YAP和TAZ在老年脑胶质瘤中的表达及临床意义

YAP和TAZ在老年脑胶质瘤中的表达及临床意义

聂柳郭洪志1刘兴吉2夏鹰金虎林佳

(海口市人民医院神经外科，海南海口570208)

摘要〔〕目的探讨Yes相关蛋白(YAP)和转录辅助激活蛋白(TAZ)在老年人脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理参数之间的相关性。方法收集52例手术切除的老年脑胶质瘤组织及12例正常脑组织，运用免疫组化技术检测YAP和TAZ蛋白表达情况，分析YAP和TAZ蛋白表达状态与脑胶质瘤组织学分级的相关性。结果脑胶质瘤组织中YAP蛋白的阳性表达率显著高于对应的正常脑组织；YAP蛋白高表达与高组织学分级(Ⅲ+Ⅳ)显著相关(P<0.05)；TAZ蛋白在脑胶质瘤组织中的阳性表达率显著高于正常脑组织(P<0.05)；TAZ蛋白高表达也与高组织学分级(Ⅲ+Ⅳ)显著相关(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中YAP和TAZ高表达且与恶性临床病理参数相关，YAP和TAZ异常表达和核内蓄积可能是促进肿瘤进展的重要因素。

关键词〔〕Yes相关表白；转录辅助激活蛋白；胶质瘤

中图分类号〔〕R73〔文献标识码〕A〔

通讯作者：刘兴吉(1966-)，男，博士，副教授，主要从事颅脑肿瘤、脑外伤等方面的研究。

1辽源市中心医院神经外科2吉林大学第一医院神经外科

第一作者：聂柳(1975-)，男，硕士，副主任医师，主要从事颅脑肿瘤、外伤等方面的研究。

恶性神经胶质瘤是最常见的原发性脑恶性肿瘤，Hippo信号通路在调控细胞生长、增殖和凋亡过程中发挥重要作用〔1〕，Yes相关蛋白(YAP)及其种内同源基因-含PDZ结合修饰的转录辅助激活蛋白(TAZ)是Hippo通路的下游效应分子，通过核内调控基因表达促进肿瘤发生发展〔2〕。YAP异常活化与多种人类肿瘤不良预后相关〔3～5〕。TAZ在乳腺癌肿瘤发生和转移中发挥重要作用〔6〕，在非小细胞肺癌中敲低TAZ表达能抑制细胞增殖和降低细胞恶性程度〔7〕。本文旨在检测YAP和TAZ在人脑胶质瘤中的表达并评估其临床意义。

1资料与方法

1.1一般资料收集我院病理科2009～2014年保存切经术后病理学证实的脑胶质瘤组织石蜡标本52例，男33例，女19例，年龄60～72岁，中位年龄66.7岁。参考WHO神经系统肿瘤分类系统(2000年)进行肿瘤分级：Ⅰ级11例，Ⅱ级14例，Ⅲ级20例，Ⅳ级7例。同时收集脑外伤或脑出血手术中在手术非功能区入路过程中必须切除的脑组织标本作为对照组，共12例，男7例，女5例，年龄61～69岁，中位年龄65.8岁。所有标本使用均获得患者知情同意。

1.2方法采用标准生物素-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法，对4 μm石蜡切片进行免疫组织化学染色。石蜡切片脱蜡、水化，0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)热修复抗原，室温冷却20 min；3 mol/L Trixon-X 100处理30 min，30 mol/L双氧水-甲醇封闭内源性过氧化物酶活性。正常血清封闭非特异性结合，将兔抗人YAP抗体(H-125，sc-15407，Santa Cruz，USA)或鼠抗人TAZ抗体(ab118373，Abcam，USA)加于切片4℃孵育过夜。冲洗后，滴加生物素标记的二抗工作液，室温孵育30 min。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育30 min。滴加二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木苏轻度复染。酒精梯度脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判定标准用阳性细胞百分比联合染色强度进行评分，阳性细胞百分比：>75%=4分、51%～75%=3分、26%～50%=2分、6%～25%=1分、≤5%=0分；染色强度：强阳性=3分、中度=2分、弱阳性=1分、阴性=0分，评分相乘≥1分则判定为阳性表达〔8〕。

