黄芩醇提乙醇浓度的优选

王志江，刘 波，梁丽丽，孙秀梅

（1.山东中医药高等专科学校，山东 烟台 256200；2.山东中医药大学，山东 济南 250355）

黄芩醇提乙醇浓度的优选

王志江1，刘 波1，梁丽丽1，孙秀梅2

（1.山东中医药高等专科学校，山东 烟台 256200；2.山东中医药大学，山东 济南 250355）

黄芩；比例分割法；醇沉

醇提法是20世纪50年代开始应用的中药提取方法，该方法对中药的多数已知有效成分如生物碱类、黄酮类、皂苷类、萜类等的提取率比水提法高，因此也是目前应用较普遍的提取方法之一。通过调节乙醇浓度，可以选择性浸提药材中某些有效成分或有效部位。本实验以分子量≤1 000 Da提取物、黄芩苷、黄芩素、总黄酮、HPLC峰总面积为综合评判指标，在含醇量30.00%～80.00%之间优选黄芩较佳醇提浓度。

1 仪器与药品

精密pH计（pHS-3C型，上海雷磁仪器厂）；电子分析天平（MA110型，上海第二分析仪器厂）；高效液相色谱仪（1100系列，美国AgiLent公司）；紫外分析仪（UV3010型，日立公司）；医用超声波清洗器（KQ-250E型，昆山市超声仪器有限公司）；中空纤维超滤膜（DH-系列，上海德宏生物医学科学科技发展有限公司）。

中药经山东中医药大学张兆旺教授鉴定，黄芩为唇形科植物黄芩干燥根的机切薄片。

黄芩苷（批号：110715－200815）、黄芩素（批号：111595－ 200604）均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品液的制备

取黄芩粗粉（10～20目之间）30 g，分别用不同浓度（30.00%、55.00%和80.00%）的乙醇提取3次（加醇量依次为黄芩重量的10倍、8倍、8倍，浸泡30分钟），提取时间分别为2小时、1小时、1小时。分别将3煎提取液依次粗滤，离心（3 500 r/min，25分钟），用一定规格的中空纤维膜滤过，合并，浓缩，定容至500 mL制得样品液AE（质量浓度为60 g/L）。

2.2 供试液的制备

精密量取2.1项下的样品液各5 mL，分别置于蒸发皿中，水浴浓缩蒸至近干，加硅藻土0.8 g，拌匀，干燥，研匀，转移至干燥磨口三角瓶中，加甲醇10 mL，称重，超声处理30分钟，用甲醇补足失重，滤过。滤液置于10 mL容量瓶中，加甲醇至10 mL，摇匀，得供试液A（质量浓度为30 g/L），供测定黄芩苷、黄芩素含量及HPLC峰总面积。

精密量取2.1项下的样品液各0.4 mL，分别水浴蒸干，残渣加70%乙醇，定容至10 mL，再从这10 mL溶液中取3 mL定容至100 mL，得供试液B（质量浓度为0.072 g/L），供测定总黄酮含量。

2.3 比例分割

采用色谱条件：色谱柱：Diamonsil（TM）钻石C185 μm（250× 4.6 mm）；流动相：甲醇∶磷酸∶水（47∶53∶0.2）；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30℃。分别平行进样3次，测得黄芩苷的峰面积[1]。

采用色谱条件：色谱柱：Diamonsil（TM）钻石C185 μm（250× 4.6 mm）；流动相：甲醇∶0.4%醋酸水（70∶30）；检测波长：275 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；柱温：30℃。分别平行进样3次，测定黄芩素含量[2]。

以70%乙醇为参比溶液，278 nm为测定波长，总黄酮含量以黄芩素计算，测定总黄酮含量[3]。

采用色谱条件：色谱柱：Diamonsil（TM）钻石C185 μm（250×4.6 mm）；流动相：A为0.4%H3PO4，B为乙腈；线性梯度洗脱时间：0～5分钟（B：23.0%～25.0%）、5～8分钟（B：25.0%～25.4%）、8～20分钟（B：25.4%～25.6%）、20～25分钟（B：25.6%～27.0%）、25～60分钟（B：27.0%～38.0%）；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；柱温：30℃。分别平行进样3次，测定HPLC峰总面积[4]。

