青海地区非小细胞肺癌患者EGFR突变状态分析 *

*：青海省(应用)基础研究计划项目(2013-Z-735)

杨启英(1965～)，女，汉族，青海籍，副主任检验师

青海地区非小细胞肺癌患者EGFR突变状态分析*

杨启英，卢天龙

(青海大学附属医院检验科，青海 西宁 810000)

摘要目的探讨青海地区非小细胞肺癌(NSCLC) 患者表皮生长因子受体(EGFR) 基因的突变情况。方法经病理确诊的300例NSCLC患者，采用聚合酶链反应(PCR)扩增方法检测EGFR第18、19、20和21外显子的突变情况，并行相关分析。结果300例NSCLC患者标本EGFR(exon18)突变4例，突变率1.3%；EGFR(exon19)突变36例，突变率12.0%；EGFR(exon20)未检出；EGFR(exon21)突变54例，突变率18.0%。结论青海地区NSCLC患者EGFR基因外显子19和21的突变(体细胞突变)率较高，可接受EGFR-TKIs治疗。

关键词非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变青海地区

中图分类号R734.2

文献标识码A

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.03.001

AbstractObjectiveTo investigate the mutation of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene in non small cell lung cancer(NSCLC)patients at Qinghai area.Methods 300 cases of patients with NSCLC were defined by pathological diagnosis and then using polymerase chain reaction(PCR)amplification method to detect the mutation in EGFR 18，19，20 and 21 exons.Results Of 300 patients with NSCLC there were 4 cases mutated in EGFR(exon18)，the mutation rate was 1.3%；36 cases in EGFR mutations(exon19)，the mutation rate was 12.0%；there was no mutation was found in EGFR(exon20)；54 cases mutated in EGFR (exon21)，the mutation rate was 18.0%.Conclusion The rate of mutation in exon 19 and 21(somatic mutation)of EGFR genes in patients with NSCLC is higher，and they can be treated with EGFR - TKIs.

KeywordsNon-small-cell lung cancerEpidermal growth factor receptorMutation Qinghai

收稿日期2015-04-03

ANALYSIS OF EGFR MUTATION IN NON-SMALL CELL LUNG

CANCER AT QINGHAI REGION

Yang Qiying，Lu Tianlong

(Dept.of clinical laboratory，The Qinghai university affiliated hospital，Xining，Qinghai 810000)

肺癌组织内血管形成与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)表达水平相关[1]。非小细胞肺癌(NSCLC)的靶向治疗已成为临床重要的治疗手段，EGFR被认为是能有效治疗非小细胞肺癌的靶点之一[2]，在开展以EGFR靶向用药前，进行靶标检测和分子亚型区分成为接受EGFR-TKIs治疗的必要过程。青海为高海拔地区，肺癌发病率高，肺癌靶向治疗的靶点筛查空白。本研究通过实时荧光Taqman探针法，分析青海地区300例NSCLC患者肺癌病理切片，了解其EGFR突变情况，为NSCLC 患者的临床药物分子靶向治疗提供依据。

1资料与方法

1.1　标本来源

选用青海地区300例临床病理资料完整，未经过放化疗的肺癌组织标本。标本通过HE染色和免疫组织化学染色确定组织类型。300例肺癌患者，男186例，女114例。年龄35～75岁，中位年龄55岁，<55岁56例，55岁244例。肿瘤标本中鳞癌128例，腺癌172例。

