小儿清咽颗粒中青黛的薄层色谱鉴别研究

小儿清咽颗粒中青黛的薄层色谱鉴别研究

张晓南毛云宏游燕周林

云南省药物研究所，云南昆明650111

【摘要】目的：对小儿清咽颗粒中青黛薄层色谱检验存在的困难进行研究，以期为提升小儿清咽颗粒的法定标准提供依据。方法：按2010年版《中华人民共和国药典》附录中薄层色谱法和卫生部药品标准《中药成方制剂》第六册中小儿清咽冲剂的质量标准，对小儿清咽颗粒中青黛进行薄层色谱研究。结果：采用回流或温浴超声的方法提取能明显改善青黛提取效果，样品在与靛蓝、靛玉红对照品的位置可见清晰的斑点，阴性实验无干扰。结论：改进后的方法简便准确、稳定可靠，增强了小儿清咽颗粒中青黛薄层色谱鉴别的重复性和可鉴别性。

【关键词】小儿清咽颗粒；青黛；薄层色谱

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2015)22-0021-02

Abstract:Objective To solve the problem of Indigo Naturalis testing by TLC in the real job，to improve the assay for identification. Methods The research work was according to The People's Republic of China Pharmacopoeia 2010 edition and Pharmaceutical Standards of Traditional Chinese Medicine Drugs Preparation, to determine method. Results The spots in the chromatogram obtained with the test solution correspond in position and color to the spots in the reference solution, while there was no the same color spots in the control sample. Conclusion The assay method is feasible and rational, can be validated in the quality control.

Keywords:Xiao Er Qing Yan Granule;Indigo Naturalis;TLC

收稿日期：(2015.08.24)

Identification ofIndigoNaturalisin Xiao Er Qing Yan Granule by TLC

ZHANG XiaonanMAO YunhongYOU YanZHOU Lin

Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650111，China

小儿清咽颗粒是由玄参、蒲公英、牛蒡子(炒)、薄荷、蝉蜕、板蓝根、连翘、牡丹皮、青黛九味药材经煎煮、浓缩、加入蔗糖、糊精等辅料制成的复方颗粒。具有清热解表、解毒利咽的功效，用于小儿外感风热引起的发热头痛、咳嗽音哑、咽喉肿痛。其标准收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第六册(标准号为：WS3-B-1092-92)[1]。小儿清咽颗粒的疗效好、见效快、毒副作用低且口感较好，容易被儿童接受。小儿清咽颗粒的法定质量标准规定要进行青黛的薄层色谱检验，但按照现有法定标准的方法操作[1-2]，不论是按标准工艺将青黛包煎，提取浸膏制粒，还是在提取好的浸膏中直接散入青黛再制粒，薄层色谱检验的结果都是阴性。在市场上购买了多家厂商，多个批次的小儿清咽颗粒进行了实验也都呈现同样的阴性结果。有文献指出，按法定方法难以检出靛蓝，并从药材相互助溶的角度加以探讨[3]。由此可见，法定标准中的青黛鉴别方法存在一定的缺陷，需要改进。

在检测小儿清咽颗粒的另一味药材牛蒡子时，其样品液的提取工艺是回流提取，发现提取液可见微弱的蓝色，分析原因可能来自于青黛的靛蓝，以此推测青黛的提取效果受温度的影响比较大。研究通过提高提取温度，有可能解决青黛检测困难的问题，现报道如下。

1仪器与材料

1.1仪器AG285型电子天平；XMTD-4000型水浴锅；SK3200LH型超声波清洗器；OBS-2000型旋转蒸发仪。

1.2材料靛蓝(批号：110716-201111，中国食品药品检定研究院)；靛玉红(批号：110717-200204，中国食品药品检定研究院)；自制小儿清咽颗粒1批；阴性样品颗粒(自制)；市售小儿清咽颗粒3批(编号1：批号2014018，重庆太极集团四川南充制药有限公司；编号2：批号20140803，建省泉州罗裳山制药厂；编号3：批号141008，四川同人泰药业有限公司)。水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1供试品溶液制备

2.1.1方法1取本品4g，加含2%水合氯醛的三氯甲烷20ml，室温26℃，40kKHz超声波提取30 min，滤过，滤液蒸至近干，残渣加含2%水合氯醛三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液(标准规定方法)。