精密吸取2.1项下样品液各10 mL，分别置于干燥的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃烘至恒重，计算得率。

上述测定结果见表1～5。所得数据按公式x'i·j=（xi·j-xj）/Sj进行标准化（式中x'i·j是标准化后得值，xi·j为样品液i中成分j的含量，xj为样品液i中成分j的平均值，Sj为成分j的标准偏差），然后加权求和，综合评判值Y顺序为：Y80.00%＞Y55.00%＞Y30.00%，见表6。保留55.00%～80.00%段。

然后取3份方药粗粉，分别用61.25%、67.50%、73.75%浓度的乙醇提取，其余操作同上。含量结果见表1～5，标准化处理结果见表6。Y值顺序为：Y80.00%＞Y55.00%＞Y73.75%＞Y61.25%＞Y67.50%＞ Y30.00%。

表1 不同黄芩醇提液的黄芩苷含量（±s，mg/g）

表1 不同黄芩醇提液的黄芩苷含量（±s，mg/g）

醇沉浓度（%）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0测得值（m g / g）第一次 第二次 第三次2 2 . 9 0 2 2 3 . 5 4 5 2 2 . 2 3 9 2 9 . 3 4 4 3 0 . 5 1 1 2 9 . 8 1 4 2 4 . 6 2 7 2 3 . 6 9 2 2 4 . 1 6 3 2 1 . 3 1 3 2 1 . 8 8 5 2 2 . 3 4 6 2 4 . 6 7 6 2 5 . 7 2 7 2 5 . 1 9 7 3 2 . 7 7 6 3 1 . 7 4 4 3 2 . 1 9 8平均含量2 2 . 8 9 5 ± 0 . 6 5 3 0 2 9 . 8 9 0 ± 0 . 5 8 7 2 2 4 . 1 6 1 ± 0 . 4 6 7 5 2 1 . 8 4 8 ± 0 . 5 1 7 5 2 5 . 2 0 0 ± 0 . 5 2 5 5 3 2 . 2 3 9 ± 0 . 5 1 7 2 R S D（%）2 . 8 5 1 . 9 6 1 . 9 4 2 . 3 7 2 . 0 9 1 . 6 0

表2 不同黄芩醇提液的黄芩素含量（±s，mg/g）

表2 不同黄芩醇提液的黄芩素含量（±s，mg/g）

醇沉浓度（%）平均含量第一次 第二次 第三次测得值（m g / g）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 1 . 3 5 9 1 . 3 5 3 1 . 3 5 7 2 . 4 5 6 2 . 4 8 4 2 . 4 6 1 1 . 3 0 9 1 . 3 2 0 1 . 3 3 2 1 . 4 8 3 1 . 4 9 0 1 . 4 8 8 1 . 3 3 4 1 . 4 0 3 1 . 3 7 0 2 . 9 0 3 2 . 9 9 0 2 . 9 4 5 1 . 3 5 6 ± 0 . 0 0 2 9 2 . 4 6 7 ± 0 . 0 1 5 0 1 . 3 2 0 ± 0 . 0 1 1 5 1 . 4 8 7 ± 0 . 0 0 3 8 1 . 3 6 9 ± 0 . 0 3 4 5 2 . 9 4 6 ± 0 . 0 4 3 6 R S D（%）0 . 2 2 0 . 6 1 0 . 8 7 0 . 2 5 2 . 5 2 1 . 4 8

