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miR-21与miR-375在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

2016-01-12冷超,张晶晶

山东医药 2015年42期

miR-21与miR-375在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

冷超,张晶晶

(南华大学附属第一医院,湖南衡阳 421001)

摘要:目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)癌组织中miR-21、miR-375的表达,分析两者与ESCC患者临床病理特征及预后的关系。方法选择39例ESCC患者的癌组织及其正常食管黏膜组织标本,采用逆转录—聚合酶链反应法检测miR-21、miR-375。随访至患者死亡或截止2015年4月1日,采用Kaplan-Meier法分析miR-21、miR-375表达与 ESCC患者预后的关系,采用Cox比例风险回归模型分析影响ESCC患者预后的因素。结果 ESCC癌组织、癌旁组织中miR-21的表达分别为0.697±0.412、0.449±0.337,miR-375的表达分别为0.322 ±0.215 、0.484 ± 0.341,癌组织中miR-21的表达高于癌旁组织、miR-375的表达低于癌旁组织(P均<0.05)。发生淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者miR-21表达较高(P均<0.05)。miR-21高表达者的3年生存率低于低表达者,miR-375高表达者的3年生存率高于低表达者(P均<0.05)。miR-21高表达和miR-375低表达患者生存预后较差,是影响ESCC患者预后的独立因素(P均<0.05)。结论 ESCC患者癌组织中miR-21表达增高,且发生淋巴结转移及临床分期较高者miR-21表达较高。miR-21高表达、miR-375低表达的ESCC患者预后较差。

关键词:食管鳞状细胞癌;微小RNA;生存分析;预后

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.022

中图分类号:R730.2;R735.1 文献标志码:B

收稿日期:(2015-08-03)

食管癌是临床常见的消化道恶性肿瘤,食管鳞状细胞癌(ESCC)是其主要的病理类型。寻找能够用于早期诊断和判断肿瘤转移的生物标志物对于ESCC的治疗具有重要意义[1]。近年研究发现,微小RNA(miRNAs)参与了多种肿瘤的发生和转移,不同的miRNAs在不同的肿瘤组织中可表现为异常增高或降低,可作为抑癌基因或癌基因行使功能[2]。因此,研究与ESCC相关的miRNAs对于ESCC的诊断、治疗及预后判断具有重要意义。近年来,我们对39例ESCC患者的癌组织中miR-21、miR-375的表达进行了检测,分析两者与患者临床病理特征及预后的关系,为ESCC的早期诊断、治疗及预后判断提供依据。

1资料与方法

1.1临床资料选择2008年12月~2011年10月于我院胸外科手术切除的39例ESCC患者的癌组织及其正常食管黏膜组织标本。男31例、女8例,年龄(53.7±8.6)岁。病变位于胸上段5例、胸中段24例、胸下段10例。低分化6例,中分化27例,高分化6例。均经病理检查确诊。患者手术前后均未接受放化疗及生物免疫治疗。所有患者签署知情同意书。

1.2miR-21、miR-375表达检测采用逆转录—聚合酶链反应法。按试剂盒说明书提取组织总RNA,采用15 μL反应体系,包括反应体系混合物7 μL、Taqman引物3 μL及RNA样本5 μL。扩增过程为95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 1 s循环40次,最后60 ℃ 1 min。以U6 snRNA作为内参,参考文献[3]描述的2-ΔCt法计算相对表达量,ΔCt=(CtmiRNA-CtU6snRNA)。根据miR-21、miR-375表达的中位数,将39例标本分为高表达、低表达。

1.3随访方法 通过门诊复查、电话及信访方式,随访患者有无肿瘤复发转移等,随访至患者死亡或截止2015年4月1日。

2结果

2.1癌组织及癌旁组织 miR-21、miR-375表达癌组织、癌旁组织中miR-21的表达分别为0.697±0.412、0.449±0.337,miR-375的表达分别为0.322 ±0.215、0.484±0.341,癌组织中miR-21的表达高于癌旁组织、miR-375的表达低于癌旁组织(P均<0.05)。

2.2miR-21、miR-375表达与ESCC患者临床病理特征的关系发生淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者miR-21表达较高(P均<0.05)。见表1。

表1  癌组织miR-21、miR-375表达与ESCC患者

2.3miR-21、miR-375表达与ESCC患者预后的关系 Kaplan-Meier法分析显示,miR-21高表达者3年生存率为42.1%,低表达者3年生存率为75.0%,miR-21高表达者的3年生存率低于低表达者(P<0.05);miR-375高表达者3年生存率为68.4%,低表达者3年生存率为45.0%,miR-375高表达者3年生存高于低表达者(P<0.05)。miR-21高表达和miR-375低表达者生存预后较差(P<0.05)。 Cox比例风险回归模型多因素分析示miR-21高表达、miR-375低表达(OR=6.43,95%CI为1.25~14.49,P<0.01)是影响ESCC患者预后的独立因素。

3讨论

miRNAs是长度为20~25 nt、具有调控功能的非编码RNA,其主要功能是参与基因转录后水平的调控。近年来,miRNAs在肿瘤发病中的作用受到广泛关注。研究发现,miRNAs表达变化对于肿瘤诊断和预后判断具有潜在价值[4~6]。人类许多miRNAs基因位于染色体上的肿瘤相关区域,如脆性区域、癌基因或抑癌基因断裂区域等,在癌症发生、发展过程中具有重要作用[7,8]。miRNAs表达异常能影响肿瘤相关的重要生物学行为,如肿瘤细胞的分化、迁移、增殖等。因此,筛查肿瘤组织的miRNAs表达谱,对肿瘤发生、发展的机制研究具有重要意义[9]。

miR-21是较早发现的具有致癌基因作用的人类miRNAs之一,位于17q23.2染色体FRA17B脆性区域,且具有自主转录单位的miRNA,通过调节RAS/MEK/ERK通路从而抑制凋亡基因的表达[10]。Komastsu等[11]研究发现,ESCC患者血浆miR-21表达增高,并与肿瘤的侵袭和术后复发有关。研究发现,miR-21在多种肿瘤中表达增高,可调控p53、PTEN或PI3K/AKT/mTOR等基因或通路,发挥癌基因的作用[12]。本研究发现,ESCC组织miR-21表达增高,且存在淋巴结转移、较晚临床分期的患者miR-21表达较高,miR-21高表达者的3年生存率低于低表达者,miR-21高表达是影响ESCC患者预后的独立因素,提示miR-21高表达与ESCC的发生、发展密切相关。

miR-375位于2q2.3,拥有独立的启动子并受转录调控信号调节,可通过抑制Janus激酶2、胰岛素样生长因子1受体等重要癌基因发挥抑癌作用[13]。Mathe等[14]研究发现,ESCC组织中miR-375的表达显著降低。Harris等[15]研究发现,头颈部鳞状细胞癌患者miR-375低表达者的预后较差,并与癌转移密切相关。本研究发现,在ESCC癌组织中miR-375的表达降低,且miR-375低表达患者生存预后较差,是影响ESCC患者预后的独立因素,提示miR-375下调可能参与了ESCC的发生发展,miR-375可能发挥了抑癌基因作用。

综上所述,ESCC患者癌组织中miR-21表达增高,且发生淋巴结转移及临床分期较高者miR-21表达较高,miR-21高表达、miR-375低表达的ESCC患者预后较差。

参考文献:

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