PLXNC1多态性与广西肝癌遗传易感的关系及其表达*

2015-12-20何承诚谢裕安毛赛兰黄正闫雷赵瑞强

中国肿瘤临床 2015年13期

何承诚谢裕安毛赛兰黄正闫雷赵瑞强

·临床研究与应用·

何承诚谢裕安毛赛兰黄正闫雷赵瑞强

目的：探讨PLXNC1基因多态性与广西肝癌遗传易感性关系及表达。方法：以广西20个肝癌高发家族（肝癌家族组79例）和10个健康对照家族（健康对照组40例）为研究对象，应用飞行时间质谱技术检测两组中PLXNC1基因rs2272335的基因型及等位基因频率，免疫组织化学染色检测PLXNC1在不同肝组织中的表达。结果：PLXNC1基因rs2272335位点健康对照组人群中携带C等位基因型的个体发生干细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的风险分别是T等位基因型个体的4.16倍（95%CI为0.37～47.3），差异有统计学意义（P=0.032）。核心成员组与肝癌患者组两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。PLXNC1基因rs2272335位点基因型TT、TC、CC在肝癌患者组人群、核心成员组人群、健康对照组人群三组间者差异无统计学意义（P＞0.05）。肝癌组织中，PLXNC1蛋白表达水平3.12±1.12显著高于肝癌癌旁组织1.54±0.67和正常肝组织1.23±0.87（P＜0.05）。结论：PLXNC1基因rs2272335位点C等位基因型可能是广西HCC发生的危险因素。PLXNC1过度表达与肝癌发生密切相关。

肝肿瘤 PLXNC1基因单核苷酸多态性遗传易感性表达

原发性肝癌（primary liver cancer，PLC），简称肝癌）是我国最常见的恶性肿瘤之一。广西扶绥县是我国肝癌高发区之一，2006年至2008年肝癌发病率为67.26/10万［1］，肝癌占全部恶性肿瘤的57.01%，居恶性肿瘤的首位［2］。肝癌的发病具有明显的家族聚集倾向，遗传因素在家族聚集性肝癌中具有重要作用［3］。目前有关肝癌基因多态性与广西扶绥肝癌家族遗传易感性的研究已有部分报道［4］。PLXNC1基因位于第12染色体12q23上，属于PLEXIN家族成员，其表达的PLXNC1蛋白（又称为丛蛋白C1）主要构成是一种大分子的跨膜蛋白，主要功能是作为（semaphorins 7A，SEMA7A）受体参与细胞的黏附和转移［5］。目前研究发现PLXNC1（NM-005761.1）在黑色素瘤和胰腺癌中都有拷贝数改变，在胰腺癌中有两个突变缺失（c.1475 A＞T，p.N 492I与c.2554G＞A，p.E852K），并认为PLXNC1与黑色素瘤和胰腺癌发生发展密切相关［6］。王云等［7］研究发现PLXNC1基因与肝癌的发生发展密切相关，PLXNC1基因多态性在肝癌方面的研究鲜见报道。本研究以广西扶绥肝癌高发家族为研究对象，探讨PLXNC1基因多态性与广西肝癌家遗传易感性关系。采用免疫组织化学方法检测PLXNC1蛋白在散发肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织间表达水平差异，探讨其在肝癌发生的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 基因多态性检验肝癌高发家族（简称“肝癌家族”）是指在先证者的血缘直属亲属中，至少有1例或1例以上的肝癌患者，要求所有肝癌患者均分布在三代之内（含先证者）的家族。健康对照家族组是指扶绥当地与肝癌高发家族居住在同一个村庄，无血缘关系的家族。

本研究以20个肝癌家族（肝癌家族组79例）和10个对照家族（健康对照40例）为研究对象，均为广西扶绥县壮族人群。肝癌家族组由肝癌患者（简称肝癌患者组）及其有血缘关系的直系亲属（简称核心成员组）组成，其中肝癌患者为2003年1月至2011年10月在广西医科大学附属肿瘤医院进行外科手术的患者，术后经病理检查确诊，术前未经放疗、化疗或生物治疗，均经病史采集显示其直系亲属中至少已有1人确诊为肝癌。肝癌家族组79例中男性45例，女性34例，中位年龄44（16～86）岁；HBsAg（+）50例，HBsAg（-）29例；AFP（+）14例，AFP（-）65例；吸烟17例，不吸烟（＜10支/日）60例；饮酒64例，不饮酒（＜100 g/日）12例。