表3 不同黄芩醇提液的总黄酮含量（±s，mg/g）

表3 不同黄芩醇提液的总黄酮含量（±s，mg/g）

醇沉浓度（%）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0平均含量第一次 第二次 第三次测得值（m g / g）7 6 . 0 3 3 1 0 1 . 8 4 1 7 4 . 0 6 4 9 7 . 6 2 2 1 0 1 . 7 3 8 1 0 5 . 1 3 4 7 7 . 2 2 8 1 0 1 . 6 3 5 7 4 . 7 6 7 9 7 . 5 1 9 1 0 1 . 1 2 0 1 0 1 . 7 3 8 7 6 . 8 3 3 1 0 5 . 6 4 9 7 4 . 7 7 5 9 8 . 1 3 6 1 0 1 . 9 4 4 1 0 2 . 5 6 1 7 6 . 6 9 8 ± 0 . 6 0 8 9 1 0 3 . 0 4 2 ± 2 . 2 6 0 1 7 4 . 5 3 5 ± 0 . 4 0 8 3 9 7 . 7 5 9 ± 0 . 3 3 0 8 1 0 1 . 6 0 1 ± 0 . 4 2 8 5 1 0 3 . 1 4 4 ± 1 . 7 7 1 5 R S D（%）0 . 7 9 2 . 1 9 0 . 5 5 0 . 3 3 0 . 4 2 1 . 7 2

表4 不同黄芩醇提液的HPLC峰总面积（±s）

表4 不同黄芩醇提液的HPLC峰总面积（±s）

醇沉浓度（%）平均峰总面积第一次 第二次 第三次测得值3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 1 1 7 2 9 7 . 3 1 5 3 4 4 4 . 2 1 2 4 6 9 5 . 8 1 1 8 8 9 2 . 4 1 2 6 3 3 2 . 9 1 3 3 5 5 5 . 2 1 1 5 6 7 6 . 4 1 5 1 6 1 3 . 5 1 1 9 4 8 7 . 7 1 1 4 9 7 5 . 7 1 2 9 6 5 7 . 5 1 3 8 5 2 0 . 4 1 1 3 9 5 3 . 6 1 5 5 8 7 2 . 4 1 2 1 9 4 2 . 3 1 1 6 9 1 4 . 1 1 2 7 0 1 3 . 7 1 3 0 5 7 5 . 9 1 1 5 6 4 2 . 4 ± 1 6 7 2 . 1 1 5 3 6 4 3 . 4 ± 2 1 3 6 . 4 1 2 2 0 4 1 . 9 ± 2 6 0 5 . 5 1 1 6 9 2 7 . 4 ± 1 9 5 8 . 4 1 2 7 6 6 8 . 0 ± 1 7 5 6 . 2 1 3 4 2 1 7 . 2 ± 4 0 1 3 . 4 R S D（%）1 . 4 5 1 . 3 9 2 . 1 3 1 . 6 7 1 . 3 8 2 . 9 9

表5 不同黄芩醇提液≤1 000 Da提取物含量（±s，mg/g）

表5 不同黄芩醇提液≤1 000 Da提取物含量（±s，mg/g）

测得值（m g / g）醇沉浓度（%）平均含量第一次 第二次 第三次3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 4 2 7 . 2 4 2 3 . 3 4 1 8 . 5 4 8 6 . 0 4 9 9 . 5 4 8 0 . 5 4 6 9 . 8 4 6 5 . 7 4 6 0 . 7 4 6 5 . 3 4 8 7 . 5 4 7 6 . 2 4 5 2 . 5 4 7 3 . 3 4 6 1 . 5 4 5 7 . 5 4 7 9 . 3 4 6 5 . 5 4 2 3 . 0 ± 4 . 3 4 3 4 8 8 . 7 ± 9 . 7 7 7 4 6 5 . 4 ± 4 . 5 9 0 4 7 6 . 3 ± 1 1 . 0 8 4 4 6 2 . 4 ± 1 0 . 4 4 9 4 6 7 . 4 ± 1 1 . 0 4 6 R S D（%）1 . 0 3 2 . 0 0 0 . 9 9 2 . 3 3 2 . 2 6 2 . 3 7

表6 各指标成分的含量及标准化处理结果

3 结语

本实验以分子量≤1 000 Da提取物、黄芩苷、黄芩素、总黄酮、HPLC峰总面积为综合评判指标，进行黄芩醇提浓度的优选。综合评价，80.00%的醇浓度提取综合评判值最大，故醇提方法选择乙醇的浓度为80.00%。

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G424.31

B

1671-1246（2015）06-0084-02