110例产妇乳汁HBV-DNA含量与血清HBsAg浓度的相关性分析

宋 丽，侯远沛

(徐州市传染病医院检验科，江苏徐州221004)

110例产妇乳汁HBV-DNA含量与血清HBsAg浓度的相关性分析

宋 丽，侯远沛

(徐州市传染病医院检验科，江苏徐州221004)

目的通过分析产妇乳汁中乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）含量与产妇血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）浓度含量的相关性，探讨乙型肝炎产妇母乳喂养的安全性问题，正确指导母乳喂养。方法选择徐州市传染病医院门诊乙肝产妇110例，利用实时荧光PCR技术（FQ-PCR）测定产妇乳汁HBV-DNA含量，采用时间分辨免疫荧光法（IFMA）检测HBsAg含量。结果110例产妇HBsAg感染浓度＞500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA阳性16例，平均浓度为8.86E+06IU/ml，阳性率66.7%，HBsAg感染浓度在300～500ng/ml范围的66例，乳汁HBV-DNA阳性26例平均浓度为9.12E+04IU/ml，阳性率39. 4%，HBsAg感染浓度＜300ng/ml有20人，乳汁HBV-DNA阳性3例且平均浓度为3.54E+03IU/ml，阳性率15.0%。由此可见HBsAg感染浓度与乳汁HBV-DNA含量呈正相关。结论建议产妇哺乳前应做乳汁HBV-DNA和乙肝标志物检测，乳汁HBV-DNA阳性率及病毒含量随着HBsAg感染浓度的升高而升高。HBV产妇乳汁具有一定的传染性，因此要正确选择哺乳方式从而降低新生儿乙肝病毒的感染率。

乳汁；HBV-DNA，HBsAg；时间分辨免疫荧光法（IFMA）

近年来随着人们医疗条件的不断改进和医学知识的广泛普及，在婴幼儿喂养方式上，越来越多的母亲更倾向于母乳喂养，但同时也增加了母婴传播乙肝的概率。母婴传播产后感染的主要介质是母乳[1]。母乳中的HBV-DNA具有一定的传染性，特别是血清HBsAg高浓度且乳汁HBV-DNA阳性的产妇母乳，大大提高了婴幼儿感染乙肝的几率。无免疫力的新生儿及免疫力差的儿童尤其是母亲为乙肝病毒表面抗原阳性（HBsAg）的新生儿是HBV的高危人群[2]。笔者通过检测产妇乳汁HBV-DNA和血清HBsAg浓度，并对其相关性进行分析比较，从而探讨乙肝病毒携带者产妇母乳喂养安全问题。

1 资料与方法

1.1 一般材料选取2014年6月至2015年6月我院门诊110例乙肝产妇，其平均年龄在22～30岁。所有产妇均无肝炎临床症状并排除其它传染性疾病，并经过患者知情同意。

1.2 标本采集抽取产妇血样3ml于分离胶试管离心备用，定量检测乙肝病毒表面抗原。乳汁HBV-DNA检测标本前处理很重要，对产妇乳头用无菌生理盐水消毒后，用无菌试管留取乳汁，置冰箱4℃过夜，吸弃上层乳白色脂肪层，吸取中间乳层进行离心沉淀处理。乳清和沉淀的DNA检测结果，发现沉淀的阳性率及DNA浓度均明显高于乳清，对于乳汁的HBVDNA检测还是应该取沉淀进行检测，否则有可能出现假阴性结果[3]。

1.3 试剂和仪器仪器为厦门安普利生物有限公司GeneLight 9800荧光定量扩增仪量PCR，试剂盒由厦门安普利生物有限公司提供：乙肝病毒标志物试剂盒苏州新波生物技术有限公司提供，仪器为苏州新波生物技术有限公司EFFICUTA-969，SYM-810。

1.4 检测方法采用实时荧光PCR技术（FQPCR），根据体外扩增原理，利用荧光共振能量转移实时跟踪荧光定量检测方法对产妇乳汁HBVDNA进行特异性定量分析。阴性对照定量值应< 500IU/ml，临界阳性对照值应符合定量范围2.0× 103IU/ml～9.0×103IU/ml，强阳性对照定量值应符合定量范围2.0×107IU/ml～9.0×107IU/ml，否则该次试验视为无效。实验严格按照试剂说明书和SOP文件操作。