健康对照家族组（简称健康对照组）选自在当地县肿瘤医院进行健康体检的家系人群，体检结果均正常。无肝炎病史、肿瘤病史及遗传病史。40例中男性26例，女性14例，中位年龄47（16～85）岁。吸烟15例，不吸烟（＜10支/日）25例；饮酒17例，不饮酒（＜100 g/日）23例。肝癌患者直系亲属（59例）及正常对照组（40例）均经知情同意后采集晨起空腹静脉血液5 mL。按照国家人类基因组研究伦理学准则进行，所有入选者均知情并同意参加本研究。两组间研究对象的年龄、性别比无明显差异，具可比性。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（北京天根生物科技有限公司），IlexR Gold Reagent Kit试剂盒、MassARRY Assay De⁃signer 3.1 software、MassARRAY Samsung Nanodis⁃penserRS1000点样仪、MassARRAY Analyzer Compact质谱系统（美国Sequenom公司），PCR扩增引物、单碱基延伸引物（深圳华大基因公司）。PLXNC1山羊单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）；即用型SP免疫组织化学染色试剂盒（福州迈新生物有限公司）。

1.2.2 免疫组织化学染色检验 50例肝癌组织癌旁组织标本取自广西医科大学附属肿瘤医院2011年1月至2013年12月期间经手术治疗的HCC患者，其中男性41例，女性9例，年龄30～75岁，中位年龄47岁。病理类型均为肝细胞癌，所有正常肝组织标本取自广西壮族自治区人民医院病理科，选择相同时间段肝组织正常黏膜切片40例作为正常对照组，其中男性32例，女性8例，年龄35～70岁，中位年龄为46岁。所选择的HCC病例均经外科手术治疗，并经过术后病理证实。所有HCC病例均无其他严重内科疾病或伴发其他恶性肿瘤，若合并其他部位转移者予以剔除。

1.2.3 SNP功能位点筛选利用互联网开放的数据库，从国际人类基因组单体型图计划（International HapMap Consortium）HapMap数据库（http：//hapmap. ncbi.nlm.nih.gov/）下载PLXNC1基因的所有SNPs的基因分型数据。

利用Haplo View程序（http：//www.broadinstitute.org/ scientific community/science/programs/medical- andpopulation-genetics/haploview/haploview）进行详细的分析。利用SNPs功能预测网站（http：//manticore. niehs.nih.gov/snpfunc.htm）挑选PLXNC1基因功能位点rs2272335作为研究靶点。

1.2.4 DNA提取实验分析PLXNC1基因型的基因组DNA，是北京天根生化科技有限公司生产试剂盒，提取从手术切除的癌组织（20例）标本的DNA。采用血液DNA提取试剂盒提取肝癌患者直系亲属（59例）及正常对照组（40例）静脉血液标本的DNA，经分光光度计定量，OD值为1.7～2.1认定DNA纯度合格。将质检合格的DNA浓度调整到50 μg/μL，置于-20℃冰箱保存备用。

1.2.5 基因型分析深圳华大基因公司的SEQUE⁃NOM实验平台，采用美国SEQUENOM Mass ARRAY时间飞行质谱技术分析所有研究对象DNA的SNP的基因分型，以TYPER 4.0软件分析实验结果，获得分型数据。

1.2.6 引物设计及合成引物设计应用美国Seque⁃nom公司AssayDesigner 3.1 software设计并经深圳华大基因公司合成，每个SNP位点对应两条PCR扩增引物和一条延伸引物。PCR上游引物为5’-GCTTCT ATATGTGGTGTCTTCTTA-3’，下游引物为5’-GCCTT CTATATGTGGTGTCTTCTTG-3’，延伸引物为5’-GC CTTCTATATGTGGTGTCTTCTT-3’，引物均由深圳华大基因公司合成。

1.2.7 PCR扩增及芯片点样使用热启动Taq酶（美国Agena Bioscience公司），在384孔板上，常规扩增待测片段（40个循环），然后在PCR产物中加入2 μL碱性酸化酶SAP（美国SEQUENOM）消化液（双蒸水1.53 μL，hME缓冲液0.17 μL，SAP 0.474 μL），以除去未用尽dNTP，消化反应（37℃60 min；85℃10 min）。然后根据SEQUENOM程序进行引物延伸反应和延伸产物纯化反应，用纳升点样仪（美国MassARRAY Samsung NanodispenserRS1000 SEQUENOM）将纯化后的产物分点在质谱微阵列芯片SpectroCHIP上（美国Agena Bioscience）［8］。

