E-cadherin和VEGF在老年骨巨细胞瘤中的表达及意义

E-cadherin和VEGF在老年骨巨细胞瘤中的表达及意义

于德军刘丽晶张阿新田少华

(齐齐哈尔医学院附属第三医院骨外二科，黑龙江齐齐哈尔161000)

摘要〔〕目的探讨上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)和血管内皮生长因子(VEGF)在老年骨巨细胞瘤(GCTB)中的表达及其意义。方法随机选取GCTB老年(年龄≥60岁)患者40例，采用免疫组织化学法检测病理标本中E-cadherin和VEGF的表达情况，并分析二者与患者临床资料的关系。结果E-cadherin在Ⅰ级GCTB中的阳性表达率要显著高于Ⅱ级和Ⅲ级(P<0.05)，VEGF在Ⅰ级GCTB中的阳性表达率显著低于Ⅱ级和Ⅲ级(P<0.05)；E-cadherin和VEGF的表达与患者性别和年龄无关(P>0.05)，而与组织学分级、肿瘤复发和转移情况有关(P<0.05)；E-cadherin与VEGF在GCTB组织中的表达呈负相关(r=-0.793，P<0.05)。结论E-cadherin和VEGF在GCTB中的表达会发生变化，这与GCTB的转移密切相关，有助于对患者的预后进行判断。

关键词〔〕骨巨细胞瘤； 上皮型铅黏附蛋白；血管内皮生长因子

中图分类号〔〕R73〔文献标识码〕A〔

通讯作者：田少华(1966-)，男，主任医师，主要从事骨科疾病的诊治研究。

第一作者：于德军(1977-)，男，硕士，主治医师，主要从事骨科疾病的诊治研究。

骨巨细胞瘤(GCTB)的良、恶性十分难界定，因其侵袭程度不一，故手术治疗的预后不尽相同，复发率20%～50%，且易发生肺转移〔1〕。1980年，美国骨骼肌肉肿瘤将GCTB定位为低度恶性肿物。上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)是一种介导细胞间黏附功能的蛋白，已有大量研究在其他肿瘤中发现其有过表达的情况，并认为E-cadherin与肿瘤对周围组织的侵袭和向远处转移有关〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)已被查明具有促进血管内皮分裂繁殖的作用，并且可以提高毛细血管的通透能力，被认为是促进肿瘤生长的关键因子。本研究旨在探讨E-cadherin和VEGF在老年GCTB中的表达及其意义。

1材料与方法

1.1一般资料随机选取2009年11月至2010年10月我院收治的40例GCTB老年患者，男23例，女17例，年龄60～82〔平均(68.7±4.7)〕岁；其中股骨下段19例、胫骨上段14例，肱骨4例、腓骨3例。按照组织学Jeffe分级，Ⅰ级(偏良性)17例，Ⅱ级(侵袭性)15例，Ⅲ级(恶性)8例。所有患者在接受治疗后的6、12、24、48个月进行门诊随访，检查复发及转移情况。并规定48个月内在原病灶处出现相同病理类型的肿瘤为复发，其他部位出现相同病理类型肿瘤为转移。

1.2入选和排除标准入选标准：①所有患者均经病理确诊为GCTB；②年龄≥60岁；③所有患者均为首次确诊并拟行手术治疗，之前未接受过其他放疗、化疗等。排除标准：①存在重要器官(如肝脏、肾脏等)功能不全者；②自本次接受治疗之日起，近24个月接受过放疗、化疗者；③伴发其他组织或器官肿瘤者〔3〕。

1.3实验方法于术中取病变处组织标本，暂置于液氮罐中保存并送检。将标本用10%的甲醛固定后，经脱水、石蜡包埋，制成石蜡标本。做厚3 μm的连续切片，每例标本4张，E-cadherin和VEGF各染2张。用免疫组织化学法(S-P法)对标本切片进行染色，阴性对照一抗选择磷酸盐缓冲液(PBS)，E-cadherin一抗为兔抗人E-cadherin单克隆抗体(购自上海研惠生物科技有限公司)，VEGF一抗为兔抗人VEGF单克隆抗体(购自长春长生生物科技股份有限公司)，染色后将标本置于4℃恒温箱中24 h，取出后用二氨基联苯胺(DAB)显色后使用苏木素复染。用显微镜观察染色情况。

1.4结果判断标准E-cadherin和VEGF均主要在分布在细胞膜或细胞质中，以细胞膜或细胞质中有棕黄色或黄褐色颗粒为染色阳性细胞。在400倍高倍镜下随机选取5个互不重叠的视野，每个视野计数100个细胞中染色的细胞数，根据每张切片共500个细胞，每例标本两张切片，共1 000个细胞中的染色细胞数，计算每例标本的阳性细胞百分比=(染色细胞数/1 000)×100%。结果判断：阴性(-)：阳性细胞百分比<5%；弱阳性(+)：阳性细胞百分比在5%～25%；中等阳性()：阳性细胞百分比26%～50%；强阳性()：阳性细胞百分比>50%。

1.5统计学方法应用SPSS12.0软件进行χ2检验和Spearson相关性检验。

2结果

2.1E-cadherin和VEGF在GCTB中的表达E-cadherin在Ⅰ级GCTB中的阳性表达率显著高于Ⅱ级和Ⅲ级(P<0.05)，而Ⅱ级和Ⅲ级不存在显著差异(P>0.05)；VEGF在Ⅰ级GCTB中的阳性表达率要显著低于Ⅱ级和Ⅲ级(P<0.05)，而Ⅱ级和Ⅲ级不存在显著差异(P>0.05)。见表1。

