甘肃地区女性宫颈HPV感染的现状研究

杜 宏，索兰草，刘红贤，王 强，刘 斌，简启亮，黄 山，张文华，王 芳

（1．兰州大学第二医院病理科，甘肃兰州，730000；2．兰州军区机关门诊宫颈疾病诊治中心，甘肃兰州730000；3．陇南市人民医院病理科，甘肃陇南742500；4．成县人民医院妇产科，甘肃成县742500；5．兰州军区兰州总医院病理科，甘肃兰州730000）

甘肃地区女性宫颈HPV感染的现状研究

杜 宏1，索兰草2，刘红贤3，王 强4，刘 斌5，简启亮1，黄 山1，张文华5，王 芳1

（1．兰州大学第二医院病理科，甘肃兰州，730000；2．兰州军区机关门诊宫颈疾病诊治中心，甘肃兰州730000；3．陇南市人民医院病理科，甘肃陇南742500；4．成县人民医院妇产科，甘肃成县742500；5．兰州军区兰州总医院病理科，甘肃兰州730000）

目的：了解甘肃地区女性人乳头瘤病毒（HPV）感染的基因亚型、年龄及地区分布等．方法：采用凯普医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术，对7318名兰州女性进行生殖道21种HPV感染基因亚型筛查．结果：甘肃地区女性HPV感染率为19．9%（1 452／7 318），其中高危型HPV感染率14．78%（1 082／7 318），低危型HPV感染率3．38%（247／7 318），高危型中HPV16为主要致病亚型，占28．59%（415／1 452），低危型中HPV6占6．30%（98／1 452）．1452例感染HPV的标本中，单一感染1 188例，占81．82%（1 188／1 452），多重感染264例，占18．18%（264／1 452）．按年龄分组中≥50岁组HPV感染率最高，占24．24%．按地区分析，陇南地区HPV感染率最高，达到30．97%（83／268）．结论：甘肃地区为宫颈癌高发区，其中HPV16是感染最多的型别，对该地区女性进行子宫颈癌的筛查和防治已成为当务之急．

人乳头瘤病毒（HPV）；核酸分子快速导流杂交基因芯片；PCR；甘肃地区

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率在女性肿瘤中位居第二，仅次于乳腺癌［1］．据世界范围统计每年有52．98万新发病例，80%发生在发展中国家，其中约13万在中国，约占世界宫颈癌新发病例的24．53%，为中国妇女恶性肿瘤第一位［2］．甘肃省是宫颈癌的高发地区，据调查显示该地区宫颈癌患病率502．56／10万，宫颈癌死亡率为11．88／10万，占全癌死因构成的11．67%，均居全国之首［3］．人乳头瘤病毒（human papilloma virus HPV）感染已被证实是宫颈癌发生的首要因素且为始动因素［4］．自1949年Straussza在电镜下第1次发现人乳头瘤病毒，目前已鉴定出HPV有100多种亚型，约有40多种与生殖道感染有关，根据其致病力分为高危型和低危型；高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、58等［5］，可引起多种恶性肿瘤如喉癌、膀胱癌、宫颈癌、肉瘤等，高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要致病因素［6］；低危型主要包括HPV6、11、42、43、44等型别，常引起湿疣等良性病变［7］．近年来，基因芯片技术已应用于HPV的分型，并取得良好的临床效果．本研究采用凯普医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术，对兰州女性进行生殖道21种HPV感染基因亚型筛查，了解并掌握甘肃地区与宫颈癌发病相关的主要HPV型别分布，为将来研制有效的适合甘肃地区的HPV疫苗积累基础数据．

1 资料与方法

1．1 资料

（1）研究对象 2010年5月至2012年7月在甘肃省兰州军区机关门诊宫颈疾病诊治中心、兰州军区总院病理科、兰州大学第二医院妇产科门诊、成县人民医院妇产科及陇南市人民医院病理科就诊的女性，共计7 318人，年龄19～80岁，平均年龄（40．22±8．93）岁，均来源于甘肃省地区，源中河东地区包含平凉市、庆阳市，河西地区包含武威地区、酒泉地区、张掖地区，其余按行政市划分，所有患者至少有1年性生活史、处于非妊娠期、无其他内外科疾患、无盆腔放疗、化疗病史．

（2）仪器与试剂 HPV-DNA提取试剂盒购自大连宝生物技术有限公司，HPV基因微阵列分型检测试剂盒购自深圳凯普生物技术有限公司．

1．2 方法

（1）标本采集和处理 所有受检者均由各单位固定的妇产科医生用凯普公司配套专用宫颈刷置于宫颈口鳞柱交接处沿顺时针旋转3～5周获得足够的移行区上皮细胞后取出，放入3 mL专用细胞保存液中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，做好样本标记，立即送检或放置4℃冰箱中，3 d内检验．