1.2.8 飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）检测SNP位点采用Sequenom Massarray平台对Rac 1基因进行SNP分型，TYPER 4.0软件分析实验结果，获得分型数据。根据引物延伸反应产物质谱峰的位置确定其分子质量，从而得出SNP基因分型结果；同一种颜色可以对应2个或3个峰值，分别为SNP位点的延伸引物峰及两个等位基因峰，若该位点属于纯合子，则仅存在1个等位基因峰，若为杂合子，则存在2个等位基因峰［8］。

1.2.9 免疫组织化学检测及判定标准 PLXNC1蛋白表达阳性染色主要定位于细胞边缘以及质膜下的细胞质内，呈棕黄色颗粒状。在400倍镜下根据肝细胞边缘或肿瘤细胞胞浆染色程度进行分析评分。染色程度可分为4级：染色与阴性对照相同者计0分；染色呈淡黄色者（弱阳性者）计1分；染色呈较深褐色者（中等阳性）计2分；染色呈较深褐色者（强阳性）计3分。依照阳性细胞范围可分为：无阳性细胞数计0分；0%～10%计1分；11%～50%计2分；51%～75%计3分；＞75%计4分。染色指数（STAINING INDEX，SI）=染色阳性比例评分+染色强度评分。最后以SI评定PLXNC1蛋白表达水平。

1.3 统计学方法

应用SPSS 21.0统计软件对数据进行统计学分析。以χ2检验比较两组年龄、性别、基因型和等位基因分布频率的差异。采用拟合优度χ2检验法进行对照组基因型分布的Hardy-Weinberg遗传平衡检验，判断研究对象是否具有人群代表性。用χ2检验和非条件Logistic回归分析法计算比值比（OR）及95%可信区间（95%CI）。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基因型检测结果

本研究119例样体基因分型的检测结果显示PLXNC1基因rs2272335位点存在TT、TC、CC三种基因型，其中TT基因型106例、TC基因型11例、CC基因型2例（图1）。

图1 PLXNC1（rs2272335）SNP位点基因型分型图Figure 1 Map of PLXNC1（rs2272335）SNP Genotype

2.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

为了检验PLXNC1基因rs2272335位点基因型的频率是否遵循遗传平衡定律，在健康对照组中进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验。结果表明，基因型频率的观察值与期望值之间的差异无统计学意义（P＞0.05），提示其PLXNC1基因rs2272335位点基因型频率符合遗传平衡，具有广西壮族人群代表性（表1）。

2.3 PLXNC1基因rs2272335位点多态性与广西肝癌家族聚集遗传易性的关系

肝癌家族组PLXNC1基因rs2272335位点等位基因T与C在肝癌家族肝癌患者组中的分布频率分别为95%和5%，在肝癌家族核心成员组中的分布频率分别为89.83%和10.17%。在健康对照家族组中的分布频率分别为98.75%和1.25%。PLXNC1基因rs2272335位点健康对照组人群中携带C等位基因型的个体发生HCC的风险分别是T等位基因型个体的4.16倍（95%CI为0.37～47.3），差异有统计学意义（P=0.032）。肝癌家族核心成员组与肝癌家族肝癌患者组两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

PLXNC1基因rs2272335位点肝癌患者组中TT、TC、CC基因型分布频率分别为90%、10%、0。核心成员组中TT、TC、CC基因型分布频率分别为83.05%、 13.56%、3.39%。健康对照家族组中TT、TC、CC基因型分布频率分别为97.5%、2.5%、0。家族核心成员组人群中携带TC基因型的个体发生HCC的风险分别是TT基因型个体的0.68倍（95%CI为0.13～3.52），但差异无统计学意义。健康对照家族组人群中携带TC基因型的个体发生HCC的风险分别是TT基因型个体的4.3倍（95%CI为0.37～50.95），但差异无统计学意义（表2）。

2.4 PLXNC1蛋白在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中表达

PLXNC1蛋白阳性染色主要定位于细胞边缘以及质膜下的胞质内，呈棕黄色颗粒状。免疫组织化学结果表明PLXNC1在肝癌组织中呈中度阳性反应，癌旁组织中呈弱阳性反应，正常肝组织中呈阴性反应（图2）。

肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中PLXNC1蛋白表达水平（SI）分别为3.12±1.12、1.54±0.67和1.23± 0.87。三组间PLXNC1表达水平经ANOVA检验，有显著性差异（P＜0.05）。两两比较显示，肝癌组织中PLXNC1蛋白表达水平显著高于肝癌癌旁组织和正常肝组织（P＜0.01）；肝癌癌旁组织中PLXNC1蛋白表达水平高于正常肝组织蛋白表达，但差异无统计学意义（P=0.067，表3）。

表1 PLXNC1基因rs2272335位点基因型Hardy-Weinberg遗传平衡检验例Figure 1 Hardy-Weinberg equilibrium test for genotype frequencies of PLXNC1 gene（rs2272335） n

表2 PLXNC1基因rs2272335位点多态性基因型与肝癌易感性的关系例Figure 2 Risk evaluation of the PLXNC1(rs2272335)genotype on HCC development n

▶图2 PLXNC1在肝癌组织，癌旁组织和正常肝组织中的表达（S-P×400）Figure 2 PLXNC1 protein ex⁃pression in different liver tissues（S-P×400）

表3 PLXNC1蛋白在各种肝组织中的表达水平的比较Figure 3 Comparison of PLXNC1 protein expression among different liver tissues

3 讨论

研究表明单核苷酸多态性（SNP）在人群中发生频率＞1%，可能会造成携带者对疾病易感性的改变［9-11］。目前研究发现PLXNC1（NM_005761.1）在黑色素瘤和胰腺癌中都有拷贝数改变，在胰腺癌中有两个突变缺失（c.1475 A＞T，p.N 492I与c.2554G＞A，p.E852K）［6］。这些均提示PLXNC1基因位点多态性与肝癌发生显著相关。

在肝癌发生的多阶段过程中，基因多态性可影响肝癌发生的易感性，对其进行筛查、鉴别有助于预测肝癌高危人群［12-13］，肿瘤标志物有助于提高肝癌的生存率和临床治疗效果［14］。回顾以往的文献，未发现PLXNC1基因rs2272335位点的研究，关于PLXNC1基因rs2272335位点与肝癌遗传易感性的研究也属首次。本研究首次探讨了PLXNC1基因rs2272335位点多态性与广西扶绥县壮族人群中肝癌家族的聚集的遗传易感性的关系。研究结果显示与肝癌家族肝癌患者比较，正常健康对照人群中携带C等位基因型的个体发生HCC的风险分别是T等位基因型个体的4.16倍（95%CI为0.37～47.3），差异具有统计学意义（P=0.032）。以上结果表明PLXNC1基因rs2272335位点等位基因C是HCC发生的危险因素。PLXNC1基因rs2272335位点位于RNA的转录剪接体（NM_ 005761.2）位置上，此研究结果与前人研究发现PLXNC1（NM_005761.1）在黑色素瘤和胰腺癌中有拷贝数改变结果相似［6］。

本研究发现，PLXNC1蛋白主要定位于细胞边缘以及质膜下的细胞质内，呈棕黄色颗粒状。这与以前的研究相似［15］，PLXNC1蛋白位于细胞质膜的部位与其同信号分子相结合，符合其功能性多分子复合物组织者的定位。本研究检测到PLXNC1蛋白在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中的表达水平呈递减趋势。肝癌组织中PLXNC1蛋白表达显著高于癌旁组织和正常肝组织（P＜0.01），与以往认为PLXNC1蛋白在黑色瘤中低表达不一致［16-17］。肝癌组织中PLXNC1蛋白表达高于正常肝组织，说明PLXNC1蛋白在肝细胞转化或癌变的早期阶段即有表达水平的增加。PLXNC1蛋白在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中的表达呈递减趋势，提示PLXNC1过度表达是肝癌形成及进展密切相关的早期分子事件，即PLXNC1过度表达与肝癌发生密切相关。这验证了PLXNC1基因位点多态性与广西肝癌遗传感性可能显著相关。

因本研究收集的病例数较少，且健康对照数也偏少，因此，需扩大样本数量进一步深入探讨。PLXNC1多态性研究局限于广西扶绥县的壮族人群，故仍需进一步扩大样本例数，在不同地域、不同人群中加以研究。

