ILK 和MMP-9 在胃癌及其侵袭、转移中的表达及意义

张凤梅，李胜水，李秀清，孙凤莉，许 华，李双标

1.河北省沧州中西医结合医院病理科，河北 沧州061001;2.河北省沧州市人民医院病理科;3.河北省沧州市中心医院胸外科

胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一。淋巴结及网膜转移是其最常见的转移方式，与胃癌预后关系密切［1］。整合素连接激酶(integrin-linked kinase，ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，以依赖PI-3K 方式激活，通过磷酸化蛋白激酶B(PKB)等下游底物使细胞外信号向下游传递，发挥生物学效应，它能促进肿瘤的侵袭和转移［2］。基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases-9，MMP-9 )主要降解以Ⅳ型胶原为主的基底膜屏障，对于肿瘤形成是非常重要的［3-4］。近年研究表明ILK 和MMP-9 在肿瘤侵袭转移中起重要作用［5］。本研究应用免疫组织化学方法检测ILK 和MMP-9 在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达，分析二者与胃癌浸润、转移的关系及其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集河北省沧州中西医结合医院2010 年1 月-2013 年1 月的胃癌手术石蜡标本共80例，男55 例，女25 例，年龄36 ～86 岁。术前均未经放化疗及其他生物治疗，临床病理资料完整。所有标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，3 μm 连续切片备用。另选取30 例经胃镜组织学检查相对正常的胃黏膜标本作为对照组。

1.2 主要试剂及方法 采用免疫组织化学SP 法进行染色。ILK(兔抗人单克隆抗体)、MMP-9(兔抗人多克隆抗体)及SP 免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。染色过程严格按说明书进行，用已知阳性组织切片作阳性对照，用PBS(pH7.4)代替一抗作阴性对照，染色步骤严格按照试剂说明书进行。

1.3 结果判定 ILK 阳性:棕色颗粒分布于胞浆或胞膜，呈均质状。MMP-9 阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆和胞膜中，呈黄色细颗粒状，散在点状分布。阳性判断标准:按染色强度记分，无染色为0 分，浅黄色为1分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分;再按阳性细胞所占的百分比记分，未见染色细胞为0 分，＜25%为1 分，25% ～50%为2 分，＞50%为3 分;两者相加，＜3 分为阴性，≥3 分为阳性。所有评判均由同一病理医师完成。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0 统计软件包进行统计学分析。免疫组织化学结果与临床病理参数间关系的统计采用χ2检验，相关性检验采用Spearman 等级相关检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ILK 和MMP-9 在胃癌中的表达 胃癌患者中44 例(55. 0%)ILK 蛋白阳性表达、53 例(66. 3%)MMP-9 蛋白阳性表达;对照组中ILK 和MMP-9 的阳性率分别为6. 7% (2/30)和10. 0% (3/30);ILK 和MMP-9 在胃癌组织中较正常胃黏膜组织中的表达高，差异有统计学意义(P ＜0.05，见图1 ～2、表1)。

表1 ILK 及MMP-9 在胃癌组及对照组中的表达［例数(%)］Tab 1 Expression of ILK and MMP-9 in gastric cancer group and normal control group［n(%)］

2.2 ILK 和MMP-9 的阳性表达与胃癌临床病理参数的关系 80 例胃癌患者中ILK 和MMP-9 阳性表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及大网膜转移有相关性(P ＜0.05)，而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无相关性(P ＞0.05，见表2)。

表2 ILK 和MMP-9 的表达与胃癌临床病理参数的关系［例数(%)］Tab 2 The relationship between expression of ILK，MMP-9 in gastric cancer and the clinicopathological parameters［n(%)］

续表2

2.3 ILK 与MMP-9 表达之间的关系 80 例胃癌组织中，ILK 和MMP-9 表达均阳性的患者41 例，ILK 阳性、MMP-9 阴性者3 例，ILK 阴性、MMP-9 阳性者12例，两者均阴性24 例。经Spearman 等级相关分析发现，胃癌组织ILK 表达与MMP-9 表达呈显著正相关(r=0.553，P ＜0.01，见表3)。

表3 胃癌组织中ILK 与MMP-9 蛋白表达的关系Tab 3 The relationship between ILK and MMP-9 expressions in gastric cancer

3 讨论

ILK 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其N 端具有4 个锚蛋白重复序列，其下是一个磷酸肌醇结合基序。PI3K 是在1984 年发现的一种胞内磷脂酰肌醇激酶，其产物包括PIP2 和PIP3 等。PIP3 与ILK 的磷酸肌醇结合基序结合后活化，并磷酸化激活PKB/Akt，从而调节细胞生长、分化、黏着及侵袭，抑制细胞凋亡，促进细胞增殖［6］。因此ILK 的表达和活性的微小改变，就可能导致人类肿瘤的发生［7］。ILK 在子宫内膜癌［8］、乳腺癌［9］等多种恶性肿瘤中高表达，且表达程度与肿瘤的恶性程度及预后不良有关。本研究显示，ILK 在80例胃癌中阳性率55.0%，显著高于对照组(P ＜0.05)，且肿瘤浸润越深，ILK 表达越高;有淋巴结及大网膜转移组中的ILK 表达分别明显高于无淋巴结及大网膜转移组，提示ILK 可能胃癌的发病密切相关，并在胃癌的浸润及转移中起重要作用。

