：(2014-11-23；修回日期：2015-12-15)

通讯作者

作者简介李良芳，主管护师，本科，单位：510120，广东省人民医院；刘婉薇、郑跃、陈浩()单位：510120，广东省人民医院。

基金项目国家自然科学 ，编号：81300279。

中图分类号：R473.1

文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.026

文章编号：1009-6493(2016)01A-0082-03