四逆汤对腹主动脉缩窄大鼠血压和压力反射敏感性的影响

四逆汤对腹主动脉缩窄大鼠血压和压力反射敏感性的影响

吴 琼,刘永明,高俊杰,邵春林,沈智杰,陈铁军,郭 蔚,王英杰,王肖龙

摘要:目的 研究四逆汤方对腹主动脉缩窄大鼠血压和压力反射敏感性(BRS)的影响。方法 采用腹主动脉缩窄法制备高血压大鼠模型50只,造模成功后随机分为模型组(M组)、假手术组(B组)、四逆汤组(S组)、四逆汤+培哚普利组(SP组)、培哚普利组(P组)共5组,每组10只。术后4周开始灌胃,以假手术组为空白对照组,培哚普利组为阳性药物对照组,药物干预8周。用尾动脉仪连续动态测量大鼠左前肢血压。干预后8周通过股动脉插管,股静脉注射苯肾上腺素观察大鼠BRS、血压变化。结果 造模后4周,与假手术组相比,各组收缩压均显著增高(P<0.001)、舒张压增高不明显(P>0.05),其中四逆汤组、四逆汤+培哚普利组舒张压增高(P<0.05)。药物干预后4周,与模型组相比,四逆汤组、四逆汤+培哚普利组、培哚普利组收缩压均明显降低(P< 0.001),舒张压虽无明显降低,但与造模后血压相比有所下降(P<0.05)。药物干预后8周,与前一时间点血压相比,各组血压均无进一步降低(P>0.05)。药物干预后,与模型组相比,四逆汤组、四逆汤+培哚普利组、培哚普利组BRS明显上升(P<0.001)。结论 四逆汤可改善腹主动脉缩窄大鼠的血压,可增加腹主动脉缩窄大鼠压力反射敏感性。

关键词:腹主动脉缩窄;四逆汤;压力反射敏感性;血压

中图分类号:R544.1 R285.5

文献标识码:A

doi:10.3969/j.issn.1672-1349.2015.12.008

文章编号:1672-1349(2015)12-1381-04

基金项目:上海市中医临床重点实验室基金项目(No.14DZ2273200)

通讯作者:王肖龙,E mail:wxlqy0214@163.com

Abstract:Objective To study the effects of Sini decoction(SND)on blood pressure and baroreflex sensitivity(BRS)in rats with abdominal aortic coarctation.Methods Fifty hypertension rats were established by abdominal aortic coarctation operation.After mode-l ing,rats were randomly divided into 5 groups:Sham operation group,SND group,SND plus perindopril group,perindopril group and model group.Rats were gavaged 4 weeks later.The sham operation group was the control group,perindopril as the positive control group.Caudal artery with continuous dynamic measurement instrument left forelimb blood pressure in rats.By cannulating into femoral artery,injecting phenylephrine into femoral artery,we observe the change of BRS,MAP,and HR.Results After modeling of 4 weeks,compared with the control group,the systolic blood pressure were significantly increased in each group(P<0.001).After drug intervention of 4 weeks,compared with the model group,the systolic blood pressure were significantly lower in SND group,SND plus perindopril group,perindopril group(P<0.001).The diastolic blood pressure was lower after modeling(P<0.05).After drug intervention,compared with model group,the BRS obviously increased in SND group,SND plus perindopril group,perindopril group(P<0.001).Conclusion SND can improve the blood pressure and increase the baroreflex sensitivity in rats with abdominal aortic coarctation.

作者单位:上海中医药大学附属曙光医院(上海201203)

Influence of Sini Decoction on Blood Pressure and Baroreflex Sensitivity in Rats with Abdominal Aortic Coarctation

Wu Qiong,Liu Yongming,Gao Junjie,Shao Chunlin,Shen Zhijie,Chen Tiejun,Guo Wei,Wang Yingjie,Wang Xiaolong

Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China

Corresponding Author:Wang Xiaolong

Key words:abdominal aortic coarctation;Sini decoction;baroreflex sensitivity;blood pressure

压力反射敏感性(baroreflex sensitivity,BRS)是血压变化导致反射性心率变化的敏感程度,反映血压升高所引起的心脏迷走神经反射调节情况。大量研究证实BRS降低可能是血压变异性(BPV)升高的原因之一,同时也是导致原发性高血压发生发展的原因之一。本实验室前期研究发现四逆汤能够改善高血压患者的BPV,而BPV与BRS呈负相关。本研究通过观察四逆汤对腹主动脉缩窄大鼠血压、压力反射功能的影响,进一步探讨其治疗高血压的机制。

