载脂蛋白A5（ApoA5）基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究

洪 雁 周碧燕 李 洁 梁 智 张 千

广西南宁市第一人民医院神经内科 南宁 530022

载脂蛋白A5（ApoA5）基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究

洪 雁 周碧燕 李 洁 梁 智 张 千

广西南宁市第一人民医院神经内科 南宁 530022

目的 研究脑梗死患者的动脉粥样硬化程度和载脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T两位点的关系。方法 选取2011-12—2013-12间我院医学影像科计算机体层扫描和磁共振确诊的脑梗死患者156例，分析其颈总动脉（CCA）和颈内动脉（ICA）内膜厚度（IMT）与载脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T两位点关系。结果 在-1131T/C位点基因型中，CC患者颈总动脉内膜为（1.12±0.27）mm，TT+TC患者为（1.07±0.12）mm，差异无统计学意义（P＞0.05）。CC患者颈内动脉内膜为（1.04±0.15）mm，TT+TC患者为（0.92±0.17）mm，差异有统计学意义（P＜0.05）；另外，在553G/T位点基因型中，GG患者颈总动脉内膜为（1.06±0.19）mm，TT+GT患者为（1.15±0.16）mm，差异有统计学意义（P＜0.05）；GG患者颈内动脉内膜为（0.94±0.15）mm，TT+GT患者为（0.97±0.21）mm，差异无统计学意义（P＞0.05）。对2组不同基因组的不同基因型患者进行相关血脂水平鉴定，发现-1131T/C位点基因型的两种不同基因型的TG水平差异有统计学意义（P＜0.05），其余基因型相比差异均无统计学意义（P＞0.05）。对载脂蛋白A5（ApoA5）基因的常见单倍体配型不同的患者进行CCA IMT和ICA IMT的测量发现，4组基因型中ICA IMT差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 载脂蛋白A5（ApoA5）基因对动脉粥样硬化脑梗死关系相对较大，值得进一步研究。

脑梗死又称缺血性脑卒中，是指局部脑组织因血液循环障碍，缺血、缺氧而发生的软化坏死［1］。脑梗死的危害极大，由于栓子堵塞脑血管，造成大脑局部坏死，从而导致患者的行动、语言、视力等障碍，甚至日常生活不能自理，造成极大危害。近年来，分子生物学不断发展，科学家们发现部分脑梗死患者的颈内动脉和颈总动脉内膜都发生不同程度增厚，另外发现，载脂蛋白A5（ApoA5）与动脉粥样硬化关系极大［23］。ApoA5是一种有力的甘油三酯调节子，而甘油三酯恰恰是升高动脉粥样硬化的独立危险因素，近年来国内和国外都已经开展此基因和动脉粥样硬化相关临床试验，我院为了更好的明确脑梗死和ApoA5间的关系，特开展本试验，并取得一定成果，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 临床资料 选取2011-12—2013-12我院医学影像科计算机体层扫描和磁共振共确诊的脑梗死患者156例，男92例，女64例。

1.2 研究方法

1.2.1 动脉粥样硬化的评价：我院超声科对患者的颈内动脉和颈总动脉进行内膜厚度评价，得到每位患者内膜厚度。1.2.2 基因组DNA提取：采集EDTA-K2抗凝静脉血1 mL，提取基因组NA，并于-20°保存备用。

1.2.3 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP）：按参考文献设计下述2对引物，-1131T/C位点P1：5c-GATTGAT-TCAAGATGCATTTAGGA-3c，P2：5c-CCC CAG-GAACTGGAGCGAAATT-3c；553G/T位点P1：5c-CA GCAACTGAAGCCCTACACG-3c，P2：5c-ATGC-CGCTCA CCAGGCTCTCG-3c。PCR反应条件，-1131T/C位点：96e2 min，95e30s，56e30s，72e30s，循环30次，末次循环后72e延伸5min；553G/T位点：95e5min，95e30s，65e40s，72e50s，循环35次，末次循环后72e延伸7min。PCR扩增产物10 LL分别加入限制性内切酶MseI5U（-1131T/C位点）和MspI5U（553G/T位点），37e消化4h。酶切产物经含溴化乙锭的20g/L琼脂糖电泳分离，经紫外凝胶成像系统分析结果。并随机挑选部分PCR产物送上海生物工程公司测序。

