高效液相色谱法测定杏果肉中β-胡萝卜素含量

潘红艳，郭启雷，杨红梅

（国家食品质量安全监督检验中心，北京100094）

高效液相色谱法测定杏果肉中β-胡萝卜素含量

潘红艳，郭启雷，杨红梅

（国家食品质量安全监督检验中心，北京100094）

采用高效液相色谱法测定了18种杏果肉中β-胡萝卜素的含量。样品采用丙酮∶石油醚（体积比20∶80）提取，40℃水浴旋转蒸发至干，无水乙醇定容，高效液相色谱测定。检测波长450 nm，定量检测限0.1mg/kg，方法快速有效，线性关系良好。经检测表明，杏果肉中含有丰富的β-胡萝卜素，其中以骆驼黄杏的β-胡萝卜素含量最高为（17.55±0.27）mg/kg。

杏果肉；β-胡萝卜素；高效液相色谱法

胡萝卜素在自然界中有多种存在方式，按其结构不同可分为胡萝卜素和类胡萝卜素含氧衍生物两大类。类胡萝卜素家族中具有典型代表的是β-胡萝卜素，它是体内维生素A的重要来源，而且对人体也具有重要的生理功能，它可以预防、延缓和治疗某些疾病，尤其是癌症，同时也能提高机体的免疫功能[1]。由于类胡萝卜素主要存在于新鲜蔬菜和水果中，而动物及人体自身不能合成，因此，从自然界中寻找富含天然类胡萝卜素的植物资源，日益受到人们的重视[2]。

杏含有较丰富的黄酮、类胡萝卜素等，营养价值较高，是天然类胡萝卜素较好的来源，其果实中主要的功能成分便是类胡萝卜素[3]。我国是杏起源中心，栽培历史悠久，品种繁多，杏以果实早熟、色泽鲜艳、果肉多汁、风味甜美、酸甜适口为特色，在春夏之交的果品市场上占有重要位置，深受人们的喜爱[4]。论文随机检测了北京周边地区所生产的22种杏果肉中β-胡萝卜素的含量，为公众膳食营养素的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

新鲜杏由北京周边农业基地提供，品种包括大八达杏、串铃杏、偏头杏、白梅杏、玉八达杏、银白杏、金天阳杏、凯特杏、金太阳杏、香白杏、串红杏、骆驼黄杏、红桃杏、黄桃杏、密陀螺杏、土海红杏、北寨红杏、黄尖嘴杏，共18种。

1.2 试剂

丙酮，石油醚（沸程30℃～60℃），无水乙醇，二氯甲烷，甲醇（色谱纯），正己烷（色谱纯），β-胡萝卜素标准品（Dr.Ehrenstorfer GmbH）。

1.3 仪器

高效液相色谱仪（Agilent1200）；色谱柱：Extend 150mm×4.5mm，4.6μm；检测波长：450 nm；流动相：甲醇∶正己烷=95∶5；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。

紫外分光光度计（UV-2450），旋转蒸发器，分析天平：感量为0.1mg。

1.4 方法

新鲜杏洗净去皮，均质机打碎，4℃保存，尽快测定。

分别称取5 g样品于50mL带塞比色管中，加入20mL丙酮+石油醚（20+80）混合液，振摇提取，静置分层后将上层黄色液体转入旋转蒸发瓶中，重复加入上述提取液直至提取液无色，合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干（水浴温度40℃）。准确加入2mL无水乙醇溶解残渣，溶液过0.22μm滤膜待用。

1.5 标准溶液

准确称取β-胡萝卜素标准品6 mg（精确到0.1 mg），用四氢呋喃定容至100 mL棕色容量瓶中配成约60μg/mL的储备液，准确量取5mL上述溶液于另一100mL容量瓶中，用环己烷定容至刻度，此β-胡萝卜素标准溶液浓度约为3μg/mL，溶液中环己烷和四氢呋喃体积比为95∶5，使用紫外分光光度计在457 nm条件下标定此溶液[5-6]。

按公式计算标准溶液浓度：Cstd（mg/L）=A× 10 000/2 500

式中：A为β-胡萝卜素在入射光波长为457 nm处的最大吸收值；2500为β-胡萝卜素在环己烷溶液中，入射光波长为457 nm，比色杯厚度为1 cm，溶液浓度为1%时的吸光系数；10 000为溶液浓度由1%换算为mg/L时的换算系数。

储备液标定后，用无水乙醇稀释成浓度为0.15、0.6、1.5、3.0、6.0、12.0μg/mL的系列标准工作液，取20μL上机测定。以峰面积为纵坐标，以β-胡萝卜素标准工作液浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.6 试样测定

取待测液（1.4）20μL注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线计算出待测液中β-胡萝卜素的浓度。

2 结果与分析

2.1 线性关系及回收率

β-胡萝卜素在线性范围0.15μg/m L～12.0μg/m L（n=6）内，线性关系良好，所得标准曲线线性关系良好R2＞0.999 9，定量限为0.1mg/kg。β-胡萝卜素标准溶液色谱图及杏果肉中β-胡萝卜素含量测定色谱图分别见图1和图2。

