高效液相色谱法测定克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松含量

·论著·

高效液相色谱法测定克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松含量

常明泉，陈林，何秀丽，陈芳 (湖北医药学院附属太和医院， 湖北 十堰 442000)

[摘要]目的测定克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松的含量。方法用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)；检测波长为240 nm；进样量20 μl；柱温30 ℃；流速1 ml/min。结果醋酸地塞米松在2.00 ～64.00 μg/ml 范围内线性关系良好，Y=0.405 2X+0.804 2(r=0.999 9)，平均回收率为99.3%，RSD=0.93%(n=9)。结论该法便捷，重现性好，适用于克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松的含量测定。

[关键词]克拉维丁搽剂；醋酸地塞米松；高效液相色谱法

[基金项目]湖北省重大科学技术鉴定成果(登记号：EK2012D 150018000359)；太和科研基金资助项目(2009D34)

[作者简介]常明泉，学士，副主任药师.研究方向：制剂及质量控制.Tel：13986912958；E-mail:907622985@qq.com

[通讯作者]陈林，博士，教授.研究方向：中草药化学.Tel:13986912958；E-mail:907622982@qq.com

[中图分类号]R917[文献标志码]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.01.014

[收稿日期]2014-01-24[修回日期]2014-05-23

Determination of dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment by HPLC

CHANG Mingquan，CHEN Lin，HE Xiuli， CHEN Fang(Taihe Hospital Affiliated to Hubei Medical College，Shiyan 442000，China)

Abstract[]ObjectiveTo establish the quantitative determination method of dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment by HPLC.MethodsColumn：Diamonsil-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm),mobile phase：methanol-water-glacialaceticacid (80:20:0.5),flow rate：1.0 ml/min,UV detection wavelength：240 nm,injection volume ：20 μl,column temperature：30 ℃.ResultsThe standard curve was linear within the range of 2.00-64.00 μg/ml，linear equation was Y=0.405 2X+0.804 2(r=0.999 9).The average recovery was 99.3% with RSD 0.93% (n=9).ConclusionThis method was simple，stable and could be used to assay dexamethasone acetate in Kelaweiding liniment.

[Key words]Kelaweiding liniment；dexamethasone acetate；HPLC

克拉维丁搽剂是湖北医药学院附属太和医院的一个在研新制剂[1]，该制剂内含克拉霉素、维生素B2、醋酸地塞米松、盐酸丁卡因，具有抗菌消炎、止疼、促进溃疡愈合的作用。用于新生儿科肛门、腋窝部位皮肤溃破、红肿，也用于口腔科由于病毒感染、免疫力低下或缺乏维生素等原因引起的多种内源性口腔溃疡疾病。醋酸地塞米松是肾上腺皮质激素类药，具有抗炎和免疫抑制作用，能抑制结缔组织的增生、降低毛细血管壁和细胞膜的通透性、减少炎性渗出量、抑制组胺及其他毒性物质的形成和释放、促进溃疡愈合的作用。制剂中的维生素B2、克拉霉素、盐酸丁卡因可按文献[2~4]方法测定。为了全面控制制剂质量、确保临床疗效及用药安全有效，本测定拟用高效液相色谱法，对制剂中的醋酸地塞米松进行含量测定。

1仪器与试药

1.1　仪器

戴安U-3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司)；UP5200HE超声仪(熊猫集团南京电子计量有限公司，500 W，50 Hz)；AUW-1200电子天平(日本岛津，精度：0.000 01 g，)；WGA-UNI-10型超纯水器(北京普析通仪器有限责任公司，功率：300 W)。

1.2　试药

醋酸地塞米松对照品(中国药品生物制品研究院，批号 100122-200805，含量100.0%)；克拉维丁搽剂(湖北医药学院附属太和医院制备，规格：100 ml，批号：20130410，20130411，20130412)，冰醋酸为分析纯，甲醇分别为分析纯和色谱纯。

2方法与结果

2.1　色谱条件 [5-7]

色谱柱C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)；检测波长240 nm；进样量20 μl，流速1 ml/min，柱温30 ℃。

2.2　溶液的制备

2.2.1对照品溶液精密称取醋酸地塞米松对照品7.50 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容，即得0.15 mg/ml对照品储备液，精密吸取该溶液1 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得15.00 μg/ml对照品溶液。

2.2.2供试品溶液称取克拉维丁搽剂样品2 g于烧杯内，加甲醇约10 ml，置超声震荡仪上超声约5 min，溶液转移至25 ml容量瓶内，再分2次加甲醇(每次6 ml)于烧杯中超声2 min，集中洗涤液于容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置1 h，用适宜注射器抽取上清液，然后用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.3阴性样品溶液称取不含醋酸地塞米松的克拉维丁搽剂2 g 于烧杯内，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.3　系统适用性试验

