幽门螺杆菌感染、p53和VEGF表达水平与胃癌的关系

幽门螺杆菌感染、p53和VEGF表达水平与胃癌的关系

穆桂芳穆雪峰1毕海静曲玲谭悦菊孙光喜白厚桥高才华周利克陈文军董崇海

(青岛医学院附属威海医院威海市立二院消化内科，山东威海264200)

摘要〔〕目的探讨幽门螺杆菌感染、p53和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平与胃癌发生、发展的关系；方法收集120例威海市立二院消化科行胃镜检查的门诊及住院患者的胃组织样本和血液样本，其中胃癌组78例，不典型黏膜组25例、正常黏膜组17例；分别采用病理Warrthin-Starry银染和ELISA方法观察不同黏膜组织中幽门螺杆菌感染情况，免疫组化方法观察组织中p53 和VEGF的表达情况；结果胃癌组、不典型黏膜组幽门螺杆菌感染、p53和VEGF阳性表达率均明显高于阴性患者(P<0.05)，各组幽门螺杆菌感染阳性患者p53和VEGF阳性表达率明显高于阴性患者(P<0.05)；结论胃癌与幽门螺杆菌感染存在一定相关性，p53和VEGF可调控细胞凋亡，对胃癌的发生、发展可能起到一定的促进作用。

关键词〔〕幽门螺杆菌；p53；血管内皮生长因子； 胃癌

中图分类号〔〕R573.9〔文献标识码〕A〔

基金项目：威海市科技局科研基金资助(No.2012GNS042-1)

通讯作者：董崇海(1968-)，男，主任医师，主要从事消化系统肿瘤相关研究。

1吉林大学白求恩第一医院肝胆胰内科

第一作者：穆桂芳(1967-)，女，主治医师，主要从事消化系统肿瘤相关研究。

胃癌早期症状不典型，致使多数患者错过了治疗的最佳治疗时期，选择特异性高、灵敏度高的胃癌肿瘤标志物成为其临床诊断的一个研究热点。幽门螺杆菌(Hp)I型与胃肠道疾病关系密切，随着研究的不断深入，人们发现突变型p53、血管内皮生长因子(VEGF)也具有一定的致癌性〔1，2〕。本研究拟探讨Hp感染、p53和VEGF的表达情况与胃癌发生发展的关系，为胃癌的早期诊断提供新思路。

1材料与方法

1.1研究对象和样本收集选择2013年 6月至 2014 年 6月在威海市立二院门诊及住院部行胃镜检查的患者120例为研究对象，其中胃癌组78例、不典型黏膜组25例、正常黏膜组17例。各组人群的性别和年龄差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。收集所有研究对象的胃组织样本和血液样本。石蜡包埋胃组织样本备用。

1.2Hp检测幽门螺杆菌检测取适量组织行切片检查，Warrthin-Starry银染后观察切片颜色，呈黑色或者棕黑色判定为阳性。采集研究对象非抗凝静脉血5 ml，1 500 r/min离心5 min后取血清，于-20℃冰箱中保存。统一对血清标本采用ELISA法测定Hp IgG抗体。两者均为阳性判定该样本为Hp感染样本。

1.3p53、VEGF检测采用免疫组化SP法，选择p53、VEGF专用试剂盒 (武汉博士德科技有限公司产品) 检测其表达情况，严格按说明书操作。显微镜下观察，细胞核内出现棕黄色或黄褐色颗粒判定为p53基因表达阳性；细胞质出现棕黄色颗粒判定为VEGF表达阳性。

1.4统计学分析采用SPSS17.0软件，三组正态分布计量资料之间比较采用方差分析，计数资料采用χ2检验。

2结果

胃癌组、不典型黏膜组Hp感染、p53和VEGF阳性表达率均明显高于阴性患者(P<0.05)，各组Hp感染阳性患者p53和VEGF阳性表达率明显高于阴性患者(P<0.05)，见表1。

表1各组受试者的Hp感染情况和p53和VEGF的表达情况〔n(%)〕

组组Hp感染n p53 VEGF +-+-胃癌组+5238(73.1)1)14(26.9)29(55.8)1)23(44.2)-2615(57.7)11(42.3)16(61.5)10(38.5)不典型黏膜组+1710(58.8)1)7(41.2)9(52.9)1)8(47.1)-85(63.5)3(37.5)6(75.0)2(25.0)正常粘黏组+157(46.7)8(53.3)4(26.7)11(73.4)-202(100.0)02(100.0)

