五味子对衰老大鼠心肌抗氧化能力及形态学改变的影响

五味子对衰老大鼠心肌抗氧化能力及形态学改变的影响

李屹马越娇张晔刘永林徐国峰杨鑫周郦楠

(辽宁省基础医学研究所，辽宁沈阳110101)

摘要〔〕目的探讨五味子对D-半乳糖致衰老大鼠血清及心肌抗过氧化能力及心肌形态学改变的影响。方法应用D-半乳糖复制衰老大鼠模型，同时给予五味子灌胃，8 w后，取血、心脏。检测血清和心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量及光镜下心肌形态学的改变。结果五味子治疗组血清和心肌组织的T-AOC、GSH-Px、SOD、NO含量明显高于衰老模型组，MDA含量低于衰老模型组。结论五味子对自由基引起的心肌损伤有保护作用，清除自由基的能力随用药时间的延长而增强，所以其保护作用与五味子服用时间呈正相关。

关键词〔〕五味子；衰老；D-半乳糖；总过氧化能力；丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化酶

中图分类号〔〕R322.1+1〔文献标识码〕A〔

通讯作者：周郦楠(1966-)，女，硕士，教授，硕士生导师，主要从事神经解剖学研究。

第一作者：李屹(1973-)，男，硕士，讲师，主要从事基础医学研究。

《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。古医书称它荎蕏、玄及、会及，最早列于神农本草经上品中药，能滋补强壮之力，药用价值极高，有强身健体之效。药理研究表明，北五味子含有多种营养成分，如五味子素、苹果酸、柠檬酸、糖类、树脂、维生素C等〔1〕。味甘、酸，性温，能益气生津，补肾养心，收敛固涩，用于气虚津伤，体倦多汗，短气心悸；肺气不足或肺肾两虚所致的喘咳，或喘咳日久，肺气耗伤；心阴不足，心悸怔忡，失眠健忘；肾气不固，遗精，尿频，或脾肾两虚，久泻不止〔2，3〕。

1材料与方法

1.1动物8周龄(180～200 g体重)SD大鼠。由沈阳医学院实验动物中心提供。实验动物许可证为辽宁省科学技术厅签发，许可证号：SCXK(辽)2003-0016。动物饲料为繁殖鼠全价颗粒饲料，由沈阳市于洪区前民饲料厂生产。

1.2药品及试剂D-半乳糖(D-gal)为Sigma公司的产品，购于上海博蕴生物科技有限公司。总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。北五味子由吉林农业大学提供，按水提液常规方法煎制，浓缩至含生药量0.4 g/ml，供灌胃给药用。

1.3方法SD大鼠适应性饲养1 w，然后将大鼠称重，编号，随机分成5组，每组12只，雌雄各半，腹腔注射D-半乳糖(生理盐水)200 g·kg-1·d-1，连续给药8 w。①衰老模型组：腹腔注射D-半乳糖，生理盐水10 ml·kg-1·d-1灌胃。②五味子1组：腹腔注射D-半乳糖，自造模第1天开始灌胃给药，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。③五味子2组：腹腔注射D-半乳糖，自造模第3周开始灌胃给药，五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。④五味子3组：腹腔注射D-半乳糖，自造模第5周开始灌胃给药五味子10 ml·kg-1·d-1灌胃。⑤空白对照组：腹腔注射生理盐水，生理盐水灌胃。所有大鼠均饲以常规动物饲料和水。各组连续给药到8 w。末次给药4 h后处死动物，取血、心脏，分离血清。生理盐水10%心肌组织匀浆，3 000 r/min离心15 min,取上清液。血清及心肌组织匀浆上清液置于-80℃冰箱保存，备检测相关指标。各组另取大鼠经1%肝素钠生理盐水、含4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸盐缓液(PBS,pH7.4)固定液内固定灌注，取出心脏组织并置于固定液中后固定4 h，HE染色，光镜下观察。