（2）检测方法 HPV感染型别检测用试剂盒提取DNA；按PCR反应体系加入各试剂和DNA模板，混匀后进行PCR扩增．PCR循环温度设置：95℃9 min、95℃20 s、55℃30 s、72℃30 s、40个循环；72℃5 min；4℃保存．PCR产物95℃变性5 min，迅速放入冰浴中，同时进行杂交实验的准备．按凯普公司提供的实验步骤进行HPV导流杂交，酶标显色．（3）结果判断肉眼观察检测结果，阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点，根据膜条HPV分型分布图，判断阳性点为何种HPV病毒类型．本检测将HPV分为21种基因亚型，有2种或2种以上者为多重感染，对多重感染者，各亚型阳性率重复计算．

1．3 统计学方法

采用SPSS 18．0统计软件进行统计学分析，列联表资料分析，各年龄组间检出率差异用χ2检验，P检验为双向，P＜0．05表示有统计学差异．

2 结果

2．1 HPV感染状况和型别分布

7 318名女性中有1 452名感染HPV，总感染率为19．9%（1 452／7 318），其中高危型HPV感染率14．78%（1 082／7 318），低危型HPV感染率3．38%（247／7 318）．感染HPV的女性中，高危型占74．52%（1 082／1 452），低危型占17．01%（247／1 452），高危型与低危型同时感染者占8．47%（123／1 452）．所有高危型HPV感染者中，HPV16为主要致病亚型，占28．59%（415／1 452），HPV58为第二致病亚型，占17．01%（247／1 425），感染HPV52和HPV18者分别占13．34%（194／1 452）和7．77%（113／1 452），低危型中HPV6占6．30%（98／1 452），HPV11占6．30%（92／1 452）．检测的21种亚型均有出现，构成比按递减顺序排列情况（表1）．

表1 甘肃省妇女HPV感染的不同类型构成Table 1 Different infect type of HPV in Gansu province

2．2 不同年龄段HPV感染阳性率比较

7 318例受检者分成5个年龄段，≥50岁组HPV感染率最高，占24．24%．由于样本数量较少且包含年龄段较少，统计分析时将≤20岁组的样本并入20～30岁组，结果显示该组HPV感染阳性率亦较高，为20．88%；30～39岁组与40～49岁组HPV感染率分别为18．08%，和19．57%．两两比较提示：≥50岁组HPV感染率明显高于其他各组（P均＜0．05），≤29岁组、30～39岁组、40～49岁组间两两比较HPV感染率差异不显著，无统计学意义（P＞0．05）（表2）．

表2 甘肃省不同年龄段妇女HPV感染率比较Table 2 Intection rate of different age group in Gansu province

2．3 HPV单一感染和多重感染的情况

1 452例感染HPV的标本中，单一感染1 188例，占81．82%（1 188／1 452），多重感染264例，占18．18%（264／1 452），其中198例为双重感染，占13．64%（198／1 452），55例为三重感染，占3．79%（55／1 452），另11例为四重感染，占0．76%（11／1 452）．多重感染最多的为HPV16合并58型，其次为HPV16合并52型和HPV16合并18型．

2．4 不同地区感染HPV类型比较

参与检测的7 318位女性均来自甘肃省不同地区．结果显示：HPV感染率最高的地区为陇南地区，达到30．97%（83／268），其次是甘南地区，达到28．62%（81／283），感染率最低的是临夏地区，达到15．63%（75／480）．各地区HPV感染情况（表3）．