2.1.2方法2取取本品4g，加三氯甲烷20ml，40℃温水浴，并40kKHz超声波提取30 min，滤过，滤液蒸至近干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.3方法3取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃温水浴，并40kKHz超声波提取30 min，滤过，滤液蒸至近干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.4方法4取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃温水浴回流30 min，滤过，滤液蒸至近干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.2对照品溶液的制备取靛蓝、靛玉红对照品，分别加三氯甲烷配制为每毫升含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3阴性对照溶液的制备取阴性样品颗粒4g，其余制法同供试品溶液制备方法3。

2.4展开剂及展开方式选择法定标准规定的展开剂：甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)，上行展开。

2.5检视方法的选择选择法定标准规定的检视方法：取出，晾干，置日光下检视，斑点颜色清晰。

2.6薄层板的选择硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；硅胶G薄层板(青岛美高集团有限公司)；硅胶G薄层板(上海默克化工)，都可以取得较好的展开效果。实验选择斑点显色最为清晰的上海默克化工技术有限公司生产的硅胶G薄层板。

2.7点样方式与点样量点样方式为接触点样；点样量为3、5、10、15μl。对照品溶液点样量10μl及供试品溶液点样量为10μl时能明显检出。

2.8温度及相对湿度的影响按照试验所得薄层色谱条件，考察在20℃、25℃、35℃，相对湿度为35%～70%时展开对薄层色谱结果的影响。结果在上述温度、相对湿度范围内对该薄层色谱结果无明显影响。

2.9预平衡的影响按照试验所得薄层色谱条件，考察未饱和、饱和15min、饱和30min对薄层色谱斑点的影响。结果在上述条件下，薄层色谱斑点均清晰明显，分离度好。为了简化操作程序，采用未经饱和展开。

2.10结果在上述条件下，标准品溶液和样品溶液的点样量都为10μl，点于硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，上行展开，取出，晾干，置日光下检视，自制的小儿清咽颗粒和市售的3批小儿清咽颗粒样品，采用方法2、3、4制备的供试品溶液，所得薄层色谱都可呈现与靛蓝及靛玉红标准品相对应的清晰斑点，而方法1(标准方法制备)的供试品溶液色谱图中未见明显斑点。由此可知，提取温度为40℃或60℃时，超声提取和60℃回流提取样品中的靛蓝及靛玉红都可以得到满意的提取效果。由薄层色谱中靛蓝及靛玉红斑点的清晰程度来看，三种提取方法的提取效果没有明显差别，都较为理想。见图1、2。

图1　小儿清咽颗粒青黛不同提取方法的薄层色谱

图2　不同批次小儿清咽颗粒青黛的薄层色谱

4讨论

由结果可知，将提取温度由室温提高到40℃或60℃后，无论是超声还是回流提取都能得到较为理想的结果，建议在将来法定标准提高时能将青黛鉴别检验的样品溶液处理方法变更为回流或温浴超声。另外，靛玉红在供试品色谱中也呈现出了明显的斑点，在将来的法定质量标准提高中，可考虑将靛玉红也纳入鉴别，以便青黛能得到更为全面的质量控制。此外，笔者考察过水合氯醛对提取效果的影响，结果表明影响并不明显，为操作简便，可以选择不加入。

法定方法建立时，必定也经过系统的实验，研究通过验证发现，当室温达到32℃时，超声提取不需要温浴所得提取液就可以在薄层色谱中显现较为明显的斑点。另外，小儿清咽颗粒的处方中还含有板蓝根，板蓝根中也含有靛蓝和靛玉红，但阴性样品的薄层色谱中并未清晰显现靛蓝和靛玉红的斑点，由此可知小儿清咽颗粒中的靛蓝和靛玉红主要来自于青黛，而来源于板蓝根的靛蓝和靛玉红由于药材中的含量就较低[4-5]，转移到制剂中的量过少，故而不能被薄层色谱法检出。

参考文献

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第六册)[M].1991:23.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社，2010.

[3]杨云芝，胥苏勋.小儿清咽颗粒组方中对青黛成份影响的研究[J]. 现代医药卫生，2009,25(2):225-227.

[4]马莉，孙琴，李友，等.HPLC法测定板蓝根药材及制剂中靛蓝和靛玉红含量[J]. 药物分析杂志，2010，30(9):1642-1645.

[5]王永霞.不同采收期板蓝根的质量分析与考察研究[J].中国药物经济学，2014，15(2)：23-24.