急性胰腺炎34例血清β-半乳糖苷酶活性水平变化及其意义分析

作者单位：1.100040呼和浩特，武警内蒙古总队医院：1.门诊部，2.骨科；3.100029，首都医科大学附属北京安贞医院心外科；4. 430060，武汉大学人民医院

急性胰腺炎34例血清β-半乳糖苷酶活性水平变化及其意义分析

巩俊卿1，云文科2，杨波3,4

【关键词】急性胰腺炎；β-半乳糖苷酶；APACHEⅢ评分；酶联免疫吸附试验

通讯作者：杨波，E-mail：yangbohoo@126.com

【中国图书分类号】R657.51

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是常见急腹症，轻型时胰腺充血、水肿；严重者胰腺组织出血、坏死，并引起全身炎性反应综合征，甚至多脏器功能衰竭，病死率高达20%～40%[1，2]。维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein，DBP)是分子量为51～58 ku的多功能血浆糖蛋白，多项研究发现，DBP水平与胰腺炎的病情相关，且在多种疾病(如脓毒血症、爆发性肝细胞坏死、慢性阻塞性肺病)的发病过程中发生转变[3-5]。β-半乳糖苷酶是一种糖基转移酶，可在局部炎性反应时作用于DBP，从而引起一系列的级联反应[6]。本研究旨在探讨β-半乳糖苷酶水平的高低与AP患者病情严重程度的关系，为临床治疗提供理论依据。

1　临床资料

1.1一般资料选择武汉大学人民医院肝胆腔镜外科2012-05至2013-05收治的34例AP患者，男18例，女16例，年龄29～72岁，平均(41.6±7.4)岁。均符合2007年中国重症AP诊治指南中的诊断标准[7]。

1.2排除标准(1)发病时间超过2 d的AP患者；(2)复发性AP患者；(3)发病前即有肝、肺、肾等重要器官功能不全的患者；(4)患有慢性炎性反应、肿瘤等基础疾病者；(5)发病期间同时患有感冒等呼吸道传染性疾病者。

1.3分组根据文献[8]报道，将APACHEⅢ评分≥35分、阳性指标项≥6项的患者认定为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)组，共21例；另外13例则为轻型急性胰腺炎(mild acute pancreatitis，MAP)组。对照组为常规体检、结果无阳性项目且不患有任何基础疾病者，共20例，其中男10例，女10例，年龄25～73岁，平均(39.8±6.8)岁。

1.4方法

1.4.1实验材料人β半乳糖苷酶酶联免疫分析试剂盒(Human β-galactosidase,βGAL ELISA Kit，CSB-E09463h)：武汉华美生物工程有限公司(CUSABIO)。SZ-97自动三重纯水蒸馏器：上海亚荣生化仪器厂。Beckman离心机(JM-6)：美国Beckman公司。Eppendorf 1000 μl、200 μl、10 μl自动移液器：德国Eppendorf公司。BS60三用恒温水箱：北京医疗设备厂。300 ℃恒温烘箱：北京医疗设备厂。OLMPUS AU2700全自动生化分析仪：日本OLMPUS公司。真空采血管：Vacutainer紫头管(血常规检测用)，黄头管(血清检测用)，蓝头管(凝血功能检测用)，均由美国BD公司提供。酶标仪：美国BIO-RAD公司。

1.4.2实验方法

1.4.2.1血常规及生化指标测定动静脉全血标本及血清标本于武汉大学人民医院检验科行血常规、血生化、淀粉酶、脂肪酶及动脉血气分析检测，根据结果行APACHEⅢ评分。

1.4.2.2血清β-半乳糖苷酶活性水平检测AP组患者收集其入院后首次采血时标本。对照组收集体检时任一检查采血标本，以人β半乳糖苷酶Elisa试剂盒测定各样本β半乳糖苷酶活性水平(U/ml)。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线，得出标准曲线方程。再以待测标本的OD值根据方程计算各标本的β-半乳糖苷酶活性浓度，最后乘以稀释倍数，即为各临床血清标本β-半乳糖苷酶的实际活性浓度。

1.6结果与对照组比较，MAP组和SAP组血清β-半乳糖苷酶活性明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。SAP组血清β-半乳糖苷酶活性明显低于MAP组(P<0.05)，SAP组APACHEⅢ评分明显高于MAP组(P<0.05，表1)。

表1各组急性胰腺炎标本血清β-半乳糖苷酶活性水平及APACHEⅢ评分情况

组别β-半乳糖苷酶活性(U/ml)APACHEⅢ评分(分)对照组8.38±1.79-MAP组5.48±2.02①30.08±3.20SAP组3.03±1.41①②48.52±15.00②