表3 甘肃省不同地区妇女HPV感染率Table 3 Infection rate of different area in Gansu province

3 讨论

本研究采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术对甘肃地区7 318名女性宫颈HPV感染进行检测，结果显示HPV感染1 452名，感染率为19．9%（1 452／7 318），低于浙江省台州地区35．08%［8］，高于深圳地区17．5%［9］和呼和浩特地区13．04%［10］．高危型HPV感染者中，HPV16为主要致病亚型，占28．59%（415／1 452），在总体、各年龄组及各地区均占首位，与世界范围内的研究结果一致，HPV58为第二致病亚型，占17．01%（247／1 452），HPV52仅次于HPV58，占13．34%（194／1 452），低危型HPV感染者中HPV6为主要亚型，占6．30%（92／1 452），与多数亚洲国家的研究结果一致［7，11］．世界范围内的研究结果提示HPV感染常见基因亚型具有地区差异：东南亚地区的常见亚型为HPV18，非洲西部检出率最高的亚型为HPV45［7］，与中国境内其他地区相比较，HPV感染常见基因亚型亦存在一定地区差异：浙江省台州地区常见基因亚型依次为HPV16、11、52、33、58型［8］；北京地区常见基因亚型依次为HPV16、58、52、53、33型［12］；香港地区常见类型是HPV16、58、11、cp8304和33型［13］，本研究中甘肃地区常见HPV感染基因亚型为HPV16、HPV58、HPV52、HPV18、HPV53型，表明HPV感染率及常见基因亚型具有明显的地区特点．

本研究结果显示大于50岁组HPV感染率（24．24%）高于其他各年龄组，且差异具有统计学意义．目前HPV感染率与年龄的相关性各学者所持观点不尽相同，一些国内外的研究报道，发展中国家或经济落后地区HPV感染的年龄别分布曲线为U型［14］．Sellors等［15］报道在20～24年龄段女性HPV感染率最高为24．0%，而45～49年龄段女性HPV感染率降至3．4%，HPV感染率随年龄增长逐渐降低，与本研究结果不一致．Baseman等［14］研究发现HPV总感染率及高危亚型随年龄增长感染率逐渐升高，特别是与宫颈癌发生密切相关的最常见高危亚型HPV16随年龄增长阳性率明显递增，与本研究结果不一致，可能与当代社会性生活过早、过频及多性伴现象的出现有关，也可能由于年龄大于45岁的女性机体免疫力逐渐降低或激素水平变化导致潜伏期病毒复活．HPV在人群中普遍存在，大多数感染是一过性的，35岁以后高危亚型HPV的持续感染是宫颈癌的直接原因，特别是同一基因亚型高危亚型HPV的持续感染更易造成宫颈癌，由于老年女性性生活逐渐减少，其HPV感染水平可能反映着HPV持续感染状态．本研究中大于50岁女性HPV感染率明显增高，与中国宫颈癌高发年龄在45～60岁相符．因此，对年长女性积极开展HPV感染基因亚型检测以预防宫颈癌及宫颈癌前病变的发生刻不容缓．

HPV多重感染率在世界范围内的差异很大，在菲律宾人群中为14．3%，摩洛哥为5．3%，荷兰为28%，哥斯达黎加人群中为39%［15］．本研究结果显示甘肃地区女性HPV感染以单一感染为主，占81．82%（1 188／1 452），多重感染仅占18．18%（264／1 452），与国内学者研究结果相比，低于陶萍萍等报道的北京地区多重感染率44．35%［16］，与蒋旭峰等［17］报道的金华地区多重感染率21．87%、林广玲等［18］报道的粤东地区多重感染率19．61%相一致，高于杨英捷等［12］报道的北京地区多重感染率8．9%．在多重感染中双重感染占有极大地比例为75%（198／264），三重感染占20．83%，四重感染占4．17%（11／264）．多重感染最多的为HPV16合并其他亚型的感染，提示HPV16型感染后清除率低，导致宫颈对其他型别的易感性增加．多重感染在宫颈病变进展中的意义尚不明确．Munoz等［7］认为多重感染并不增加宫颈癌的发生，HPV感染的型别数与宫颈病变的级别没有相关性．但也有学者持相反观点：Ho等［19］认为HPV多重感染者出现持续感染的危险性更大，而HPV的持续感染是宫颈病变发生的原因，因此多重感染易导致宫颈病变．Lee等［20］认为，多重感染发生宫颈癌的危险较单一型别感染者明显升高．陶萍萍等［21］在以往的研究中也发现多重感染与宫颈病变有关，HPV多重感染率随病变级别增加而增加，一定程度上说明多重感染对宫颈病变及宫颈癌的发生发展起促进作用．对于甘肃地区HPV感染基因亚型数与宫颈病变的关系，需在以后的工作中继续研究．

