猪O型口蹄疫不同疫苗免疫抗体消长规律研究

陈能桥，赵福葳，毛以智，朱大举，李红艳，冉 浴

（1.贵州省遵义市动物疫病预防控制中心，贵州 遵义 563000；2.遵义市绥阳县动物疫病预防控制中心，遵义 绥阳 563300）

猪O型口蹄疫不同疫苗免疫抗体消长规律研究

陈能桥1，赵福葳1，毛以智1，朱大举2，李红艳2，冉 浴2

（1.贵州省遵义市动物疫病预防控制中心，贵州 遵义 563000；2.遵义市绥阳县动物疫病预防控制中心，遵义 绥阳 563300）

本试验随机筛选出90头口蹄疫母源抗体为阴性的53～73日龄仔猪为试验动物，平均分成A、B、C3组，分别注射猪口蹄疫O型灭活疫苗2 mL、4 mL和合成肽疫苗1 mL，进行免疫后不同时段的免疫抗体跟踪监测，探索猪口蹄疫O型不同疫苗和灭活疫苗不同免疫剂量免疫后免疫抗体的消长规律。结果表明：A、B、C组的群体保护率都较好，其中C组的群体保护率稳定时间长，未见免疫副反应，效果最好。

口蹄疫疫苗；猪；抗体消长；规律

猪O型口蹄疫是由O型口蹄疫病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，该病传播迅速，发病率高，是世界动物卫生组织（OIE）规定必须报告的传染病之一，我国将其列为一类动物疫病[1-2]。长期以来，使用猪O型口蹄疫疫苗免疫接种是我国预防本病的重要措施[3-5]。为科学制定猪O型口蹄疫的免疫程序，合理使用猪口蹄疫O型灭活疫苗和合成肽疫苗，于2014年在我市绥阳县某种猪场，随机筛选90头53～73日龄仔猪分组进行猪口蹄疫O型灭活疫苗和合成肽疫苗及猪口蹄疫O型灭活疫苗不同剂量免疫后副反应调查、免疫抗体水平和抗体维持时间等相关工作的研究。

1 材料与方法

1．1 试验动物

随机选择53～73日龄的仔猪若干头，无菌前腔静脉采血分离血清，用酶联免疫吸附试验检测口蹄疫母源抗体，筛选母源抗体阴性的仔猪90头为试验动物。将90头仔猪随机分成A、B、C 3组，每组30头，对每头仔猪进行编号。

1．2 试验疫苗

上海某生物医药有限公司生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2570+7309）；兰州某生物科技股份有限公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗（O/ MYA98/BY2010株）。

1．3 检测试剂

A组和B组用猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法），郑州中道生物技术有限公司生产。C组用O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒，武汉科前生物制品有限责任公司生产。

1．4 免疫剂量A组每头仔猪耳根后肌肉注射猪口蹄疫O型灭活疫苗2 mL；B组每头仔猪耳根后肌肉注射猪口蹄疫O型灭活疫苗4 mL；C组每头仔猪耳根后肌肉深层注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗1 mL。

1．5 免疫副反应调查

免疫后72 h内细心观察试验仔猪是否出现采食减少、体温升高甚至死亡等免疫副反应。

1．6 采血时间

分别于免疫后第7 d、15 d、30 d、45 d、60 d、90 d、120 d、150 d和180 d，进行无菌前腔静脉采血并分离血清，4 ℃保存，次日检测。

1．7 抗体检测

酶联免疫吸附试验。按检测试剂盒使用说明书操作、判定。A组和B组：样品OD450nm值≥Cut Off值时判为阳性；样品OD450nm值＜Cut Off值时判为阴性；C组：样品OD630nm值≥0．4时判为阳性；样品OD630nm值＜0．4时判为阴性。

2 结果与分析

1)免疫副反应调查结果见表1和图1，本试验共有28头猪出现了不同程度的免疫副反应，表现为精神沉郁、体温升高、呕吐和腹泻，其中A组6头，B组22头，C组未见免疫副反应，28头猪均在72 h内自愈。