与同组Hp阴性比较:1)P<0.05

3讨论

目前的研究认为，Hp长期感染与其他因素共同作用可增加罹患胃癌的可能，Hp感染具有一定的胃癌诱导作用〔3〕。本研究结果表明Hp感染可能是胃癌发生的危险因素。但是目前 Hp主要的致癌机制尚未完全明确，已有的研究多表明Hp具有多种细胞毒素，目前被广泛认可的与胃癌发生发展有关的细胞毒素是细胞空泡毒素以及细胞毒素相关蛋白。细胞空泡毒素可致胃黏膜上皮坏死，细胞毒素相关蛋白可致胃黏膜发生炎症反应〔4,5〕。同时，Hp可以分泌一些促进胃癌发生的致癌物质，如亚硝酸盐等。正常黏膜上皮细胞的增殖与凋亡间的动态平衡决定了胃黏膜组织的结构和功能，一旦两者失衡就很有可能导致病变甚至是癌变的发生。VEGF是一类可致血管生长特异分裂的诱导因子，可增加血管通透性，导致肿瘤侵袭、转移，同时，肿瘤快速生长又会导致机体生成更多VEGF〔6〕。本研究结果表明VEGF阳性表达可能与胃癌有关。p53基因一般可分为野生型与突变型两类。野生型p53属抑癌基因，可操控细胞增殖及凋亡，但由于野生型p53蛋白半衰期短，免疫组化较难测得，因此均以突变型p53基因作为研究对象。大量研究证实，突变型p53基因可致DNA丧失对p53蛋白序列编码的调控作用，继而使突变细胞进入细胞周期后进一步增殖、癌变，也是肿瘤细胞易转移的特点。p53缺失或突变均可导致细胞向恶性转化〔7〕。本研究结果表明突变型p53可能与胃癌有关。感染Hp的胃癌组织中，p53及VEGF阳性率明显高于正常胃黏膜组织，其可能机制是机体感染Hp后，破坏了细胞的生长周期，促进人体某些基因异常表达，导致调控胃肠黏膜上皮细胞周期性的基因、蛋白分化异常，进一步促进细胞增殖和凋亡〔8,9〕。Hp感染造成淋巴细胞浸润，淋巴细胞又可释放某些细胞因子，促进组织癌变〔10〕。

综上，控制Hp感染，进行及时、有效地干预，可有效预防胃癌。

4参考文献

1Ma JL，Zhang L，Brown LM，etal.Fifteen-year effects of helicobacter pylori，garlic，and vitamin treatments on gastric cancer incidence and mortality〔J〕.J Natl Cancer Inst，2012;104(4)：488-92.

2Ock CY，Kim EH，Choi DJ，etal.8-Hydroxydeoxyguanosine：not mere biomarker for oxidative stress，but remedy for oxidative stress-implicated gastrointestinal diseases〔J〕.World J Gastroenterol，2012;18(3)：302-8.

3王济兴，于海荣，朱孝芹，等.CyclinD1和P16表达及Hp感染在胃癌发生中的作用和相关性研究〔J〕.中国肿瘤临床与康复，2008;15(2)：12-4.

4Hayashi T，Senda M，Morohashi H，etal.Tertiary structure-function analysis reveals.The pathogenic signaling potentiation mechanism of Helicobacter pylori oncogenic effector CagA〔J〕.Cell Host Micro，2012;12(1)：20-33.

5Ferreira RM，Machado JC，Leite M，etal.The number of Helicobacter pylori CagA EPIYA C tyrosine phosphorylation motifs influences the pattern of gastritis and the development of gastric carcinoma〔J〕.Histopathology，2012;60(8)：992-8.

6Moundhri MS，Shukaili A，Al-Nabhani M，etal.Measurement of circulating levels of VEGF-A，-C，and-D and their receptors，VEGFR-1 and -2 in gastric adenocarcinoma 〔J〕.World J Gastroenterol，2008;14(24)：3879-83.

7Zhou Y，Li N，Zhuang W，etal.P53 codon 72 polymorphism and gastric cancer：a meta-analysis of the literature〔J〕.Int J Cancer，2007;121(7)：1481-6.

8Zaidi SF，Muhammad JS，Shahryar S，etal.Anti-inflammatory and cytoprotective effects of selected Pakistani medicinal plants in Helicobacter pylori-infected gastric epithelial cells〔J〕.J Ethnopharma，2012;141(3)：403-10.

9Byun SW，Chang YJ，Chung IS，etal.Helicobacter Pylori decreases p27 expression through the delta opioid receptor-mediated inhibition of histone acetylation within the p27 promoter〔J〕.Cancer Lett，2012;326(1)：96-104.

10王旭光，张忠，孙丽萍，等.谷胱甘肽转移酶P1基因多态性和幽门螺杆菌感染的交互作用与胃黏膜肠上皮化生的风险〔J〕.中华流行病学杂志，2010;31(8)：920-4.

〔2013-12-17修回〕

(编辑徐杰)