1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行t检验。

2结果

2.1五味子对衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px的影响给药8 w后衰老大鼠血清T-AOC、GSH-Px含量显著下降，与空白对照组相比较差异显著(P<0.01)。五味子1组与衰老模型组相比较血清T-AOC、GSH-Px含量升高显著(P<0.01)，五味子2组与衰老模型组相比较血清T-AOC、GSH-Px含量明显升高(P<0.05)，而五味子3组与衰老模型组相比较血清中T-AOC、GSH-Px含量有所升高，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2五味子对衰老大鼠心肌组织MDA、SOD、NO的影响给药8 w后衰老大鼠心肌组织SOD、NO含量显著下降，MDA含量显著上升，与空白对照组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。五味子1组、2组、3组与衰老模型组相比较心肌中SOD、NO含量明显升高(P<0.01，P<0.05)，MDA含量明显下降(P<0.01，P<0.05)。说明五味子对自由基引起的心肌损伤有保护作用。见表2。

表1　五味子对D-半乳糖致衰老大鼠血清

与衰老模型组比较：1)P<0.01,2)P<0.05,下表同

2.3心肌组织形态学变化空白对照组心肌细胞排列整齐,心肌细胞呈短圆柱状,细胞质丰富, 细胞核较大,核仁明显, 染色质稍疏松,无炎性细胞浸润,连接处染色较深,即闰盘,多数只有一个细胞核,少数有双核,呈卵圆形,位于细胞中央,有横纹。衰老模型组心肌细胞排列紊乱，心肌纤维小，心肌细胞核不规则，少，萎缩，异常形状增多，呈椭圆形、细长形，血管扩张充血。心肌之间闰盘减少，不清楚。五味子组较衰老模型组有所恢复，心肌细胞核增多，椭圆形，空泡减少，但闰盘不清楚。见图1。

表2　给药后第8周五味子对D-半乳糖致衰老大鼠心肌

空白对照组

衰老模型组

五味子1组

五味子2组

五味子3组

3讨论

本实验结果表明D-半乳糖亚急性中毒状态下, 体内产生大量超氧阴离子自由基, 是引起动脉粥样硬化、冠状心脏疾病和免疫力不足的主因，也是造成老化过程加速的罪魁祸首。可以直接损伤细胞引起衰老,还可以通过引起微循环障碍和缺血改变从而进一步加重衰老进程。这种生化和组织结构的改变与自然衰老表现基本吻合。五味子中含有多种化学成分，其中木酚素及多糖是强效抗氧化剂〔4～7〕，能抑制自由基，能增强腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)或粒线体(细胞能量库)的能量生产，同时保护线粒体免受氧化压力所侵害。具有降低心肌损害程度,明显延缓衰老中心肌细胞的功能减退速度。这些作用足以说明五味子能减缓老化过程和延缓出现与老化相关的疾病，如心脏衰竭、阿尔茨海默病及帕金森病〔8～10〕。本实验中,五味子不同的给药时间均可显著提升衰老大鼠血清和心肌中T-AOC、GSH-Px、SOD、NO和降低MDA的含量，说明五味子对自由基引起的心肌损伤有保护作用，清除自由基的能力随用药的时间延长而增强，所以其保护作用与五味子服用时间呈正相关。

4参考文献

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2倪立东，陈延西.五味子药理作用研究概况〔J〕.暨南大学学报：医学版，1996；17(2)：125-8.

3李巧茹.五味子药理作用的研究进展〔J〕.西北药学杂志，1995;10(1)：46-8.

4Liu H,Lai H,Jia X,etal.Comprehensive chemical analysis of Schisandra chinensis by HPLC-DAD-MS combined with chemometrics 〔J〕.Phytomedicine,2013;20(12)：1135-43.

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6谢宇，陈建光，孙新.4种五味子木脂素抗氧化作用实验研究〔C〕.第十届全国心血管药理学术会议暨2010(重庆)国际心血管疾病与药物高峰论坛，2010:151-3.

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〔2014-03-12修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)