注：与对照组比较，①P<0.05；与MAP组比较，②P<0.05

2　讨　　论

AP组织学特点是腺泡细胞的坏死和实质的炎性浸润。大多数病情温和，且具有自限性，但仍有15%～20%的患者起病迅猛，发展为多脏器功能衰竭，甚至死亡[9，10]。β-半乳糖苷酶已广泛应用于医学领域，特别是免疫学方面。生物体中的β-半乳糖苷酶由免疫系统的B淋巴细胞产生，参与脓毒血症、寄生虫感染等多种疾病的免疫应答过程。对于巨噬细胞的产生及募集起到至关重要的作用。而在AP的发病过程中，巨噬细胞诱导的局部炎性反应也是推动其疾病进程的重要环节[11-13]。

本研究发现，SAP和MAP组的血清β-半乳糖苷酶水平明显低于对照组，且SAP组血清β-半乳糖苷酶水平也明显低于MAP组(P<0.05)。说明β-半乳糖苷酶在AP患者发病过程中起到一定作用，且随着病情变化，其水平也在变化，病情越重，数值越低。其数值的高低在某种程度上反映了疾病的严重程度，且β-半乳糖苷酶与血清淀粉酶、脂肪酶呈负相关。由此可以推理，β-半乳糖苷酶可以作为临床治疗AP好转与治愈的观察指标。分析产生本实验结果的原因，可能为免疫系统中由B细胞产生的β-半乳糖苷酶使DBP所携带的糖基发生改变，促进受损组织中巨噬细胞的吞噬作用及过氧化物生成[14]。一方面，β-半乳糖苷酶用于对DBP的修饰，由于催化作用的消耗，使其血清内活性明显降低；另一方面，AP早期以巨噬细胞介导的胰腺局部炎性反应为主，因此，B细胞产生的β-半乳糖苷酶在胰腺组织内部消耗较多。与此同时，外周血清的β半乳糖苷酶因浓度差向胰腺内部聚集，导致胰腺内β-半乳糖苷酶活性升高，外周血活性降低，促使维生素D结合蛋白-巨噬细胞激活因子(DBP-MAF)生成量增加，单核细胞向巨噬细胞分化量增加，加重了胰腺局部炎性反应。

综上所述，AP患者血清中β-半乳糖苷酶活性明显低于健康者，且患者病情越严重，其血清活性越低，提示β-半乳糖苷酶可能参与到AP的发病机制过程中。但其与AP炎性反应之间的具体机制，有待进一步研究。

【参考文献】

[1]Kapoor K, Banks P A. Acute pancreatitis in a patient treated with liraglutide[J]. JOP，2013, 14(2): 109-111.

[2]骞秀芳, 郭喆, 胡常菊. 白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠炎性细胞因子的影响 [J]. 武警医学，2013, 24(11): 948-950.

[3]Faserl K, Golderer G, Kremser L,etal. Polymorphism in vitamin D-binding protein as a genetic risk factor in the pathogenesis of endometriosis[J]. J Clin Endocrinol Metab，2011, 96(1): 233-241.

[4]冀文丽, 王勤英. 检测维生素D 结合蛋白在重型肝炎中的意义[J]. 中国药物与临床，2008, 8(3): 246-247.

[5]陆明, 杨蓓, 蔡映云. 维生素D 结合蛋白基因多态性与吸烟所致慢性阻塞性肺疾病的关系[J]. 中华内科杂志，2004, 43(2): 117-120.

[6]Li W, Zhao X, Zou S,etal. Scanning assay of beta-galactosidase activity[J]. Prikl Biokhim Mikrobiol，2012, 48(6): 668-672.

[7]中华医学会外科学分会胰腺外科学组. 重症急性胰腺炎诊治指南[J]. 中华外科杂志，2007, 45(11): 727-729.

[8]Paul E, Bailey M, Van Lint A,etal. Performance of APACHE III over time in Australia and New Zealand: a retrospective cohort study[J]. Anaesth Intensive Care，2012, 40(6): 980-994.

[9]Alain V, Jeremy S W, Minoti V A. Molecular mechanisms of pancreatitis: Current opinion[J]. J Gastroenterol Hepatol，2008, 23(9): 1339-1348.

[10]Talukdar R, Vege S S. Recent developments in acute pancreatitis[J]. Clin Gastroenterol Hepatol，2009, 7(11): 3-9.

[11]Brtko J, Hartl A, Weiss R,etal. Retinoic acid receptor status in mouse spleen during a primary immune response against beta-galactosidase[J]. Endocr Regul， 2000, 34(3): 113-118.

[12]Brubaker J O, Thompson C M, Morrison L A,etal. Th1-associated immune responses to beta-galactosidase expressed by a replication-defective herpes simplex virus[J]. J Immunol，1996, 157(4): 1598-1604.

[13]Saeki K, Kanai T, Nakano M,etal. CCL2-induced migration and SOCS3-mediated activation of macrophages are involved in cerulein-induced pancreatitis in mice[J]. Gastroenterology，2012, 142(4): 1010-1020.

[14]Kisker O, Onizuka S, Becker C M,etal. Vitamin D binding protein-macrophage activating factor (DBP-maf) inhibits angiogenesis and tumor growth in mice[J]. Neoplasia，2003, 5(1): 32-40.

(2014-11-04收稿2015-01-16修回)

(责任编辑尤伟杰)