表1　E-cadherin和VEGF在GCTB中的表达〔 n(%)〕

与Ⅰ级比较：1)P<0.05

2.2E-cadherin和VEGF的表达与临床病理资料的关系所有患者均成功完成随访，随访成功率100%。E-cadherin和VEGF的表达与患者性别和年龄无关(P>0.05)，而与组织学分级、肿瘤复发和转移情况有关(P<0.05)。见表2。

表2　E-cadherin和VEGF的表达与临床病理资料的关系( n)

2.3E-cadherin与VEGF在GCTB中的表达关系采用Spearson相关性分析对E-cadherin与VEGF在GCTB组织中的表达关系进行检验，结果发现两者的表达呈负相关(r=-0.793，P<0.05)。E-cadherin(+)、VEGF(+)12例，E-cadherin(+)、VEGF(-)11例，E-cadherin(-)、VEGF(+)16例，E-cadherin(-)、VEGF(-)1例。

3讨论

GCTB是一种起源于松质骨的溶骨性肿瘤，目前认为GCTB是一种潜在恶性的肿瘤，其良恶程度根据组织分级的不同而差异巨大。GCTB好发于中青年，但近年来随着人们生活习惯的改变以及寿命的延长，老年人GCTB的发病率也在逐年上升〔4〕。GCTB同其他肿瘤一样，易发生远处转移和复发，E-cadherin和VEGF就是两种目前认为和肿瘤发生转移有密切关系的两种因子。

E-cadherin是一种钙依赖性蛋白，主要分布在细胞膜上，属于跨膜蛋白，其主要功能是介导同种细胞间的黏附，即同质黏附。Friedemann等〔5〕研究发现，当细胞中E-cadherin的表达水平下降时，其上皮细胞形态和结构均会发生变化，细胞膜两侧的极性也发生变化。Anniina等〔6〕发现，当细胞膜上的E-cadherin水平下降后，细胞与周围同种细胞的黏附力下降，细胞会向成纤维细胞形态发展，上皮细胞还会向间质表型细胞转化，即发生上皮-间质转化，细胞的活动性增强，易发生远处转移。本研究结果提示Ⅰ级GCTB偏向良性，而Ⅱ级和Ⅲ级GCTB偏向恶性，更容易发生转移和复发。另外间接证明不同组织学分级间的GCTB在恶性程度上有本质区别，但E-cadherin的表达水平与Jeffe分级并不完全对等〔7〕。

VEGF已经被大量的研究证实具有促进血管内皮细胞生长、促进血管形成、提高血管通透性的作用，在多种肿瘤中均呈高表达状态。蒋政等〔8〕研究发现，VEGF对成骨细胞有刺激作用，可以诱导其发生迁移，并认为这是骨肿瘤形成的基础。本研究结果提示Ⅱ级和Ⅲ级GCTB均易发生转移，从此次研究对VEGF和临床病例资料的关系结果来看，VEGF确实与GCTB的转移有关，也间接证实了这一观点。这可能是由于VEGF可以激活骨细胞内的信号转导通路，使血管内皮细胞的通透性提高，从而诱导骨细胞发生迁移，而这个过程可能是通过激活内皮细胞整合素和蛋白酶激活因子实现的〔9〕。另外二者在GCTB发生转移时起到拮抗作用，可能在VEGF的基因激活后，产生了某些因子抑制E-cadherin的生成，这会加速GCTB的远处转移〔10〕。

综上所述，E-cadherin和VEGF在GCTB中的表达会发生变化，这与GCTB的转移密切相关，有助于对患者的预后进行判断。

4参考文献

1Kumta SM，Huang L，Cheng YY，etal.Expression of VEGF and MMP-9 in giant cell tumor of bone and other osteolytic lesions〔J〕.Life Sci，2003；73(11)：1427-36.

2Miyazawa M，Yasuda M，Fujita M，etal.Granulosa cell tumor with activated mTOR-HIF-1α-VEGF pathway〔J〕.J Obstet Gynaeco Res，2010；36(2)：448-53.

3朱宝玉，王奇缘，吴蓓，等.IL-6、VEGF在骨关节炎患者膝关节滑膜和滑液中的表达及其意义〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(2)：273-5.

4Singh S，Isabella WY,Handa D，etal.The role of TWIST in angiogenesis and cell migration in giant cell tumor of bone〔J〕.Adv Biol，2014；(2014):ID903259.

5Friedemann H，Anne-Marie FK，Michel M，etal.Involvement of E-cadherin and beta-catenin in germ cell tumours and in normal male fetal germ cell development.〔J〕.J Pathol，2004；204(2)：167-74.

6Anniina F，Marjut P，Hanna T，etal.Serum vascular endothelial growth factor A (VEGF) is elevated in patients with ovarian granulosa cell tumor (GCT)，and VEGF inhibition by bevacizumab induces apoptosis in GCT in vitro.〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2011；96(12)：E1973-81.

7Yoshihiro O，Yoshinao O，Shuichi K，etal.Nuclear localization of E-cadherin but not beta-catenin in human ovarian granulosa cell tumours and normal ovarian follicles and ovarian stroma〔J〕.Histopathology，2011；58(3)：423-32.

8蒋政，董明岩.MMP-2和VEGF在骨软骨瘤、骨巨细胞瘤和骨肉瘤组织中的表达及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2010；30(3)：301-3.

9Farkkila A,Mikko A，Jurate P,etal.Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor VEGFR-2 are highly expressed in ovarian granulosa cell tumors〔J〕.Eur J Endocrinol，2010；16(41)：115-22.

10骆赞，魏正强，向相，等.Foxq1与E-cadherin蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(8)：2076-8.

〔2014-02-11修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)