王不留行对去势大鼠骨密度和骨代谢指标的影响

王不留行对去势大鼠骨密度和骨代谢指标的影响

黄庭惠伍杨1郑永梅

(恩施市中心医院,湖北恩施445000)

摘要〔〕目的评价中药王不留行对去势大鼠骨质疏松的防治效果。方法采用去卵巢建立大鼠骨质疏松模型。60只雌性大鼠，分假手术组、模型组(去除卵巢)，雌二醇(E2)组(去除卵巢+尼尔雌醇)、药物组(去卵巢+王不留行)。术后3个月，双能X线吸收法(DEXA)测量大鼠骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)；取大鼠血、尿检测骨代谢指标。结果与模型组比较，药物组BMD和BMC有显著提高。药物组骨钙素(BGP)、骨碱性磷酸酶(ALP)明显升高，同时尿钙/肌酐、尿磷/肌酐、尿羟脯氨酸/肌酐、尿Ⅰ型胶原羧基末端肽/肌酐均降低。结论王不留行可以有效地阻止去势骨质疏松大鼠的骨量丢失，具有促进骨形成，抑制骨吸收的作用，对去势大鼠骨质疏松有较好的防治作用。

关键词〔〕王不留行；骨质疏松；骨密度；骨代谢指标

中图分类号〔〕R285.6〔文献标识码〕A〔

基金项目：湖北省自然科学

通讯作者：伍杨(1962-)，女，副教授，主要从事老年病相关免疫学机制研究。

1湖北民族学院医学院

第一作者：黄庭惠(1973-)，女，主管护师，主要从事老年护理与保健研究。

骨质疏松是常见的代谢性疾病，雌激素的缺乏是绝经后骨质疏松(PMO)发病中的重要因素。雌激素替代疗法(ERT)是防治PMO的有效方法，但长期大量使用有一定的副作用〔1〕，因此，选用副作用小的中药防治PMO已成为一个研究热点。一些植物雌激素有着和天然雌激素相似的作用，在对传统中药王不留行化学成分的研究中，桑圣明等〔2〕从王不留行中分离出有较强雌激素样活性的环肽成分。本实验通过观测王不留行对去势大鼠骨密度(BMD)和骨代谢指标的影响来客观评价王不留行对去势大鼠骨质疏松的防治作用。

1材料与方法

1.1实验动物3月龄清洁级Wsitar雌性大鼠60只，体重180～220 g，由湖北省实验动物研究中心提供。动物合格证号：SCXK(鄂)2003～005。

1.2药物及试剂王不留行药材购自恩施州恒信医药公司，于常压下，用10倍于药材体积的开水将王不留行浸泡1 d，然后过滤去渣，将药物浓缩至所需浓度。尼尔雌醇(片剂，每片1 mg，上海华联制药有限公司生产)，使用前配成0.01 mg/ml的溶液。血骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、尿钙、磷、尿羟脯氨酸、尿Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX)、肌酐(Cr)检测试剂盒均购自北京康源瑞得生物科技有限公司。

1.3仪器QDR-4500型双能X线骨密度仪(美国Hologl公司)，中佳光电GC-1200γ放射免疫计数器，TP-1000电子天平(湘仪天平仪器厂)。

1.4分组及选模方法将大鼠称重后除正常对照组(n=10)外，其余50只大鼠均以3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.1 ml/100 g体重)，背部肋下切开皮肤、肌肉、暴露腹腔，找出卵巢，假手术组(10只)保留，其余大鼠切除双侧卵巢。术后1 w行阴道涂片，确定无动情周期变化者为选模成功，选模成功大鼠随机分为3组：模型组、雌二醇(E2)组(去除卵巢+尼尔雌醇)、药物组(去卵巢+王不留行液)，各组10只。E2组予以尼尔雌醇按人鼠体表面积比率折算1倍等效剂量〔3〕，合0.01 mg/ml的混悬液，每周1次(周内第1天使用)，其余时间每天灌胃等量饮用水；药物组予以0.4 g/ml王不留行水浸液2 ml(相当于生药40 g)，每天1次灌服，连续6 d，休息1 h给药时间为3个月。期间各组大鼠同样环境分笼饲养，自由摄食饮水。饲养环境：室内温度控制在(20±2)℃,标准饲料。

1.5标本制备大鼠处死前1 d置于代谢笼中收集24 h尿液，-10℃保存待测。3% 戊巴比妥钠麻醉后，断头处死大鼠，取血，3 000 r/min离心10 min，分离血清，置-40℃保存待检。

1.6检测指标和方法所有动物3% 戊巴比妥钠麻醉后置于扫描定位板上，于QDR-4500型双能X线密度仪测定腰椎、股骨及全身BMD和骨矿含量(BMC)。按试剂盒说明测定血BGP、ALP、尿钙、磷、尿羟脯氨酸、尿Ⅰ型CTX。