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteniase，MMPs)是锌离子依赖性内肽酶，它能降解细胞外基质所有成分，MMP-9 是MMPs 中降解基底膜最重要的蛋白酶之一，能有效降解细胞基底膜中的Ⅳ、V 胶原和明胶，致使癌细胞突破基底膜向周围浸润转移［10］。大量研究表明，MMP-9 在多种恶性肿瘤中呈现过度表达，在恶性肿瘤浸润转移过程中扮演着重要角色［11］。本研究显示，MMP-9 的高表达与胃癌肿瘤浸润深度、有无淋巴结及大网膜转移有关。肿瘤浸润越深，MMP-9 表达越高;有淋巴结及大网膜转移组中的MMP-9 表达分别明显高于无淋巴结及大网膜转移组，提示MMP-9 与胃癌的浸润性生长即发展、转移密切相关。与刘绍晨等［12］对胃癌的研究结果一致，证实MMP-9 过表达者胃癌细胞的侵袭性和转移性均升高，提示MMP-9 可作为反映胃癌恶性程度的指标之一，用于预测胃癌患者的预后。

目前国内有关ILK 和MMP-9 二者在胃癌中关系的研究未见文献报道。本研究发现ILK 与MMP-9 在胃癌组织中的表达呈显著正相关(r = 0.553，P ＜0.01)，41 例患者(51.25%)两者表达均为阳性时，相应地出现深度浸润、高临床分期和有淋巴结及大网膜转移的机会也大为增加，提示ILK 和MMP-9 在促进胃癌的发生、发展及浸润转移中可能存在某种时间或空间上的协同作用，可能的机制为高表达的ILK 诱导MMP-9 表达增加以促进细胞外基质和基底膜的降解，从而增强肿瘤细胞的侵袭力，并预示联合检测两项指标有助于胃癌生物学行为的判断和预后的估计。

［1］ Wu LL，Liang H，Wang XN，et al. The analysis of clinical related factors of recurrence and metastasis of gastric cancer after radical gastrectomy［J］. Chin J Dig，2011，31(1):17-20.吴亮亮，梁寒，王晓娜，等.胃癌根治术后复发转移临床相关因素分析［J］.中华消化杂志，2011，31(1):17-20.

［2］ Marotta A，Parhar K，Owen D，et al. Characterisation of inten linkedkinase signalling in sporadic human colon cancer［J］. Br J Cancer，2003，88(11):1755-1762.

［3］ Jiang PX，Liu GY，Liang BJ，et al. The expression and diagnostic value of MMP-9 and Snail in osteosarcoma［J］. Chin J Lab Diagn，2012，16(5):916-917.蒋朋翔，刘光耀，梁柏坚，等. MMP-9 和Snail 在骨肉瘤中的表达及其诊断意义［J］.中国实验诊断学，2012，16(5):916-917.

［4］ Tan YG，Wang XB，Wang Y，et al. The significance of OPN ＆ MMP-9 in the invasion and metastasis of pancreatic cancer［J］. China Medical Engineering，2011，19(6):60-64.谭永刚，王晓博，王颖，等. OPN、MMP-9 在胰腺癌发展及侵袭转移中的意义［J］. 中国医学工程，2011，19(6):60-64.

［5］ Wang FL，Huang JB. The expression of ILK and MMP-9 in non-small cell lung cancer［J］.Chin J Misdiagn，2010，10(19):4592-4593.王凤玲，黄佳滨. ILK 和MMP-9 在非小细胞肺癌中的表达［J］. 中国误诊学杂志，2010，10(19):4592-4593.

［6］ Peroukides S，Bravou V，Varakis J，et al. ILK over-expression in human hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis correlates with activation of Akt［J］. Oncol Rep，2008，20(6):1337-1344.

［7］ Persad S，Attwell S，Gray V，et al. Inhibition of inte grin-linked kinase(ILK)suppresses activation of protein kinase B/Akt and induces cell cycle arrest and apoptosis of PTEN-mutant prostate cancer cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A，2000，97(7):3207-3213.

［8］ Li CL，Liu CZ，Li SS，et al. The study of expression and correlation of ilk and estrogenreceptor(er)in en-dometrial carcinoma［J］. Clinical Research，2010，17(9):39-41.李春玲，刘春在，李胜水，等. ILK、ER 在子宫内膜癌组织中的表达及相关性分析［J］.临床研究，2010，17(9):39-41.

［9］ Li SS，Xu H，Yu CZ，et al. Clinical significance and expression of ILK in breast neoplasm［J］. China Medical Herald，2009，6(2):32-34.李胜水，许华，于翠珍，等. 乳腺肿瘤中整合素连接激酶(ILK)的表达及临床意义［J］.中国医药导报，2009，6(2):32-34.

［10］ Han M，Xu LY，Li EM. Advances in cancer control mechanism of MMP-9 expression［J］. Foreign Medical Sciences(Molecular Biology Section)，2003，25(1):24-26.韩溟，许丽艳，李恩民. 恶性肿瘤中MMP-9 表达调控机制研究进展［J］.国外医学(分子生物学分册)，2003，25(1):24-26.

［11］ Jia FX，Liu JW，Zhang D，et al. Prognostic value of the expressions of MMP-9 and COX-2 in pancreatic carcinoma［J］. Chin J Clinicians，2011，5(7):1917-1922.贾富鑫，刘江伟，张东，等. MMP-9 和COX-2 蛋白的表达对胰腺癌预后的影响［J］. 中华临床医师杂志，2011，5(7):1917-1922.

［12］ Liu SC，Xu Q，Qi JM. Research on the correlation between expression of MMP-9 and infiltration and metastasis of gastric carcinoma［J］. Antitumor Pharmacy，2012，2(3):173-176.刘绍晨，许倩，齐洁敏. MMP-9 的表达与胃癌浸润转移的相关性研究［J］. 肿瘤药学，2012，2(3):173-176.

［13］ Troussard A，Costello P，Yoganathan TN，et al. The integrin-linked kinase (ILK)induces an invasive phenotype via AP-1 transcription factordependent upregulation of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9)［J］. Oncogene，2000，19(48):5444-5452.