综上所述，本研究初步探讨了PLXNC1基因rs2272335位点多态性与广西扶绥壮族肝癌家族聚集的遗传易感性关系，结果发现PLXNC1基因rs2272335位点C等位基因型可能是广西扶绥家族聚集性肝癌发生的危险因素，PLXNC1过度表达与肝癌发生密切相关。本研究为了解肝癌的发病机制及肝癌高危人群的筛检提供实验佐证，还应进行更深入的研究。

[1]Huang FS,Wei XL.An analysis on mobidity of liver cancer in the period of 2006-2008 in Fushui,Guangxi[J].Journal of Youji⁃ang Medical University for Nationalities,2012,34(2):174-175. [黄福生,韦忠亮.扶绥县2006-2008年肝癌死亡率分析[J].右江民族医学院学报,2012,34(2):174-175.]

[2]Huang TR,Wei ZL,Huang KB,et al.An analysis on morbidity of liver cancer in the period of 1997-2003 in Fushui,Guangxi [J].Guangxi Medical Journal,2006,28(9):1336-1339.[黄天壬,韦忠亮,汪凯波,等.广西扶绥县居民1997-2003年肝癌发病率分析[J].广西医学,2006,28(9):1336-1339.]

[3]Liu Y,Xiao J,Mo XW,et al.Analysis of potential associations of hepatitis B virus infection and family history of hepatocellularcarcinoma with age at liver cancer diagnosis in Guigang city[J].Chin J of Oncol Prev and Treat,2013,5(1):50-53.[刘懿,肖军,莫显伟,等.广西贵港地区乙型肝炎病毒感染及肝细胞性肝癌家族史与肝细胞性肝癌患者住院年龄的相关性分析[J].中国癌症防治杂志, 2013,5(1):50-53.]

[4]Ding F,Chen YY,Xie YA.Correlations between XRCC1 genet⁃ic polymorphism Arg399Gln and susceptibility to hepatocellular carcinoma in liver cancer family clusters in Fusui country, Guangxi[J].Chin J of Oncol Prev and Treat,2012,4(1):33-37. [丁飞,陈圆圆,谢裕安.广西扶绥县肝癌家系XRCC1基因Arg399Gln多态性与肝细胞癌的遗传易感性[J].中国癌症防治杂志,2012,4(1):33-37.]

[5]Granja T,Kohler D,Mirakaj V,et al.Crucial role of Plexin C1 for pulmonary inflammation and survival during lung injury[J]. Mucosal Immunol,2014,7(4):879-891.

[6]Balakrishnan A,Penachioni JY,Lamba S,et al.Molecular profil⁃ing of the"plexinome"in melanoma and pancreatic cancer[J]. Hum Mutat,2009,30(8):1167-1174.

[7]Wang Y,Hu YL,Cao J,et al.Bioinformatic screening of key genes expressed in both human and mouse hepatocellular carcino⁃ma[J].World Chinese Journal ofDegestology,2012,20(12): 1012-1017.[王云,胡艳玲,曹骥,等.生物信息学方法对人类和小鼠共同肝癌相关基因的筛选[J].世界华人消化杂志,2012,20 (12):1012-1017.]

[8]Zhao H,Wang W,Zhang QR,et al.The study of high through⁃put MALDI-TOF genotyping assay[J].Prog Biochem Biophys, 2005,32(7):667-672.[赵辉,王威,张清润,等.高通量飞行时间质谱基因分型方法的研究[J].生物化学与生物物理进展,2005,32 (7):667-672.]

[9]Fang KH,Chang XT.Research progress on relationship between gene single nucleotide polymorphisms and tumor[J].Chin J Cnac⁃er Prev Treat,2011,18(2):151-155.[房克华,常晓天.单核苷酸多态性与肿瘤遗传易感性的研究进展[J].中华肿瘤防治杂志,2011, 18(2):151-155.]

[10]Du L,Song M,Yang L,et al.Associations between aromatase CYP19 rs10046 polymorphism and breast cancer susceptibility of uygur[J].Chin J Cancer Prev Treat,2014,21(22):1769-1773. [杜露,宋牧,杨亮,等.CYP19基因多态性与新疆维吾尔族乳腺癌易感相关性研究[J].中华肿瘤防治杂志,2014,21(22):1769-1773.]