采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法（IFMA）定量检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。实验时应同时设有6个标准品，HBsAg浓度≥0.2ng/ml，结果判断为阳性，反之阴性。特别注意的是血清HBsAg浓度如果≥150ng/ml，待测标本应稀释后在计算浓度值，且稀释后的浓度均应在线性范围内。

1.5 统计学分析采用PEMS3.1软件，率的检验采用χ2检验，均数的检验采用t检验，P<0.05具有统计学意义。

2 结果

110例产妇乳汁HBV-DNA含量与血清HB-sAg浓度的相关性分析见表1。

表1 不同浓度乙肝病毒表面抗原(HBsAg)与乳汁HBV-DNA检测结果比较

3 讨论

由以上表1结果显示A组的产妇HBsAg感染浓度>500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA阳性16例且平均浓度为8.86E+06IU/ml，阳性率66.7%与B组的产妇HBsAg感染浓度在300~500ng/ml范围的66例，乳汁HBV-DNA阳性26例平均浓度为9.12E+04IU/ml，阳性率39.4%相比较，两者相差有统计学差义（χ2=5.26，P＝0.02）。B组与C组的产妇HBsAg感染浓度<300ng/ml，乳汁HBV-DNA阳性3例且平均浓度为3.54E+03IU/ml，阳性率15.0%与相比较，两者相差有统计学差义（χ2=4.09，P＝0.04）。A组的产妇和C组的产妇相比较，均有统计学差义（χ2=11.87，P＝0.0006）。

众所周知，近年来世界卫生组织（WHO）大力提倡母乳喂养，母乳喂养虽然有很多优点，其成分既是婴幼儿成长发育的最佳营养品又可增强其免疫力。但是，据文献报道HBV携带者母亲，其子女约有38%～58%HBsAg呈阳性[4]。母乳喂养能增加婴儿感染HBV的危险．为了避免母乳喂养传染婴儿，应采取退乳及人工喂养[5]。婴幼儿的口腔粘膜以及胃肠消化道的溃疡和水肿、产妇乳头的干裂和破溃，均可诱发婴幼儿乙肝感染的可能性。所以，婴幼儿喂养方式的选择要本着科学谨慎的态度，不要一味的只看到母乳喂养的优点而忽视了其潜在的传染性。

肝炎在围生(产)期和婴幼儿时期感染HBV者中，分别有90%和25%～30%将发展成慢性感染[6]。目前较多的研究结论都反映出血清中HBsAg与HBV DNA之间存在正相关性[7]。本研究显示乳汁HBV-DNA阳性率及病毒含量随着HBsAg感染浓度的升高而升高。此结果与梁淑兰等人研究结果-血清中表面抗含量与乙肝产妇乳汁中HBV-DNA含量呈正相关相同[8]。考虑到基层医疗单位基因诊断实验室尚不能普及，如果以血清乙肝标志物进行血清安全性评价，应尽可能采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法（IFMA）定量检测HBsAg以提高阳性检出率。通常HBsAg和HBeAg阳性被认为是具有传染性的间接标志，HBsAg、HBeAg和HB-cAb是HBV复制活跃的标志[9]。也有文献结果表明，血清HBeAg阳性与乳汁中HBV-DNA的检出并不完全一致，部分HBeAg阴性产妇乳汁中仍能检出HBV-DNA[10]。因此，产妇HBsAg浓度和乳汁HBV-DNA含量联合检测更具有积极的临床意义。如果产妇HBsAg检出阳性，无论浓度高低，建议到有资质的医院进行乳汁HBV-DNA检测。对乳汁HBV-DNA阳性的产妇，为了安全起见，应考虑对婴儿采取人工喂养方式；对乳汁HBV-DNA阴性且HBsAg感染浓度高的产妇，应定期进行乳汁HBV-DNA复查，以确保哺乳期的安全，从而降低婴幼儿感染乙肝的可能性。

[1]黄莲芬.乙肝病毒感染或携带产妇检测乳汁乙肝病毒DNA结果分析[J].中国医学报，2011，8(22)：90-93.

[2]付晓萍.关于不同年龄段幼儿HBsAg和HBsAb检测结果分析[J].实验与检验医学，2014，32(5)：583-583，587.

[3]刘晓，许琳婧，孙丽萍.标本的处理对乳汁HBV DNA检测结果的影响[J].中国保健营养，2014，24(2)：760.

[4]林红，陈林俊.1495例孕产妇传染病标志物检测结果分析[J].江西医学检验杂志，2006，24（4）：374-375.

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R446.19，R512.6+2

A

1674-1129(2015)06-0771-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.030

2015-08-06；

2015-10-14)