1.2　试剂及仪器

石蜡切片组织DNA提取试剂购自BIOMIGA公司，人EGFR基因突变检测试剂盒购自上海源奇生物医药科技有限公司。检测仪器为ABI 7500实时荧光定量PCR仪。

1.3　研究方法

1.3.1检测方法

利用实时荧光Taqman探针法，采用PCR体外扩增，通过荧光信号的变化，检测患者标本中EGFR突变情况，具体实验步骤按试剂盒使用说明书进行。

1.3.2结果判定方法

1.3.2.1阴性对照有效性判定：CT值≧38或显示“Undet”。

1.3.2.2阳性对照有效性判定：CT值<36。

1.3.2.3结果判定：参照试剂盒说明。

1.4　统计学方法

应用SPSS 16.0进行统计分析，EGFR基因突变情况与临床特征采用χ2检验。检验水准α=0.05。

2结果

300例肺癌患者标本检测结果：EGFR(exon18)突变4例，突变率1.3%，由于突变例数较少，结果显示exon18突变情况在患者年龄大小、性别、吸烟情况、组织类型等临床特征无差异(P>0.05，表1)；EGFR(exon19)突变36例，突变率12.0%，结果显示exon19突变情况在患者年龄无差异(P>0.05)，在性别、吸烟状态、组织类型等临床特征有差异(P<0.05，表2)，不吸烟、女性、腺癌等临床特征组exon 19突变率较高；EGFR(exon20)未检测出突变，可能跟青海地区未使用EGFR-TKIs有关；EGFR(exon21)突变54例，突变率18.0%，结果显示exon21突变情况在患者年龄无差异(P>0.05)，在性别、吸烟状态、组织类型等临床特征有差异(P<0.05，表3)，不吸烟、女性、腺癌等临床特征组exon21突变率较高。

表1　NSCLC患者EGFR(exon18)突变情况与临床特征关系

表2　NSCLC患者EGFR(exon19)突变情况与临床特征关系

表3　NSCLC患者EGFR(exon21)突变情况与临床特征关系

3结论

EGFR的分子靶向药物抑癌机制是，通过阻断EGFR介导的细胞内信号通路，抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长和转移，提高肿瘤细胞放化疗的敏感性，促进癌细胞凋亡或死亡。EGFR的分子靶向药物主要分两类：①酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，通过抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性，阻断其细胞信号通路产生抑癌作用；②单克隆抗体，通过与EGFR胞外区结合，阻断EGFR活化产生抑癌作用。临床运用结果表明这些靶向药物仅对部分患者有效，进一步的研究发现EGFR基因外显子19和21的突变(体细胞突变)是此类靶向药物发挥效应的必要前提[3-4]。美国哈佛医学院的研究人员Lynch等2004年率先报道，肺肿瘤组织细胞中存在EGFR外显子19缺失或外显子21突变的患者，靶向药物易瑞沙的有效率高达80%以上[5]。有临床研究表明，EGFR突变分布与患者临床使用EGFR-TKIs治疗疗效相符，主要为腺癌、女性、非吸烟患者及亚洲患者[6]。然而，一部分对EGFR-TKIs治疗有效的患者最终都会对EGFR-TKIs产生耐药性。进一步临床研究还表明，EGFR基因外显子20的体细胞突变是EGFR-TKIs继发耐药的主要机制之一。患者EGFR的分子靶向药物治疗后复发肺癌，可引起EGFR外显子20的第790位密码子C→T的转换，导致EGFR蛋白该位点的苏氨酸转变为甲硫氨酸(T790M)[7-8]。这一突变使得非小细胞肺癌患者对吉非替尼和厄罗替尼产生抗性[9-10]。2009年美国国家癌症综合网络(NCCN)颁布的临床指南[11]中明确指出，EGFR突变，尤其是肿瘤对如吉非替尼的敏感度与外显子19缺失突变存在重要影响。

通过对青海地区300例NSCLC患者研究发现，青海地区EGFR基因突变主要为19和21外显子，突变率分别为12.0%和18.0%。结果显示exon19和exon21突变与患者年龄无关，与性别、吸烟状态、组织类型等有关，主要为腺癌、女性、非吸烟患者。无20号外显子的突变，说明青海地区非小细胞肺癌患者对吉非替尼和厄罗替尼敏感、无EGFR的分子靶向药物抗性，肺癌患者有使用TKIs药物指征，且无20号外显子的突变。本研究采用实时荧光Taqman探针法，回顾分析青海地区大量的临床标本，检测EGFR基因突变情况，探讨其突变特点以及与多项临床特征的关系，对指导青海NSCLC患者使用EGFR-TKIs进行个体化治疗具有十分重要的意义。

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