1.4统计学方法应用SPSS13.0软件进行χ2检验。

2结果

2.1YAP蛋白在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达免疫组化染色检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中YAP蛋白表达，阳性反应为黄色或棕色颗粒，结果显示YAP蛋白表达主要定位于细胞核。YAP在脑胶质瘤组织中的阳性表达率〔80.8%(42/52)〕显著高于正常脑组织〔8.3%(1/12)〕(χ2=20.036，P<0.05)。见图1。

2.2YAP蛋白表达与脑胶质瘤组织学分级的相关性YAP蛋白在96.3%(26/27)的高组织学分级(Ⅲ+Ⅳ)脑胶质瘤组织中呈阳性表达，而在低组织学分级(Ⅰ+Ⅱ)的脑胶质瘤组织中阳性表达率为64.0%(16/25)，差异具有统计学意义(χ2=6.762，P<0.05)。

2.3TAZ蛋白在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达免疫组化染色检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中TAZ蛋白表达，阳性反应为黄色或棕色颗粒，结果显示TAZ蛋白表达主要定位于细胞核(图2)。TAZ在脑胶质瘤组织中的阳性表达率〔78.8%(41/52)〕显著高于正常脑组织〔16.7%(2/12)〕(χ2=14.395，P<0.05)。

图1　YAP蛋白在脑胶质瘤组织及正常脑组织中的表达 (SP，×400，标尺：100 μm)

图2　TAZ蛋白在脑胶质瘤组织及正常脑组织中的表达 (SP，×400，标尺：100 μm)

2.4TAZ蛋白表达与脑胶质瘤组织学分级的相关性TAZ蛋白在92.6%(25/27)的高组织学分级(Ⅲ+Ⅳ)脑胶质瘤组织中呈阳性表达，而在低组织学分级(Ⅰ+Ⅱ)的脑胶质瘤组织中阳性表达率为64.0%(16/25)，差异具有统计学意义(χ2=6.363，P=0.012)。

3讨论

在过去的20年期间，针对恶性神经胶质瘤的诊断和处理措施持续进展，但肿瘤患者的预后改善不显著，中位生存时间仍只有12～15个月，恶性神经胶质瘤的高侵袭性及放化疗抵抗是导致患者预后不良的主要原因，因此寻求新的治疗方法及靶点是当前的研究热点〔1〕。Hippo信号通路最初在黑腹果蝇中被发现，其发挥抑制细胞生长和促进凋亡的功能，一系列的激酶级联反应构成了该通路，其终末效应分子是YAP蛋白，Hippo信号通路抑制YAP活化，从而导致YAP被14-3-3ε蛋白扣留在细胞质而被泛素蛋白酶体系统降解〔5〕。而在肿瘤细胞中Hippo信号通路失活，YAP蛋白因泛素蛋白酶解途径受阻而核内蓄积，其与TAED结合后启动下游靶基因表达，发挥促进细胞增殖和抑制凋亡的功能，进而促进肿瘤发生发展〔9〕。研究证实YAP过表达诱导人乳腺上皮细胞(MCF10)发生上皮间质转化(EMT)并抑制凋亡和促进细胞在软琼脂上锚定非依赖性生长〔10〕。在裸鼠中YAP与cIAP1协同刺激肿瘤生长，而且，肝脏特异性过表达YAP的转基因小鼠表现为肝脏体积明显增大并最终发生肿瘤〔11〕。研究证实多种人类恶性肿瘤中存在YAP蛋白过表达和核内蓄积，如恶性间皮细胞瘤、肝细胞癌、卵巢癌、结直肠癌和乳腺癌〔3～5〕，本研究提示YAP蛋白异常表达可能与肿瘤分化有关。

TAZ是YAP的种内同源基因，作为一个转录辅助因子与多个转录因子相互作用〔12〕。研究表明TAZ促进EMT介导的肿瘤进展，TAZ通过调整Runx2和PPARγ依赖的基因表达调控间质干细胞分化，并通过控制Smad的定位调控干细胞自我更新〔13〕。TAZ在乳腺癌和非小细胞肺癌进展中发挥重要作用。重要的是，TAZ阴性表达的结肠癌患者具有更好的预后，提示TAZ可能作为结肠癌潜在的治疗靶点〔5〕。提示TAZ可能促进脑胶质瘤发生发展。初步推测在脑胶质瘤中YAP和TAZ可能是一个癌基因，发挥促进肿瘤恶性进展的功能，但具体的功能及精确的分子机制有待进一步研究。

4参考文献

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〔2014-12-20修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)