1.7统计学方法采用SPSS17.0软件进行t检验。

2结果

2.1王不留行对去势大鼠全身、股骨、腰椎BMD的影响模型组大鼠腰椎、股骨和全身BMD与正常对照组比较明显降低(P<0.01)；药物组、E2组与模型组比较，全身及腰椎、股骨BMD有显著差异(P<0.01)。见表1。

2.2王不留行对去势大鼠BMC的影响模型组与正常对照组比较BMC量明显降低(P<0.01)；与模型组比较，药物组、E2组骨矿含量有显著性提高(P<0.01)。见表2。

2.3王不留行对去势大鼠血清BGP、ALP含量的影响模型组大鼠血清BGP、ALP含量与正常对照组比较明显升高(P<0.01)；与模型组比较，药物组、E2组大鼠血清BGP、ALP含量明显降

低(P<0.01)；药物组、E2组明显没有差异。见表3。

2.4王不留行对去势大鼠24 h空腹尿钙、钙/Cr、磷/Cr、羟氨酸/Cr、CTX/Cr的影响模型组大鼠24 h空腹尿钙、钙/Cr、磷/Cr、羟脯氨酸/Cr、CTX/Cr与正常对照组比较明显升高(P<0.01)；与模型组比较，药物组、E2组大鼠24 h空腹尿钙、钙/Cr、磷/Cr、羟脯氨酸/Cr、CTX/Cr明显降低(P<0.01)；药物组、E2组明显没有差异。见表4。

表1　王不留行对去势大鼠全身、股骨、腰椎BMD的

与模型组比较：1)P<0.01

表2　王不留行对去势大鼠BMC的影响

与正常对照组比较:1)P<0.01；与模型组比较:2)P<0.01；下表同

表3　各组大鼠血清BGP、ALP含量比较

表4　各组大鼠24 h空腹尿钙、钙/Cr、磷/Cr、羟脯氨酸/Cr、CTX/Cr的比较

3讨论

2000年美国国立公共卫生研究所(NIH)召开的骨矿会议上，认为骨质疏松是指因为骨强度的问题而引发骨折增加骨骼疾病。骨强度是由BMD和骨质量综合决定的。骨质量评价依赖于DEXA评价和骨代谢标志物检测。目前，DEXA是世界公认的诊断骨质疏松的金标准〔4〕。骨代谢标志物，血清BGP是成骨细胞合成分泌的特殊蛋白，其功能是维持骨的正常矿化率，为反映骨形成的灵敏指标，BGP由成骨细胞合成后，约20%从骨组织直接进入血液，因此血中BGP的浓度可以反映骨中BGP的状态。血清ALP主要来自骨和肝，ALP是成骨细胞成熟早期的标志物，可反映骨形成。空腹尿钙、磷主要来源于骨盐的分解，故其排出量可反映骨吸收的状况。尿羟脯氨酸的排泄量为骨吸收的指标；CTX是反映骨吸收状态的特异指标。治疗后骨吸收标志物减少能反映长期的骨折风险减小。因此，骨代谢标志物不仅作为评价量质量，预测骨折率的手段，且正在成为评价骨吸收药物药效的手段〔5〕。

本实验结果显示，中药王不留行能有效改善去势骨质疏松大鼠BMD和BMC，其治疗效果与尼尔雌醇无明显差异，王不留行既可以促进骨形成，又可以抑制骨吸收，对去势大鼠骨质疏松有较好的防治作用，是一种有研究和应用前景的天然药物。本实验结果表明王不留行可显著降低去势大鼠白细胞介素(IL)-1、IL-6、TNF-α的水平〔6〕。而雌激素水平降低则可使这些细胞因子分泌增加，王不留行可能经其雌激素样作用而改善去势大鼠骨质疏松症状，其防治骨质疏松的机制有待进一步的实验和临床研究。

4参考文献

1刘建立.应用雌激素防治绝经后骨质疏松症的问题〔J〕.国际内分泌代谢杂志，2006；26(4)：230-2.

2桑圣明，荣爱娜，王洪诚，等.中药王不留行化学成分的研究(Ⅱ) 〔J〕.中草药，2000；31(3):1-4.

3苗明三.实验动物和动物实验技术〔M〕.北京：中药中医药出版社，1997：143-4.

4冯秉玮，高雨红.源发性骨质疏松的诊断现状〔J〕.内蒙古医学杂志，2004；36(1)：37-40.

5于丽，苏秀兰，毕力夫.骨代谢指标和骨质疏松〔J〕.中国骨质疏松杂志，2006；12(3)：307-9.

6伍杨，邓明会，陈显兵.王不留行防治去势大鼠骨质疏松症的实验研究〔J〕.四川中医，2010；28(5)：58-9.

〔2014-01-07修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)