皮部推拿法对免疫抑制家兔免疫功能的调节作用

皮部推拿法对免疫抑制家兔免疫功能的调节作用

郭骏骐齐力1刘明军尚坤吴萌杨寄渝李亚张欣

(长春中医药大学，吉林长春130117)

摘要〔〕目的观察皮部推拿法对免疫抑制家兔免疫功能的调节作用。方法将15只家兔随机平均分为对照组、模型组和推拿组，采用腹腔注射环磷酰胺的方法造模，观察各组动物胸腺指数、脾脏指数和局部皮肤主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ、白介素(IL)-12含量。结果模型组各项指标均低于对照组，灰度值高于对照组(P<0.05，P<0.01)。推拿组各项指标均高于模型组，灰度值低于模型组(P<0.05，P<0.01)。结论采用腹腔注射环磷酰胺的方法能够制造免疫抑制动物模型；皮部推拿法能够有效调节免疫抑制家兔的免疫功能。

关键词〔〕皮部推拿；免疫

中图分类号〔〕R28〔文献标识码〕A〔

基金项目：国家自然科学

通讯作者：张欣(1976-)，男，博士，副教授，硕士生导师，主要从事中医手法治未病的临床与机制研究。

1吉林省临床检验中心吉林省医疗机构质量监测评价中心

第一作者：郭骏骐(1973-)，男，硕士，副研究员，主要从事中医外治疗法的临床应用研究。

The immune regulation of tuina on the skin areas of immunosuppressive rabbit

GUO Jun-Qi,QI Li,LIU Ming-Jun,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, Jilin, China

Abstract【】ObjectiveTo observe the immune regulation of tuina on the skin areas of immunosuppressive rabbit.Methods15 rabbits were randomly divided into treatment,control and model groups.The peritoneal injection of cyclophosphamide was used to induce the immunosuppressive rabbit．The levels of MHC-Ⅱand IL-12 of local skin, indexes of thymus and spleen were observed．ResultsEach index of model group was below than that of control group(P<0.05，P<0.01), each index of treatment group was higher than that of model group(P<0.05，P<0.01).ConclusionsTuina on the skin areas could effectively adjust the immune function of immunosuppressed rabbit.

【Key words】Skin areas tuina;Immune

“皮部”理论是中医传统理论的重要组成部分，也是推拿等中医外治方法产生疗效的理论基础。中医理论认为，皮部居于人体最外层，是机体的卫外屏障，具有卫外固表、保护机体的作用。本课题组以推拿手法刺激免疫抑制家兔背部的足太阳膀胱经皮部，通过观察家兔部分免疫指标的变化情况，研究皮部推拿法对免疫功能的调节作用。

1材料与方法

1.1实验动物与分组选取兔龄4个月的纯种新西兰大耳家兔15只，体重(1 950±220)g，由长春中医药大学实验动物中心提供。按完全随机设计法(采用随机数字表)将15只家兔分为空白对照组(简称对照组)、模型组、模型+推拿干预组(简称推拿组)，每组5只。

1.2实验药品与试剂环磷酰胺注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司)；主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ一抗(ABCAM，United Kingdom)；白细胞介素(IL)-12一抗(北京博奥森生物技术有限公司)。

1.3实验仪器电子天平，MP120-1(上海第二天平仪器厂)；光学显微镜及图像分析系统、轮转式石蜡切片机(德国Leica公司)；自动酶标仪MK3型(荷兰雷勃公司)。

1.4实验方法给予家兔环磷酰胺腹腔注射制造免疫抑制家兔模型。按照29.6 mg·kg-1·d-1的标准计算相应的注射剂量，隔日1次，连续腹腔注射4次。对照组注射等量生理盐水。

推拿组动物造模结束后第2天采用皮部推拿法干预，治疗时家兔不固定以避免惊吓。选择家兔背部脊柱两侧足太阳膀胱经皮部，从肺俞穴至肾俞穴之间部位(穴位选取按《兽医针灸学》及《实验针灸学》定位)。①揉膀胱经：术者以拇指、食指指腹为着力点，在家兔背部脊柱两侧足太阳膀胱经皮部由尾至头施以轻揉法，时间约2 min；②推膀胱经：术者以拇指、食指指腹为着力点，在家兔背部脊柱两侧足太阳膀胱经皮部由尾至头施以推法，时间约2 min；③捏脊法：以双手拇指、食指指端夹持家兔背部皮毛及皮下组织，由尾至头施以捏脊法，反复操作10次。每天1次，每次约20 min，连续操作21 d。