本研究结果显示HPV感染地区分布明显，高发区主要集中在甘肃陇南、甘南地区，河西、天水地区居一般水平，临夏地区最低．国家卫生部信息统计中心的结果显示：宫颈癌有明显的聚集现象，高发区主要分布在中西部地区（甘肃、山西和陕西省），且农村高于城市，山区高于平原［22－24］．20世纪90年代全国第二次死因回顾抽样调查结果显示，甘肃省宫颈癌死亡率为11．88／10万，居全国前列；而陇南市武都区宫颈癌死亡率为36．15／10万，比全国平均水平高出11．2倍，居全国之首［25］．中国西部10个县、市中，甘肃省有4个县宫颈癌死亡率高于全国平均水平，其中陇南地区武都县为最高，死亡率居全国首位，高出全国平均水平10倍以上，甚至居世界最高水平［22］．中国子宫颈癌死亡率的地理分布不均衡主要是由于城市中进行子宫颈癌筛查比农村多．宫颈癌是目前为止惟一一个病因明确、可以预防的恶性肿瘤．筛查是预防和控制宫颈癌的主要手段，宫颈浸润癌的5年生存率是67%，宫颈早期癌的5年存活率是90%，而宫颈原位癌则几乎达100%．因此，如果加强对35岁以下农村妇女的一、二级预防，发现变化及时就医，防患于未然，切实做到早发现、早诊断、早治疗，甘肃省的宫颈癌防治工作将会取得更大的成绩．

甘肃地区是宫颈癌高发病率、高死亡率地区，地处大西北，经济、文化水平落后，卫生资源匮乏，患者大多来源于自然环境和医疗条件较差的农村山区，所以，临床上确定患者的HPV亚型，研究符合甘肃地区女性HPV感染基因亚型、感染率及流行趋势等特点的HPV疫苗，对于本地区妇女的健康有着重要的意义．本研究通过检测初步得知甘肃地区与宫颈癌发病有关的主要HPV型别，有利于研究甘肃地区宫颈癌高发病率与高危型HPV感染之间的关系，并为将来研制针对甘肃地区发病状况的HPV疫苗提供了依据，对研究宫颈癌的发病机制以及预防和早期发现宫颈癌和癌前病变都具有重要的意义．

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［责任编辑：朱颖嫄］

Current research status of cervical HPV infection in Gansu province

DU Hong1，SUO Lancao2，LIU Hongxian3，WANG Qiang4，LIU Bin5，JIAN Qiliang1，HUANG Shan1，ZHANG Wenhua5，WANG Fang1
（1．Department of Pathology，Lanzhou University Second Hospital，Lanzhou，730000 China；2．Lanzhou Military Authority of Cervical Disease Treatment Center，Lanzhou，730000 China；3．Department of Pathology，the People's Hospital of Longnan，Longnan，742500 China；4．Department of Obstetrics and Gynecology，the People's Hospital of Chengxian，Chengxian Gansu，742500 China；5．Department of Pathology，Command Hospital of Lanzhou Military Area，Lanzhou，730000 China）

Aim：To investigate the characteristics of the subgenotype，age and regional distribution of HPV infected in females of Gansu province．Methods：A screening for the 21 subgenotypes of HPV was carried out in 7318 females at the Lanzhou military authority of cervical disease treatment center，the department of pathology in command hospital of Lanzhou military area，the department of obstetrics and gynecology outpatient in Lanzhou university second hospital，the department of obstetrics and gynecology in the people's hospital of Chengxian，and the department of pathology in the people's hospital of Longnanfrom May，2010 to July，2012 with Cape Flow-through hybridization and gene chip techniques．Results：HPV infection rate was found to be 19．9%（1 452／7 318）in Gansu province of which HR-HPV infection rate was 14．78%（1 082／7 318），and LR-HPV infection rate was 3．38%（247／7 318）．HPV16 accounts for 28．59%（415／1 452）of HR-HPV，and is considered to be the main pathogenic subtype，while it accounts for 6．30%（98／1 452）of LR-HPV．Among the 1 452 HPV-infection samples，single-infection accounts for 81．82%（1 188／1 452）and multi-infection for 18．18%（264／1 452）．The patients of≥50 years accounts for 24．24%，with the highest infection rate．Of all the patients tests，those from Longnan showed the highest infection-rate，which acounts for 30．97%（83／268）．Conclusion：Gansu has been the area with high-incidence of HPV infection with HPV16 as the highest subtype．It is a top priority to check and screen for cervical cancer in the females of this area．The present results could be a guidance to clinical therapy and prevent of the disease．

HPV；Cape Flow-through hybridization and gene chip technology；Gansu

R730．26，R737．33

A

1000－9965（2015）01－0040－06

10．11778／j．jdxb．2015．01．007

2014－06－03

国家自然科学基金青年项目（81202959）；中央高校基本科研业务专项资金（lzujbky－2013－m04）

杜 宏（1985－），女，研究方向：辅助生殖医学

王 芳（1973－），女，博士，主任医师，硕士生导师，Mobile：13919302888；E-mail：wangfang4323＠126．com