HPLC法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱的含量

HPLC法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱的含量

钱芳陆超

江苏省中医院药学部，江苏南京210029

【摘要】目的：用高效液相色谱法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量。方法：采用Hedera C18柱(250×4.6 mm，5μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50，每100ml加十二烷基磺酸钠 0.1g)为流动相，流速为1.0ml·min`(-1)，检测波长265nm。结果：盐酸小檗碱的检测浓度在3.8125～122.0μg·ml`(-1)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均加样回收率为100.70%，RSD=0.85%(n=6)。结论：HPLC法简便易行，结果准确，重现性好，可用于测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量。

【关键词】止痒洗剂；高效液相色谱法；盐酸小檗碱

作者简介：钱芳(1975-)，副主任中药师，主要从事中药制剂和新药研究工作。

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2015)22-0025-02

Abstract:Objective To establish a method for the determination of berberine hydrochloride in ZhiYang Lotion by HPLC. Methods The Hedera C18 column(250 mm x 4.6 mm，5 μm)was used，acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(50∶50，0.1 g sodium dodecyl sulfonate add in each 100 ml solution)as the mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min`(-1)，and the detection wavelength was 265 nm. Results The linear range of berberine hydrochloride was 0.8844-28.3 μg·ml`(-1) (r=1.0000)，the average recovery rate was 100.70%，and RSD was 0.85% (n=6).Conclusion The method is simple，rapid,accurate and reliable. It can be used for the content determination of berberine hydrochloride in ZhiYang Lotion.

Keywords:ZhiYang Lotion；HPLC；berberine hydrochloride

收稿日期：(2015.10.12)

Determination of Berberine Hydrochloride in ZhiYang Lotion by HPLC

QIAN FangLU Chao

Division of hospital medicine in Jiangsu Province，Nanjing 210029,China

止痒洗剂由黄柏、蛇床子、苍术、枯矾等药组成，具有清热燥湿、杀虫止痒的功能，主治湿疮、疥癣等瘙痒性皮肤病。黄柏为方中主药，盐酸小檗碱为其所含的主要活性成分之一，其含量测定法中高效液相色谱法报道较多，较为稳定，快捷。为保证药品质量，本实验采用高效液相色谱法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱的含量。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪：G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器，Agilent ChemStation(美国安捷伦公司)；1/10万电子分析天平(BP-211D型，德国Sartorius)；KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械设备厂)；HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。

1.2试药盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208，供含量测定用)，购自中国药品生物制品检定所；止痒洗剂(批号120115、120227、120302)，江苏省中医院制剂部生产；高效液相色谱所用试剂为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件[1]色谱柱：Hedera C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50，每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)；检测波长：265nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min-1；进样量10μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含244μg的溶液。

2.2.2供试品溶液的制备精密吸取止痒洗剂样品2ml，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声20min，再加甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照品溶液的制备按照止痒洗剂的制备工艺制备缺黄柏的阴性样品，按“2.2.2”的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3系统适应性试验取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10 μl，记录色谱图。由色谱图可知，供试品溶液色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应位置上有相应峰，而阴性对照品溶液色谱中无此峰，说明阴性对照品无干扰。在此条件下，盐酸小檗碱峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，分离度大于1.5；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应小低于5000。见图1。

2.4线性关系考察取上述对照品溶液，用甲醇分别稀释至122.0、61.0、30.5、15.25、7.625、3.8125μg·ml-1，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中测定。经线性回归，得盐酸小檗碱回归方程y=45.65x﹢4.4244，r=0.9999，盐酸小檗碱在3.8125～122.0μg·ml-1范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。

2.5精密度试验取同一对照品溶液，精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，重复测定6次，以峰面积计算，RSD为0.48%(n=6)。试验结果表明，仪器精密度良好。

2.6重复性试验精密吸取同一个批号的止痒洗剂样品(120115)2ml，共6份，依法制备供试品溶液，测定，以盐酸小檗碱含量计算，RSD为0.73%(n=6)。结果表明，重复性较好。

2.7稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0、2、4、6、8、12 h分别进样，测定色谱峰面积，RSD为0.71%(n=6)，说明供试品溶液在12h内稳定。

2.8加样回收率试验按加样回收率试验要求，精密称取已知含量的止痒洗剂样品(批号120115)6份，分别加入盐酸小檗碱对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，平均回收率为100.70%，RSD为0.85%。见表1。

表1　加样回收率试验结果表

2.9样品含量测定取3个批号止痒洗剂样品，每批两份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算结果见表2。

表2　样品含量测定结果表

3讨论

3.1流动相的选择本试验曾先后参考药典[1]和文献[2-3]所用流动相测定样品中的盐酸小檗碱含量，结果采用药典流动相系统分离效果最佳，保留时间适度。因此，确定其为本法的流动相。

3.2样品超声时间的选择在本实验中对样品超声时间 10、20、30、40min进行了考察，测定结果显示，超声处理20、30、40min盐酸小檗碱含量接近，超声10min含量低，故选择超声时间为20min。

3.3HPLC法测定HPLC法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量简便易行，结果准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：286.

[2]马永贵，谢委，方建国，等．高效液相色谱法测定洁泽洗液中盐酸小檗碱含量[J]．医药导报，2011，30(11)：1484-1486.

[3]吴晓明，金胜先，徐衡．泌感片的薄层鉴别和盐酸小檗碱的含量测定[J]．安徽医药， 2009，13(5)：504-506.

文献综述