1.5检测指标及方法(1)免疫抑制家兔胸腺指数和脾脏指数：干预结束后第2天，将实验动物处死，剥离胸腺和脾脏并称量湿重，按以下公式计算胸腺指数和脾脏指数：胸腺指数或脾脏指数=胸腺或脾脏重量(mg)/体重(g)。(2)家兔背部足太阳膀胱经皮部局部皮肤中MHC-Ⅱ、IL-12含量：干预结束后第2天，将实验动物处死，取背部施术部位皮肤进行切片染色，置于40倍物镜下观察、拍照，采用Leica计算机图像分析系统对染色阳性细胞个数和灰度值进行定量分析。

1.6统计学分析计量资料组间比较行t检验。

2结果

2.1家兔胸腺指数和脾脏指数的影响实验造模成功，皮部推拿法能够提高免疫抑制家兔的胸腺指数和脾脏指数，提示此方法能够有效调节机体免疫功能。见表1。

2.2局部皮肤MHC-Ⅱ、IL-12含量的影响见表2。皮部推拿法能够提高施术部位皮肤中MHC-Ⅱ、IL-12的含量，降低灰度值，提示此方法能够有效调节机体免疫功能。

表1　皮部推拿法对家兔胸腺指数和脾脏指数的影响( ± s)

与对照组比较：1)P<0.01；与模型组比较：2)P<0.05

表2　皮部推拿法对局部皮肤MHC-Ⅱ、IL-12含量的影响

与对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01

3讨论

推拿疗法是中医传统养生保健与治疗疾病的方法之一，具有悠久的历史和完善的理论基础。连宝领、于娟、詹强等〔1～3〕研究均发现，通过不同的推拿方法能够有效调整机体的免疫功能。皮部是十二经脉在皮肤上的分属部位，是十二经脉功能活动反映于体表的部位，也是络脉之气散布之所在。《素问·皮部论》还说：“皮者，脉之部也。邪气客于皮，则腠理开，开则邪气客于络脉；络脉满则注于经脉；经脉满则入舍于府藏。”指出了疾病转变的层次是皮部-络脉-经脉-脏腑，由表达里，逐渐深入。足太阳膀胱经在十二经脉中分布最长最广，是人体的藩篱，太阳为诸阳之首，在三阳经中阳气最盛，阳气如果虚衰，则机体免疫功能下降。同时，足太阳膀胱经背部皮部包含了肺俞、心俞、肝俞、胆俞、脾俞、胃俞、肾俞等穴位。这些五脏背俞穴是五脏之气输注于腰背部的腧穴，具有调节五脏功能的作用，五脏功能和调，人体正气充足，抗邪能力增强。因此，本研究采用推拿手法刺激家兔背部脊柱两侧的足太阳膀胱经皮部来调整其免疫功能。

腹腔注射环磷酰胺制造免疫功能低下的动物模型是目前较为常用且技术成熟的造模方法。胸腺和脾脏均为机体免疫器官，是淋巴细胞分化、成熟和产生免疫应答的场所，在免疫功能低下时胸腺、脾脏萎缩，体积变小。因此胸腺系数和脾脏系数是衡量机体免疫功能的重要指标〔4〕。MHC-Ⅱ类分子的表达被看成是抗原递呈能力的标志，能够协调免疫细胞间的相互作用，调控体液免疫和细胞免疫应答〔5〕。IL-12是一种异双聚体细胞因子，是重要的具有抗细胞内病毒作用的细胞因子，具有调节细胞因子级联反应的作用，可促进机体免疫功能阵〔6〕。这些指标均能够有效反映出机体免疫功能的变化。

4参考文献

1连宝领，陈斌，朱鼎成，等.背腰部保健推拿对老年人免疫功能的影响〔J〕.按摩与导引，2002；18(6)：8-11.

2于娟.推拿肾俞穴治疗老年肾虚腰痛免疫机制研究〔J〕.山东中医杂志，2004；23(4)：214-6.

3詹强.足部反射区推拿对白细胞介素-1β水平的影响〔J〕.浙江中西医结合杂志，2004；14(3)：138-9，142.

4王丽君，姜虹.龙牙楤木多糖抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫功能的影响〔J〕.中国免疫学杂志，2011；27(2)：130-4.

5Jorundsson E，Press CM，Landsverk T.Distribution of MHC-Ⅱand CDI molecules in the skin of lambs and changes during experimentally-induced contact hypersensitivity〔J〕.Vet Immunol Immunopathol,2000；74(1-2)：87-101.

6Meeran SM，Katiyar N，Singh T，etal.Loss of endogenous interleukin-12 activates survival signals in ultraviolet-exposed mouse skin and skin tumors〔J〕.Neoplasia,2009；11(9)：846-55.

〔2014-02-19修回〕

(编辑袁左鸣)