图1 β-胡萝卜素标准品色谱图Fig.1 Chromatogram of β-carotene standard

图2 样品中β-胡萝卜素含量色谱图Fig.2 Chromatogram of β-carotene content in the sample

β-胡萝卜素在杏果肉中的加标回收率见表1。

表1 杏果肉中β-胡萝卜素加标回收率Table 1 Recoveries of β-carotene in apricot pulp

由此表可见，该方法具有较好的回收率，满足杏果肉中β-胡萝卜素含量测定的要求。

2.2 提取溶剂的选择

杏果肉水分含量较高，因此适合选用与水混溶的极性溶剂除掉水分，非极性溶剂从组织中溶出胡萝卜素[7]，本试验选取丙酮和石油醚混合溶液进行提取，实验结果表明，提取效果较好，不同浓度加标回收率均＞90%。

2.3 杏果肉中β-胡萝卜素含量

杏果肉经丙酮+石油醚（20+80）提取，高效液相色谱测定，最终得到的β-胡萝卜素含量见表2。

表2 杏果肉中β-胡萝卜素含量Table2 β-carotene content in Apricotpulp

实验结果表明，杏果肉中含有丰富的β-胡萝卜素，杏的品种不同，其β-胡萝卜素含量差别也较大。实验测定的18种杏品种中以骆驼黄杏的β-胡萝卜素含量最高为（17.55±0.27）mg/kg，以香白杏的β-胡萝卜素含量最低，为（0.12±0.012）mg/kg。实验还发现，白杏类品种如香白杏、银白杏等，β-胡萝卜素含量均较低。

3 讨论

β-胡萝卜素热稳定性差，不具有挥发性，在热、离子和光作用下容易异构化，遇氧时容易氧化，因此在实验操作过程中对环境条件要求严格，杏果肉打碎后需及时测定，处理过程注意避光，尽量减少β-胡萝卜素的损失。

杏种类繁多，全世界约三千多个品种，我国杏品种约占世界的三分之二[8]。由于杏含有多种营养物质，口感也颇受消费者喜欢，目前国内对杏关注较多的还是在于开发高产量、高成活率的杏树品种，对于不同杏品种中的营养成分研究较少[9]。随着生活水平的提高，人们在选取食物时越来越注重营养组成，因此，需要加强对杏功能成分及营养成分的分析。

[1] 唐刘蕴泉,蔡皓.β-胡萝卜素应用的研究进展[J].肠外与肠内营养,2005,12(2):121-123

[2]陶俊,张上隆,徐建国,等.柑橘果实主要类胡萝卜素成分及含量分析[J].中国农业科学,2003,36(10):1202-1208

[3]颜少宾,张妤艳,马瑞娟,等.杏果肉中类胡萝卜素的提取方法研究[J].江西农业学报,2011,23(9):159-161

[4]赵锋,刘威生,刘宁,等.我国杏种质资源及遗传育种研究新进展[J]果树学报,2005,22(6):687-690

[5] Joseph Schierle,Bernd Pietsch,Alan Ceresa,et al.Method for the Determination of β-Carotene in Supplements and Raw Materials by Reversed-Phase Liquid Chromatography:Single Laboratory Validation[J].J AOAC Int,2004,87(5):1070-1082

[6] John Szpylka and Jonathan W. DeVries.Determination of β-Carotene in Supplements and Raw Materials by Reversed-Phase High Pressure Liquid Chromatography:Collaborative Study[J].J AOAC Int,2005,88(5):1279-1291

[7]康保珊,赵文恩,焦凤云,等.不同提取溶剂系统对类胡萝卜素总含量的影响[J].食品工业科技,2007(1):84-86

[8]陈学森,李宪利,张艳敏,等.杏种质资源评价及遗传育种研究进展[J].果树学报,2001,18(3):178-181

[9] 魏景利,张艳敏,林群,等.我国杏种质资源研究及利用[J].落叶果树,2010(2):6-10

Measured β-carotene Content in Apricot Pulp by High Performance Liquid Chromatography

PAN Hong-yan，GUO Qi-lei，YANG Hong-mei
（China Food Quality and Safety Supervision and Inspection Center，Beijing100094，China）

Measured β-carotene content in 18 kinds of apricot pulp by HPLC （high performance liquid chromatography）.Samples extracted with acetone∶petroleum ether（20∶80），rotary evaporated to dryness in 40℃water bath，diluted with ethanol，and detected with HPLC.Detection wavelength is450 nm，quantitative detection limit is 0.1mg/kg.This method has characteristics of fast and effective，exact linear relation.The test showed that，apricot pulp was rich in β-carotene，the highest content of β-carotene in all of varieties is Luotuohuang apricot which is up to（17.55±0.27）mg/kg.

apricotpulp；β-carotene；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.03.027

2013-09-16

潘红艳（1986—），女（汉），中级工程师，硕士研究生，研究方向：食品安全。