2)各组免疫后不同时间抗体的检测结果见表2、图2和图3。整个试验过程因其他原因导致6头猪死亡， 其中A组2头，即 45 d和150 d各死亡1头；B组于45 d死亡1头；C组3头，即15 d死亡1头、45 d死亡2头。从表2、图2和图3可知， A组7 d时免疫抗体阳性率即群体保护率为20．00%，15～150 d群体保护率均＞70%； B组和C组免疫第7天时群体保护率分 别 为 76．67%、73．33%，150 d时3组的群体保护率分别为71．43%、75．86%和77．78%。3个试验组免疫后150 d猪的群体保护率均达到农业部规定≥70%的标准。由表2知，接种猪口蹄疫O型灭活疫苗2 mL后，15～150 d免疫猪群体的群体保护率＞70%，所以生产中遵照疫苗使用说明书规范操作，就可获得较好的免疫效果。

表1 免疫猪群副反应调查结果

图1 免疫猪群副反应调查结果

表2 不同时间免疫抗体检测结果

3 结论与讨论

1）接种猪口蹄疫O型灭活疫苗72 h内，试验猪出现免疫副反应的头数是：A组6头，B组22头，分别为免疫数的20．00%和73．33%（6/30、22/30）。由此可知，生产实践中不应随意加大免疫剂量，避免对动物机体造成伤害。免疫后150 d，3个试验组群体保护率分别为71．42%、75．86%和77．77%；到180 d时，C组（合成肽组）的群体保护率为22．22%，A、B 2组因试验猪销售未能检测，根据120～150 d A、B 2组抗体OD值下降的幅度可以看出，180 d时这2组猪的群体保护率都将低于70%。由此可知，接种猪口蹄疫O型灭活疫苗和猪口蹄疫O型合成肽疫苗后的群体有效保护期（免疫期）为150 d左右（图3）。

2)对猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体消长变化的研究表明，猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫一次，即可确保高效价抗体维持至150 d。猪口蹄疫O型合成肽疫苗具备免疫原性高，生物安全性好，免疫副反应小等优点，在生产实践中值得普及推广。由于有1头猪接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后（B组，4 mL），7～150 d的检测结果均为阴性，表明该头猪未产生免疫抗体，其原因是否为加倍剂量免疫导致免疫不应答（免疫耐受）有待进一步探讨。

3)在本试验中，B组即加倍剂量注射猪口蹄疫O型灭活疫苗后，猪群提前7 d达到群体保护水平，但免疫副反应也随之大幅度增加(为免疫数的73．33%)，主要表现为体温升高、精神沉郁呕吐和腹泻，因此只有在紧急免疫情况下，才建议使用该种免疫方法进行免疫。C组即接种口蹄疫O型合成肽疫苗后，未见猪群出现以上副反应；通过表2、图2和图3可知，接种口蹄疫O型合成肽疫苗后猪群的群体保护率均较好，且抗体水平和群体保护率的时间较稳定，说明接种该疫苗效果最好。

图2 免疫猪群O型口蹄疫抗体动态检测OD值

图3 免疫后不同时间群体保护率

[1] 谢庆阁．口蹄疫[M]．北京：中国农业出版社，2004：16-27．

[2] 易悦，王利娜，徐志文，等．猪口蹄疫疫苗的研究进展及其应用[J]．猪业科学，2011，28（2）：44-48．

[3] 周小红．猪口蹄疫免疫抗体合格率影响因素研究[J]．北京农业，2012(12)：21-22．

[4] 钟小艳，凌洪权，黎朝燕．猪口蹄疫免疫抗体检测方法比较[J]．中国畜牧兽医文摘，2011，27(6)：50-51．

[5] Sellers R， Gloster J． Footandmouth disease： A review of intranasal infection of cattle，sheep and pigs[J]．The Veterinary Journal，2008，177(2)：159-168．

2015-07-24）

省市科技合作专项资金项目，合同号：[省市科合（2013）35号]

赵福葳，女（1963-），贵州遵义人，大学学历，高级兽医师，主要从事动物疫病防控及畜牧兽医技术推广工作，E-mail:1148638815@qq.com