1　材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级雄性Wistar大鼠,体重170 g~ 220 g,购自上海中医药大学实验动物中心,动物合格证号:SCXK(沪)2012 0002。

1.1.2 药品 中药:熟附片、炙甘草、干姜、桂枝、山萸肉、茯苓,所有药物均由曙光医院药剂科提供,按1∶1∶1∶1∶1∶1组方,将药物浸泡后,加入适量蒸

馏水,武火烧开,文火煎煮30 min,药液过100目不锈钢筛,再放入浓缩锅中浓缩,最终制成含生药为0.972 g/mL及1.944 g/mL的药液。培哚普利(每片4 mg),由施维雅制药有限公司生产(批号202353),碾碎,过药典100目筛后,置于加入含0.5%混悬剂(羟甲基纤维素钠)的双蒸水中,制成0.036 mg/mL、0.072 mg/mL浓度的培哚普利混悬剂。

1.1.3 试剂 戊巴比妥钠:国药集团化学试剂有限公司;注射用青霉素钠:上海先锋药业有限公司;肝素钠注射液:上海第一生化药业有限公司;苯肾上腺素注射液:上海禾丰制药有限公司。

1.1.4 仪器 EL120型电子天平:日本岛津制作所;大鼠尾动脉血压仪BP 3006A型:上海软隆公司;501型超级恒温水浴槽:上海精宏实验设备公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠模型制备 动物喂养标准合成饲料,实验前适应性饲养7 d。参照文献[1,2]及本实验室相关手术方法,用腹主动脉缩窄法制成心脏压力负荷超载高血压模型。

1.2.2 实验分组 各组大鼠于造模4周后,用无创血压仪BP 2000系统,通过左上肢袖法测量各组大鼠血压,以收缩压>140 mmHg为造模成功[3],随机分为假手术组(B组)、四逆汤组(S组)、四逆汤+培哚普利组(SP组)、培哚普利组(P组)、模型组(M组),每组10只。

1.2.3 给药方法 造模4周后开始给药,根据“人和动物按体表面积折算的等效剂量比值表”折算等效剂量,模型组、假手术组予蒸馏水10 mL/(kg·d)灌胃;四逆汤组予四逆汤0.81 g/(kg·d)灌胃;四逆汤+培哚普利组先予四逆汤0.81 g/(kg·d),再予培哚普利混悬液0.36 mg/(kg·d)灌胃;培哚普利组予培哚普利混悬液0.36 mg/(kg·d)灌胃。每日1次定时灌胃,每周6 次,共干预8周。

1.3 观察指标

1.3.1 血压测定 参照文献[4,5]用浓度为3%戊巴比妥钠1.17 mL/kg腹腔麻醉,用大鼠尾巴固定装置固定大鼠左前肢,通过应用尾动脉血压仪(BP 2006A型)测定血压和心率。每只动物测5次~7次,取其中3个较接近血压的平均值作为最终的测量数据。检测时间固定为09:00~11:00。分别于造模前、造模后4周、药物干预后4周及8周测定1次。

1.3.2 动脉压力反射敏感性测定 手术方法药物干预第8周时,实验大鼠禁食不禁水12 h,于末次给药后6 h参照文献按照改良的Smyth[6]方法进行动脉压力反射敏感性检测。BRS的测定按照Smyth法[6],静脉注射苯肾上腺素,引起血压升高、心率降低,以心率变化与血压变化的比值代表BRS。本实验静脉注射苯肾上腺素5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg升高血压,引起反射性心动过缓,反映压力反射对升压的敏感性,在比较了3种剂量在假手术组和模型组大鼠引起的血压和心率变化后,最后选定PE为10μg/kg用于诱发压力反射。

1.4 统计学处理 采用SPSS19.0统计软件分析,数据用均数±标准差(x±s)表示,组间分析采用ANOVA分析和配对样本t检验。P <0.05为差异有统计学意义。

2　结 果

2.1 大鼠一般状况 治疗前假手术组、四逆汤组、四逆汤+培哚普利组、培哚普利组、模型组各10只。假手术组于药物干预后第4周、第8周测量血压时各死亡1只,最终剩余8只;四逆汤组于造模后死亡1只, 第4周测量血压时死亡1只、检查心脏超声时死亡1 只,最终剩余7只;四逆汤+培哚普利组于灌胃时死亡2只,为窒息导致,最终剩余8只;培哚普利组于第8周测量血压时死亡2只,最终剩余8只。模型组于干预后第4周测量血压时死亡1只,检查心脏超声时死亡2只,最终剩余7只。