分别取“2.2”项下的各溶液20 μl，在“2.1”色谱条件下进样，记录色谱图，理论塔板数按醋酸地塞米松峰计算应不低于3 500，对照品、样品吸收峰与相邻杂质峰的分离度分别为1.80、1.78(均>1.50)，拖尾因子为0.98。结果除阴性样品溶液外，对照品溶液、供试品溶液在同一时间均有同样色谱峰出现，结果见图1。

图1　醋酸地塞米松高效液相色谱图 A.对照品溶液；B.供试品溶液 ；C.阴性溶液；1.醋酸地塞米松吸收峰

2.4　曲线方程的建立

取醋酸地塞米松对照品适量，加甲醇制备成每毫升含醋酸地塞米松2.00、4.00、8.00、16.00、32.00、64.00 μg的溶液，取上述各溶液用0.45 μm微孔滤膜滤过，在“2.1”色谱条件下进样，以浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=0.405 2X+0.804 2，r=0.999 9，醋酸地塞米松在2.00～64.00 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.5　精密度试验

取“2.2”项下的对照品溶液，在“2.1”色谱条件下连续进样5次，记录峰面积值，均值为4.172 3，RSD为0.75%，说明仪器精密度良好。

2.6　稳定性试验

取“2.2”项下的供试品溶液，在“2.1”色谱条件下分别在0、3、6、12、24 h进样，记录峰面积值，均值为4.160 8，RSD为1.91%，说明样品溶液在24 h内稳定。

2.7　重复性试验

平行称取5份样品(批号 20130410)，每份2 g于烧杯中，按“2.2”中供试品溶液项下的方法制备溶液，在“2.1”色谱条件下进样，测定峰面积值，计算含量，结果测得平均含量为0.147%(mg/g)，RSD为1.98%，表明该方法重复性良好。

2.8　加样回收率试验

称取不含醋酸地塞米松的克拉维丁搽剂2 g 于烧杯中，共9份，每3份1组，分别按低、中、高比例各加入浓度适宜的对照品溶液适量，按“2.2”中供试品溶液的制备方法制备溶液，在“2.1”色谱条件下进样，测定峰面积值，计算回收率，见表1。

表1　克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松加样回收率试验结果( n=9)

2.9　含量测定

取样品 3 批，各称取2 g于烧杯中，按 “2.2 ”中供试品溶液的制备方法制备溶液，在“2.1”色谱条件下进样，测定峰面积，按外标法计算醋酸地塞米松的含量，结果见表 2。

表2　克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松含量测定结果( n=3)

3讨论

3.1　超声利于醋酸地塞米松溶出

克拉维丁搽剂是以白及溶胶为分散介质的一种制剂，各种药物均以粉末状分散于白及溶胶中，制备供试液时为了充分保证涂剂中醋酸地塞米松的检出，取样后先加入适量甲醇在超声仪上超声约5 min，随后分次加入甲醇超声洗涤烧杯，以使醋酸地塞米松能够从样品中充分提取、溶解。

3.2　析出多糖减小黏附性

克拉维丁搽剂由多种成分组成，其中的白及溶胶具有一定的黏性[8]，多糖是水溶性物质，不溶于甲醇，加入甲醇经超声醋酸地塞米松溶解后，多糖被析出沉淀，用微孔滤膜抽取上清液过滤时则可拦截漂移的沉淀物，减小对色谱柱的黏附性。

3.3　优选流动相缩短保留时间

参考文献试验时曾方法[5-7]分别以乙腈-水(40:60)、甲醇-水(66:34)为流动相检测，在40 min的相同保留时间内，前者检出率只有86.4%，后者检出率为96.7%，两者在后续进样时在醋酸地塞米松出峰前均有一较大的杂质峰出现，影响分离效果。后来配制甲醇-水-冰醋酸(80:20:0.5)做流动相，使用该流动相检测时平均回收率达到99.3%，峰型对称，无拖尾现象，样品分离度良好，说明该流动相对样品中醋酸地塞米松洗脱效果好，并能较好地克服样品中因少许多糖的存在保留时间过长的现象。该方法用于克拉维丁搽剂中醋酸地塞米松的含量测定，操作便利、专属性强，结果重现性好。

【参考文献】

[1]常明泉，余学英，王正军，等.维地西林涂剂的制备与质量控制[J].儿科药学杂志，2012，18(11)：40-42.

[2]韩秀梅.HPLC法测定复合维生素B片中维生素B1、B2、B6的含量[J].中国药事，2012，26(8)：891-894.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：316.

[4]湖北省食品药品监督管理局.湖北省医疗机构制剂质量汇编(上册)[Z].2009：295-296.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010:1120-1121.

[6]陈红，朱蓉.复方地塞米松夫西地酸乳膏含量测定[J].中国抗生素杂志，2012，37(12):924-924.

[7]黄波，姜武民，吉祥波.复方醋酸地塞米松乳膏含量测定方法的改进[J].实用药物与临床，2011，14(4)：311-312.

[8]陈芳，常明泉，杜士明，等.不同浓度蒽酮-硫酸试液对白及溶胶含量的影响[J].中国药师，2012，15(11):1604-1605.

[本文编辑]顾文华