1.3 统计学方法 所有资料均用SPSS 13.0软件包进行分析。计量资料用±s表示，基因型分布经Hardy-Weinberg平衡检验，不符合正态分布的指标经对数转换达到近似正态分布后进行数据分析，组间计量数据比较采用t检验或单因素方差分析；应用基于最大期望值算法的SNP Alyze V6.0软件构建2多态性位点的个体单倍型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑梗死患者不同基因型间的CCA IMT和ICA IMT的比较 由表1可看出，在-1131T/C位点基因型中，CC患者占10.26％，TT+TC患者占89.74％，其中CC患者颈总动脉内膜为（1.12±0.27）mm，TT+TC患者颈总动脉内膜为（1.07±0.12）mm，差异无统计学意义（P＞0.05）。CC患者颈内动脉内膜为（1.04±0.15）mm，TT+TC患者为（0.92±0.17）mm，差异有统计学意义（P＜0.05）；另外在553G/T位点基因型中，GG患者颈总动脉内膜为（1.06±0.19）mm，TT+GT患者为（1.15±0.16）mm，差异有统计学意义（P＜0.05）；GG患者为（0.94±0.15）mm，TT+GT患者为（0.97 ±0.21）mm，差异无统计学意义（P＞0.05）。以上结果表明，-1131CC基因型和-1131TT+TC基因型对ICA IMT有一定影响，-1131CC基因型能诱导颈内动脉内膜变厚，553GG基因型和553TT+GT基因型对人群的CCA IMT有一定影响，553TT+GT基因型能诱导患者颈总动脉内膜变厚。

表1 脑梗死患者不同基因型间的CCA IMT和ICA IMT的比较（±s）

表1 脑梗死患者不同基因型间的CCA IMT和ICA IMT的比较（±s）

注：与对照组相比，＊P＜0.05

基因型 -1131T/C 位点基因型 553G/T 位点基因型CC TT+TC t/χ2值 P值 GG TT+GT t/χ2值 P值n 16（10.26） 140（89.74）197.28 0.000 132（84.26） 24（15.74）140.53 0.000 CCA IMT（mm）1.12±0.27 1.07±0.12 1.336 0.183 1.06±0.19 1.15±0.16 2.1825 0.0306 ICA IMT（mm）1.04±0.15 0.92±0.17 2.074 0.007 0.94±0.15 0.97±0.21 0.843 0.4006

2.2 脑梗死不同基因型间血脂水平对比 对2组不同基因组的不同基因型患者进行相关血脂水平鉴定，发现-1131T/C位点基因型的两种不同基因型的TG水平差异有统计学意义（P＜0.05），其余基因型相比差异均无统计学意义（P＞0.05），说明-1131T/C位点基因型的差异会导致人体内TG水平有差异，从而导致患者动脉粥样硬化几率的差异。见表2、3。

2.3 常见单倍型配对间CCA IMT和ICA IMT的比较 对载脂蛋白A5（ApoA5）基因的常见单倍体配型不同的患者进行CCA IMT和ICA IMT的测量发现，4组基因型中ICA IMT差异有统计学意义（P＜0.05），说明不同的基因型对颈内动脉内膜厚度影响较大。见表4。

表2 553G/T位点基因型不同位点患者血脂水平（±s）

表2 553G/T位点基因型不同位点患者血脂水平（±s）

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C GG 132 4.18±0.12 1.68±0.26 1.12±0.04 2.46±0.16 TT+GT 24 4.19±0.18 1.57±0.59 1.13±0.11 2.40±0.14 t值-0.3447 1.498 0.801 1.720 P值-0.7308 0.1362 0.425 0.087

表3 -1131T/C位点基因型不同位点患者血脂水平（±s）

表3 -1131T/C位点基因型不同位点患者血脂水平（±s）

注：与对照组相比，＊P＜0.05

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C CC 16 4.17±0.14 2.18±0.15 1.04±0.12 2.26±0.13 TT+TC 140 4.18±0.16 1.72±0.27 1.05±0.13 2.27±0.14 t值-0.2395 6.684 0.2936 0.2725 P值-0.811 0.000 0.7695 0.786

表4 常见单倍型配对间CCA IMT和ICA IMT的比较（±s）

表4 常见单倍型配对间CCA IMT和ICA IMT的比较（±s）

注：与对照组相比，＊P＜0.05

基因型 单倍型配对 F值P值TG-TG TG-CG TG-CT CG-CG n 73 59 11 13 - -CCA IMT（mm）1.04±0.19 1.02±0.05 1.05±0.11 1.09±0.09 1.192 0.089 ICA IMT（mm）0.98±0.12 0.99±0.19 1.07±0.11 1.12±0.05 3.147 0.016

