红核妇洁洗液抗炎、止痒及抗菌作用研究

红核妇洁洗液抗炎、止痒及抗菌作用研究

厉彦翔，梅龙，卢朝辉，林蓉，王维蓉*

(西安交通大学医学部，西安710061)

摘要：目的观察红核妇洁洗液的抗炎、止痒及抗菌作用。方法通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性、小鼠皮下琼脂肉芽肿、豚鼠磷酸组胺致痒阈实验及白色假丝酵母菌感染兔阴道炎模型，观察红核妇洁洗液抗炎、止痒及抗菌作用。结果红核妇洁洗液能够显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.01)，显著降低小鼠腹腔毛细血管通透性(P<0.01)，抑制小鼠琼脂肉芽肿的形成(其中高、中剂量组P<0.01)，提高豚鼠的致痒阈(P<0.01)；并对兔霉菌性阴道炎具有显著的治疗作用。结论红核妇洁洗液具有显著的抗炎、止痒及抗菌作用。

关键词:红核妇洁洗液；抗炎作用；抗菌作用；霉菌性阴道炎

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.013

中图分类号：R965

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2015)03-0260-05

Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory， antipruritic and antibacterial effects of Honghefujie Lotion. Methods The anti-inflammatory effects of Honghefujie Lotion were observed by xylene-induced mouse ear swelling， acetic acid-induced mouse penetration of capillary vessel and agar-induced mouse granuloma assay. The antipruritic effect was studied by histamine phosphate-induced guinea pig itching test. Then the effect of Honghefujie Lotion on vaginal candida infection was observed in rabbits. Results Honghefujie Lotion significantly inhibited ear swelling， penetration of capillary vessel and proliferation of granulation tissue， and also enhanced itch threshold. Besides， Honghefujie Lotion had obviously therapeutic effects on mycotic vaginitis in rabbits. Conclusion The results suggest Honghefujie Lotion has potential anti-inflammatory， antipruritic and antibacterial effects.

基金项目：陕西省自然科学基金(编号：2012JQ4025)

作者简介：厉彦翔，男，博士研究生

收稿日期：(2014-11-21)

Anti-inflammatory，antipruritic and antibacterial effects of Honghefujie Lotion

LI Yanxiang， MEI Long， LU Zhaohui， LIN Rong， WANG Weirong*(Health Science Center， Xi′an Jiaotong University， Xi′an 710061， China)

Key words: Honghefujie Lotion； anti-inflammatory effect； antibacterial effect； mycotic vaginitis

*通信作者：王维蓉，女，讲师

阴道炎是发病率最高、也是最常见的妇科炎症[1]，目前治疗药物很多，有抗菌药物如甲硝唑、环丙沙星等，微生态治疗制剂如地衣芽孢杆菌，还有一些中药洗剂，但治疗效果均不甚理想，存在可诱发耐药性、复发率高、用药不便、制剂困难等不足[2]。因此，寻找更加安全有效的治疗药物具有重要的意义。红核妇洁洗液是以山楂核为原料、经现代干馏工艺研制而成的外用洗液[3]。前期体外研究结果表明，红核妇洁洗液能有效地杀灭白色假丝酵母菌[3]，但其体内抗炎、抗菌作用尚未见报道。本文对红核妇洁洗液的体内抗炎、抗菌作用进行了研究，为其进一步开发提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器BS223S型电子天平(德国Sartorius公司)；721可见分光光度计(上海分析仪器厂)；DXM 1200F数码显微成像系统(日本Nikon公司)。

1.2试药红核妇洁洗液(山东步长神州制药有限公司，批号20140220)；氢化泼尼松注射液(西安利君制药有限责任公司，批号130129)；地氯雷他定片(深圳市海滨制药有限公司，批号20120612)；琼脂(北京奥博星生物科技有限公司，批号20130520)；磷酸组胺(上海迈坤化工有限公司，批号20131111)；瑞氏-姬姆萨染液(南京森贝伽生物科技有限公司，批号20130815)；白色假丝酵母菌(CMCC85027株，中国医学细菌保藏管理中心)；醋酸及二甲苯均为国产分析纯。

1.3动物SPF级ICR小鼠，体质量20±2 g，雌雄兼用；豚鼠，体质量200±20 g，雌雄兼用；动物生产许可证号：SCXK(陕)2007-001。日本大耳白兔，体质量2.0±0.25 kg，雌性， 动物生产许可证号：SCXK(陕)2012-003。均由西安交通大学医学部实验动物中心提供。