2.2 各组大鼠血压比较 造模前各组大鼠血压差异无统计学意义(P >0.05)。造模后4周,与假手术组比较,其余各组大鼠收缩压(SBP)均显著增高(P<0.001);四逆汤组、四逆汤+培哚普利组舒张压(DBP)升高(P<0.05),培哚普利组、模型组舒张压均无明显变化(P >0.05);各组大鼠平均动脉压(MBP)均升高(P<0.05)。药物干预后4周,与模型组相比,各组大鼠收缩压显著降低(P <0.01),其中四逆汤+培哚普利组、培哚普利组降低更明显(P <0.001),但四逆汤+培哚普利组、培哚普利组比较差异无统计学意义;而各组舒张压、平均动脉压均无明显降低(P > 0.05),但与造模后血压相比,药物干预组均明显降低(P<0.01)。药物干预后8周,与前一时间点血压相比,各组血压均无进一步降低,其中培哚普利组收缩压略有升高,假手术组、四逆汤+培哚普利组舒张压、平均动脉压略有升高,但与假手术组、模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

2.3 大鼠动脉BRS比较 药物干预后第8周,对大鼠BRS进行检测。以同样剂量注射苯肾上腺素至少3次,根据每次MAP变化及随之变化的心率,算出直线回归方程,并规定r值必需大于0.8。与假手术组相比,四逆汤组、四逆汤+培哚普利组、培哚普利组、模型组BRS均降低,其中模型组降低幅度最大(P<0.001),四逆汤+培哚普利组幅度最小(P< 0.05)。与模型组相比,药物干预组BRS均升高(P< 0.001)。详见表2。

表1　各组大鼠血压比较(x±s) mmHg

表2　各组大鼠BRS比较(x±s)　ms/mmHg

3　讨 论

目前,关于四逆汤是否能够直接降低高血压大鼠血压方面的报道很少,在本研究的临床部分,已经证实了四逆汤加基础降压治疗具有降压疗效,但四逆汤自身是否有降压效果还不得而知。而此次动物实验部分,发现用药4周后,四逆汤的确能够降低高血压大鼠的血压,其中降低收缩压的幅度更大,且疗效与西药相当。而四逆汤与四逆汤加载西药治疗相比,两组降压效果无明显差异,更进一步提示单用四逆汤的确有降压效果。另外,药物干预后8周,无论是四逆汤、还是西药,或是合并治疗皆未能进一步降压,提示当血压降低到正常水平后,继续服用抗高血压药物不会进一步降压从而引起一些低血压类事件。

压力反射敏感性是迷走神经反应性指标,可以评价动脉压力感受器反射活动。有研究证实,BRS降低可能是BPV升高的原因之一,同时也是导致原发性高血压发生发展的原因之一。而有相关实验表明,许多抗高血压药物被证明能够改善压力反射敏感性[7]。本实验结果也提示,四逆汤在降低大鼠血压的同时,具有改善压力反射敏感性的作用,培哚普利组、四逆汤加培哚普利组也均能改善BRS,四逆汤组优于培哚普利组,但差异无统计学意义。另外,与模型组相比,四逆汤+培哚普利组BRS明显上升(P <0.001),提示中药联合西药治疗在改善BRS上可能具有更加明显的作用。

四逆汤出自《伤寒论》,由附子、干姜、甘草组成。本实验以之为基础方,加桂枝通阳、山萸肉收敛固涩、茯苓利水。近年来,关于四逆汤的研究越来越多,包括免疫调节、抗动脉粥样硬化、保护脑缺血后损伤、保护心肌、胃肠黏膜等,但是四逆汤与BRS方面的联系还未见报道,而本实验证实四逆汤能够改善高血压大鼠的压力反射敏感性,在结合了动脉压力反射敏感性自身特点以及四逆汤作用特征后,推测四逆汤易化BRS,可能机制为:①通过降低血中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),使其缩血管作用减少从而抑制大鼠主动脉弓的冲动发放[8]。杨学伟等证实四逆汤能够降低腹主动脉缩窄大鼠的血浆AngⅡ,而本实验也同样证实了四逆汤有减少血浆血管紧张素的作用,因此降低AngⅡ可能是四逆汤易化BRS的机制。②通过降低AngⅡ致使压力反射重调定减弱。有研究证实,静脉注射AngⅡ可引起压力反射重调定,其机制可能为兴奋大脑中枢最后区的神经元,通过抑制心迷走活性,引起交感兴奋,从而致使血压升高[9]。但是这种作用在介导血压上升的同时通常不引起心率的反射性降低。四逆汤在通过