[11]Guo XR,Wang GP,Ding T,et al.658 cases genetic epidemiolo⁃gy study on esphageal cancer in Shanxi province,2014,21(19): 1490-1493.[郭雪蓉,王国平,丁悌,等.山西省658例食管癌遗传流行病学分析[J].中华肿瘤防治杂志,2014,21(19):1490-1493.]

[12]Luo J,Yan R,Zou L.Serine/threonine kinase 15 gene polymor⁃phism and risk of digestive system cancers:A meta-analysis[J]. Exp Ther Med,2015,9(1):219-226.

[13]Huang QH,Huang TR,Li JL,et al.Correlation between microR⁃NA-146a polymorphism and primary liver carcinoma in the Guangxi Zhuang population[J].Chin J of Oncol Prev and Treat., 2013,5(02):100-104.[黄琼华,黄天壬,利基林,等.广西壮族人群mi⁃croRNA-146a基因多态性与肝癌遗传易感性的相关性研究[J].中国癌症防治杂志,2013,5(02):100-104.]

[14]Zhang H,Chen XY,Yang B,et al.Research on the serum level of microRNA-224 in hepatocellular carcinoma patients and its clinical diagnostic significance[J].Chin J Clin Oncol,2014,41(9): 576-579.[张华,陈旭义,杨波,等.肝细胞肝癌患者血清mi⁃croRNA_224水平变化及其临床诊断意义的研究[J].中国肿瘤临床,2014,41(9):576-579.]

[15]Messina A,Ferraris N,Wray S,et al.Dysregulation of Semapho⁃rin7A/beta1-integrin signaling leads to defective GnRH-1 cell migration,abnormal gonadal development and altered fertility[J]. Hum Mol Genet,2011,20(24):4759-4774.

[16]Glynis AS,Lindy AM,Alex FF.Semaphorin 7a promotes spread⁃ing and dendricity in human melanocytes through beta1-integ⁃rins[J].J Invest Dermatol,2008,128(1):151-161.

[17]Chen Y,Soong J,Mohanty S,et al.The neural guidance receptor Plexin C1 delays melanoma progression[J].Oncogene,2013,32 (41):4941-4949.

（2015-04-09收稿）

（2015-05-20修回）

（编辑：周晓颖）

Relationship of PLXNC1(rs2272335)polymorphism with genetic susceptibility to primary liver cancer among family clusters in Guangxi and its expression

Chengcheng HE,Yu'an XIE,Sailan MAO,Zheng HUANG,Lei YAN,Ruiqiang ZHAO
Department of Experimental Research,Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China;Graduate School of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China.
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81260320)and Innovation project of Guangxi Graduate Education(No.YCBZ2013012).

Yu'an XIE;E-mail:gxxya@aliyun.com

Objective:To investigate the correlation between plexinC1(PLXNC1)rs2272335 polymorphism and the family clustering genetic susceptibility to primary liver cancer(PLC)in Guangxi and the expression of PLXNC1.Methods:Genotype and alleles of rs2272335 were determined in 20 liver cancer family groups(79 cases)and 10 healthy normal control groups(40 cases)in Fusui County through Time of Flight Mass Spectrometer.Immunohistochemistry detected the PLEXNC1 protein expression.Results:For the alleles of PLXNC1(rs2272335)site,the risk of hepatocellular carcinoma(HCC)for individuals with[C]allele was 4.16-fold(95%CI= 0.37-47.3,P=0.032)compared with that for individuals with[T]allele among the members of the healthy normal control group.The frequencies of the[C]and[T]alleles were similar in the HCC patients and the core individuals of liver cancer families(P＞0.05).For the genotype of the PLXNC1(rs2272335)site,the differences in frequencies of TT,TC,and CC genotypes were not statistically significant among the PLC patients and the core individuals of the liver cancer families and normal controls.The PLXNC1 protein expression in HCC(3.12±1.12)was higher than in hepatocellular paracancerous tissues(1.54±0.67)and in benign hepatocellular lesions(1.23±0.87) (P＜0.05).Conclusion:The[C]allele of PLXNC1(rs2272335)site might be the risk gene for the occurrence of PLC family clustering in Guangxi.PLXNC1 protein overexpression was closely correlated with PLC oncogenesis.

liver neoplasm,PLXNC1 gene,single nucleotide polymorphism,genetic susceptibility,expression