2方法

2.1对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响将ICR小鼠随机分为红核妇洁洗液高、中、低剂量组，阳性药物(氢化泼尼松)组，模型组，共5组，每组10只。于小鼠左耳廓的内外两面滴涂药液0.005 mL·g-1，每隔15 min滴涂1次，连续3次。氢化泼尼松组滴涂1 mg·mL-1氢化泼尼松溶液，红核妇洁洗液高、中、低剂量组分别滴涂5，10和20倍稀释的红核妇洁洗液。所有小鼠右耳不给予任何制剂作为正常对照。第3次给药20 min后，用温水轻轻洗去左侧耳廓的内外两面滴涂的药液，用棉球拭干。用微量进样器吸取二甲苯30 μL均匀涂布于小鼠左耳两面引起炎症。40 min后，将小鼠断颈处死，迅速剪下左、右两耳，用直经6 mm打孔器于相同位置打两侧圆形耳片，用电子天平分别称质量。左耳质量与右耳质量的差值即为耳肿胀度。肿胀抑制率(%)=[(对照组肿胀度均值-给药组肿胀度均值) / 对照组肿胀度均值]×100%。

2.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响动物分组及给药处理同上。小鼠腹部皮肤滴涂药液0.01 mL·g-1，1日2次，连续给药3 d。末次腹部皮肤滴涂药液1 h后，小鼠尾静脉注射10 g·L-1伊文思蓝生理盐水溶液0.005 mL·g-1，立即腹腔注射体积分数0.75%醋酸溶液0.01 mL·g-1。20 min后脱颈椎处死小鼠，腹腔注射5 mL生理盐水，轻揉腹部洗涤腹腔并使之混匀。剪开腹部皮肤，吸出腹内液体，以3 000 r·min-1离心15 min。取上清液2 mL于比色杯中，在分光光度仪上于590 nm处测定腹腔液A值并计算通透性抑制率。通透性抑制率=[(对照组A均值-给药组A均值) / 对照组A均值]×100%。

2.3对琼脂致小鼠肉芽肿增生的影响小鼠的背部偏左或偏右一侧用脱毛剂脱毛1 cm2大小范围。饲养观察24 h，保证皮肤完好无刺激性炎症发生。于脱毛区皮下注射加热融化50 ℃保温的20 g·L-1无菌琼脂0.2 mL，呈圆形包块。将成模小鼠随机分组(同2.1)，注射琼脂后2 h开始给药，于注射琼脂部位的皮肤表面滴涂药液0.01 mL·g-1，1日2次，连续给药10 d。末次给药后24 h断颈处死小鼠，剥离完整肉芽肿，用电子天平称肉芽肿质量(mg)，并计算增生抑制率。增生抑制率=[(对照组肉芽肿质量均值-给药组肉芽肿质量均值)/对照组肉芽肿质量均值]×100%。

2.4对豚鼠磷酸组胺致痒阈的影响动物分组及给药处理同2.1。各组豚鼠右后腿外侧剃毛，滴涂药液0.2 mL，8 h后再滴涂药液1次。次日，用粗砂纸擦伤剃毛处，局部再滴涂药液 1 次。阳性药对照组滴涂等量1 mg·mL-1地氯雷他定溶液。末次给药10 min后开始在右后腿创面处滴涂100 μg·mL-1磷酸组胺 0.1 mL/只，仔细观察豚鼠反应，豚鼠回头舔右后足为瘙痒阳性反应。无反应者每隔3 min依次递增滴涂磷酸组胺溶液0.1 mL，直至豚鼠出现明显瘙痒反应。此时所给的磷酸组胺量为致痒阈。

2.5对家兔阴道白色假丝酵母菌感染的影响取雌性日本大耳白兔30只，6只作为正常对照组，另24只用无菌注射器吸取5×107cfu·mL-1白色假丝酵母菌液0.2 mL，用无菌硅胶管注入兔阴道内5~8 cm处，原位停留 1~2 min，防止菌液流出。每日接种1次，连续接种3 d。为增大感染的机率，接种菌液前6 d，大耳白兔皮下注射苯甲酸雌二醇注射液 0.15 mg·kg-1，以后每2天注射1次，直至造模成功。接种前3 d，给兔肌肉注射氢化可的松1.5 mg·kg-1，直至造模成功。末次接种后逐日检查观察阴道口一般情况，检查阴道清洁度和分泌物中病原菌数量。模型建立成功标准：阴道外观出现红肿、充血，阴道清洁度达到Ⅲ度或Ⅳ度，分泌物中有大量白色假丝酵母菌。红核妇洁洗液高、中、低剂量组分别用5，10和20倍稀释的红核妇洁洗液，模型组、正常对照组用无菌纯净水。每次淋洗5 min。每日治疗2次，连续治疗7 d。观察动物生长、活动和外阴洁净情况，检查阴道清洁度，进行白色假丝酵母菌载菌量及阴道灌洗液中白细胞数检测，并取阴道组织进行病理学检查。