3 讨论

2001年2个不同的研究小组先后在载脂蛋白A1/C3/A4基因簇鉴定出一个新的载脂蛋白基因apoA5基因，人类ApoA5同小鼠ApoA5基因同源性达71％，而与人类载脂蛋白4基因同源性达27％［4］。在动物实验和人类的观察研究中均发现，其与血脂尤其是TG的代谢密切相关，因而迅速受到广泛关注。有研究表明，人ApoA5是由343个氨基酸残基组成的单链多肽，其相对分子质量约为39 000，等电点为5.9，其结构具有多个双性A-螺旋结构，也有B折叠和B转角。与其他载脂蛋白家庭成员相似，作为ApoA5活性中心的几个A-螺旋结构由22或11个氨基酸组成的重复短串连接，他们在疏水性和长度上都存在相当大的差异［5］。OcBrien等用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测健康人血浆中ApoA5，其含量为24～406Lg/L［6］。对脂蛋白微粒进行检测，发现ApoA5存在于极低密度脂蛋白（VLDL）、高密度脂蛋白（HDL）和乳糜微粒（CM）中。有人认为，ApoA5作为调节富含TG脂蛋白代谢过程中的一个关键的激活剂，可能存在一个循环再利用的机制来弥补其外周循环含量的不足［7］。

经过研究表明，1131CC基因型和-1131TT+TC基因型对ICA IMT有一定影响，-1131CC基因型能诱导颈内动脉内膜变厚，553GG基因型和553TT+GT基因型对人群的CCA IMT有一定影响，553TT+GT基因型能诱导患者颈总动脉内膜变厚，这一结论也符合曹岩岩等人的报道［8］。这可能与患者基因表达蛋白质有所不同，-1131CC基因型表达出的蛋白质能促进血脂在颈内动脉内膜沉积，553TT+GT基因型所表达的蛋白能促进血脂在颈总动脉沉积［9］。如果在彩超的诊断下发现颈总动脉和颈内动脉增厚，可进行基因诊断，从而做到对脑梗死的高度重视和预防［10］。另外，我们发现-1131T/C位点基因型的差异会导致人体内TG水平有差异，与陈玉兰等［11］报道一致，在诊断和预防方面也有重大意义，最后试验研究了不同单倍体间，颈总动脉内膜和颈内动脉内膜的差异，4组基因型中ICA IMT具有差异［12］，也为分子生物学的研究和疾病的分子诊断提供了重要意义。

综上所述，研究载脂蛋白A5（ApoA5）基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系意义重大，值得进一步研究。

［1］肖慧，谷文萍，梁静，等.白细胞介素6基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系［J］.中国神经精神疾病杂志，2011，37（1）：11-14.

［2］金磊，高月求，葛海良.白细胞介素基因多态性与脑梗死的关系［J］.诊断学理论与实践，2011，10（2）：179-181.

［3］袁山，马依彤.载脂蛋白A5基因多态性与甘油三酯及动脉粥样硬化性疾病的关系［J］.中华老年多器官疾病杂志，2011，10（5）：465-468.

［4］Tsianos EV，Katsanos KH，Tsianos VE.Role of genetics in the diagnosis and prognosis of Crohn＇s disease［J］.World J Gastroenterol，2012，18（2）：105-118.

［5］王锐，张俊和，陈立杰，等.NF-κB1基因启动子-94ins/del ATTG的基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系［J］.中国神经免疫学和神经病学杂志，2012，19（3）：231-233.

［6］Zhang LX，Sun Y，Liang Y，et al.Relationship between dyslipidemia and gene polymorphism in Tibetan population［J］.Biomed Environ Sci，2012，25（3）：305-310.

［7］Jiang ZG，Robson SC，Yao Z.Lipoprotein metabolism in nonalcoholic fatty liver disease［J］.J Biomed Res，2013，27（1）：1-13.

［8］曹岩岩，崔广林，王浩然，等.载脂蛋白A5-1131T＞C（rs662799）多态性与中国汉族非心源性缺血性脑卒中的关联研究［J］.中国分子心脏病学杂志，2012，12（6）：356-359.

［9］邱壮丽，符家武.广东汉族人群缝隙连接蛋白37基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系［J］.中风与神经疾病杂志，2013，30（6）：524-527.

［10］张晋霞，张志勇，刘斌，等.基质金属蛋白酶-1基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死相关性研究［J］.检验医学与临床，2013，10（12）：1 491-1 492.

［11］陈玉兰，吴俊霞.脂蛋白酯酶基因Ser447Ter多态性与缺血性脑卒中关系的Meta分析［J］.现代预防医学，2013，38（17）：3 145-3 149.

［12］秦英楠，李向平.载脂蛋白A5对甘油三酯代谢的影响及其机制［J］.中国动脉硬化杂志，2010，18（6）：495-498.

（2014-07-21）

R743.33

A

1673-5110（2015）10-0044-03

广西南宁市科学研究与技术开发计划项目（20123131）

【关键词】脑梗死；动脉粥样硬化；基因多态性；载脂蛋白A5