2.6统计学方法采用SPSS17.0统计软件处理数据。计量资料以均数±标准差表示，采用单因素方差分析进行方差齐性检验和组间显著性检验，计数资料用χ2检验，P<0.05 作为显著性界限。

3结果

3.1对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响与模型组比较，红核妇洁洗液各剂量组均能够明显降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.01)，差异有统计学意义。与氢化泼尼松组比较，红核妇洁洗液高、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

表1红核妇洁洗液对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度的影响

Tab.1 The effect of Honghefujie Lotion on ear swelling induced by xylene in mice

± s， n=10)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与氢化泼尼松组比较#P<0.05，##P<0.01。

3.2对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响红核妇洁洗液各剂量组能够显著降低醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性(P<0.01)，减弱腹腔渗出性炎症反应。与氢化泼尼松组比较，红核妇洁洗液高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2红核妇洁洗液对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

Tab.2 The effect of Honghefujie Lotion on the increase of penetration of capillary vessel induced by acetic acid in mice

± s， n=10)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与氢化泼尼松组比较#P<0.05，##P<0.01。

3.3对琼脂致小鼠肉芽肿增生的影响红核妇洁洗液高、中剂量组均能显著降低小鼠琼脂肉芽肿的形成(P<0.01)，减轻异物引起的增生性炎症反应。结果见表3。

表3红核妇洁洗液对琼脂致小鼠肉芽肿增生的影响

Tab.3 The effect of Honghefujie Lotion on granuloma induced by agar in mice

± s， n=10)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与氢化泼尼松组比较#P<0.05，##P<0.01。

3.4对磷酸组胺致豚鼠致痒阈的影响红核妇洁洗液各剂量组豚鼠磷酸组胺致痒阈显著低于模型组(P<0.01)。地氯雷他定为组胺H1受体拮抗剂，该组在磷酸组胺达5 mg极限用量时未出现瘙痒症状。红核妇洁洗液各剂量组均能显著提高豚鼠磷酸组胺的致痒阈。结果见表4。

3.5对兔阴道白色假丝酵母菌感染的影响

3.5.1治疗前后阴道白色假丝酵母菌载菌量变化治疗7 d后，红核妇洁洗液各剂量组兔阴道灌洗液中白色假丝酵母菌载菌量均显著低于模型组(P<0.01)。结果见表5。

3.5.2阴道灌洗液中白细胞数变化模型组兔阴道白细胞数在治疗3 d最高，5 d开始缓慢下降。红核妇洁洗液高剂量组治疗3 d白细胞数显著低于模型组(P<0.01)，中、低剂量组与模型组差异无统计学意义(P>0.05)；治疗第5 d、第7 d，红核妇洁洗液各剂量阴道白细胞数显著低于模型组(P<0.01)。结果见表6。

表4红核妇洁洗液对磷酸组胺致豚鼠致痒阈的影响

Tab.4 The effect of Honghefujie Lotion on itch induced by histamine phosphate in guinea pigs

± s， n=10)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与地氯雷他定组比较#P<0.05，##P<0.01。

表5治疗前后阴道白色假丝酵母菌载菌量变化

Tab.5 The change of fungal load after treated by Honghefujie Lotion in vagina of rabbits

± s， n=6)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

表6治疗期兔阴道灌洗液中白细胞数变化

Tab.6 The effect of Honghefujie Lotion on leukocyte count in vaginal lavage fluid of rabbits

± s， n=6)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.5.3阴道清洁度变化红核妇洁洗液高剂量组治疗3 d阴道清洁度显著低于模型组(P<0.05)，高、中剂量组治疗第5~7 d阴道清洁度显著低于模型组(P<0.01)，低剂量组阴道清洁度在治疗3和5 d与模型组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，治疗7 d低于模型组(P<0.05)。结果见表7。

3.5.4治疗霉菌性阴道炎疗效红核妇洁洗液高剂量对兔霉菌性阴道炎的治愈率达到66.67% ，有效率达到100%；中剂量组和低剂量组治愈率均为50%，有效率分别为100%和83.33%。

表7红核妇洁洗液治疗期兔阴道清洁度变化

Tab.7 The effect of Honghefujie Lotion on vaginal cleanness classification of rabbits

± s， n=6)

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.5.5阴道组织病理学检查结果由病理组织学照片可知，模型组兔子阴道黏膜上皮不完整，表面及上皮内可见明显炎细胞浸润；阴道皱壁粗乳头状，上皮下间质有中度水肿，有一定量炎细胞浸润，血管中等程度扩张、充血。红核妇洁洗液中剂量治疗组兔阴道黏膜上皮层规整，表面及上皮内可见少量的炎细胞浸润；阴道皱壁指状或乳头状，上皮下间质轻度水肿，散在炎细胞浸润，血管有轻度扩张、充血。结果见图1。

图1红核妇洁洗液对阴道组织病理学改变的影响(HE×100)

A. 正常对照组；B. 模型组；C. 红核妇洁洗液中剂量组

Fig.1 The effect of Honghefujie Lotion on histopathological changes of vagina

A. control group； B. model group； C. medium-dose group of Honghefujie Lotion (HE×100)

4讨论

红核妇洁洗液是以山楂核为原料的外用洗液，大量临床研究表明，红核妇洁洗液可用于治疗阴痒、带下、霉菌性阴道炎和非特异性阴道炎[4-5]。本研究通过多种动物模型研究红核妇洁洗液的体内抗炎、止痒及抗菌作用。实验结果显示，红核妇洁洗液对小鼠耳廓急性肿胀性炎症、小鼠腹腔急性渗出性炎症有显著的抑制作用，并且存在量效关系。同时，红核妇洁洗液能够减缓琼脂肉芽肿的形成，降低琼脂肉芽肿的质量，对慢性炎症有明显的抑制作用。豚鼠对刺激物的反应与人最为接近，是评价药物止痒作用最常用的动物。我们选用豚鼠皮肤磷酸组织胺致痒模型进行止痒疗效研究，结果表明，红核妇洁洗液可以提高豚鼠对磷酸组织胺的致痒阈3~5倍，止痒效果明显。氢化泼尼松是临床有明显疗效的激素类药物。地氯雷他定是第三代组胺H1受体拮抗剂，但临床上应用于局部的地氯雷他定外用制剂非常少见。红核妇洁洗液无激素类药物的不良反应，保存、配制方便，可作为一种安全的非激素类外用消炎止痒制剂应用。

霉菌性阴道炎又称外阴阴道假丝酵母菌病，是一种常见的阴道黏膜的真菌感染性疾病，其致病菌以白色假丝酵母菌居多。据统计，阴道炎的发生率为45.89%，在不同的年龄阶段，其发病率也不同[6]。白色假丝酵母菌属于条件致病菌，正常人和动物不易感染。采用皮下注射雌激素的方法造成兔假发情状态。同时，肌肉注射皮质激素降低兔的免疫功能。阴道局部连续接种大剂量的病原菌，兔于末次接种后第3天出现外阴红肿充血，有脓性分泌物，阴道清洁度达到Ⅲ级以上，成功建立了霉菌性阴道炎模型。结果提示，红核妇洁洗液能够有效地杀灭和抑制阴道局部的病原菌，阻止感染的扩散和发展，为霉菌性阴道炎的治疗提供了保证。

本研究从体内抗炎、止痒及抗菌方面进行了红核妇洁洗液的药理实验研究。结果表明，红核妇洁洗液具有明显的抗炎、止痒作用，且能够有效地抑制白色假丝酵母菌所致的感染，对霉菌性阴道炎有显著疗效。这为红核妇洁洗液的进一步研究和临床推广提供了一定的实验依据。

参考文献：

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[3]梅龙，林蓉，卢朝辉. 红核妇洁洗液体外抗菌实验研究[J]. 中国妇产科临床杂志，2014,15(2):145-147.

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[5]杨清萍. 红核妇洁洗液结合制霉素治疗念珠菌性阴道炎60例[J]. 上海中医药杂志，2010，44(4):22.

[6]刘毅，刘达美，关蕴良，等. 年龄、生殖道状况与阴道炎、宫颈糜烂和外阴白斑患病的相关性研究[J]. 重庆医科大学学报，2009，34(1):85-88.