335例外周血EB病毒DNA检测的结果分析及临床意义

朱婵虹，郑锦利，刘先鸿，郭建峰

(1、福建医科大学附属闽东医院检验科，福建福安355000；2、福建医科大学附属闽东医院肾内科，福建福安355000)

335例外周血EB病毒DNA检测的结果分析及临床意义

朱婵虹1，郑锦利1，刘先鸿2，郭建峰1

(1、福建医科大学附属闽东医院检验科，福建福安355000；2、福建医科大学附属闽东医院肾内科，福建福安355000)

目的探讨EB病毒DNA检测在疑似EB病毒感染者的临床应用价值。方法应用荧光定量PCR反应方法，定量检测335例疑似EB病毒感染者的外周血单个核细胞（PBMC）中EB病毒DNA载量。结果检测335例疑似EB病毒感染者PBMC中，检出阳性病例数109例，其中儿童97例，阳性率为31.7%（97/306）；成人12例，阳性率41.4%（12/29）。患儿以呼吸道感染及肺炎为诊断的最为常见。结论儿童是EBV感染的主要人群，并隐匿于上呼吸道感染、肺炎、支气管炎和扁桃体炎等疾病中较为常见，对此类人群进行外周血EB病毒DNA检测，有利于EBV相关疾病的早期诊断和治疗，减少重症疾病的发生。

EB病毒；DNA；上呼吸道感染

1 资料与方法

1.1 资料来源选取2015年4月-7月医院就诊疑似EBV感染者335例，其中儿童306例（其中年龄为0～3岁，220例，平均年龄17.98±10.6月；年龄＞3岁，86例，平均年龄7.03±2.64岁），成人29例。

1.2 仪器与试剂ABI7500PCR分析仪（美国ABI公司）EBV-DNA检测试剂盒购自中山大学达安基因有限公司，人外周血淋巴细胞分离液购自天津灏洋华科生物。

1.3 方法

1.3.1 标本制备用一次性无菌真空采血管（EDTA抗凝）抽取静脉血2ml，轻轻混匀。取EDTA抗凝全血1ml置于灭菌离心管中，加入生理盐水1ml轻摇混匀，取另一灭菌离心管，加入1ml淋巴细胞分离液，将稀释好的全血用加样器缓慢加入到加有淋巴细胞分离液的试管中（沿管壁滴加，速度宜慢），应用水平离心机，2000r/min离心20min。吸取白细胞层，加入1.5ml离心管中。

1.3.2 EB病毒核酸提取制备好的外周血单个核细胞，12000r/min离心5min，去上清，沉淀加入50μl提取液充分混匀，100℃恒温处理（10±1）min。12000r/min离心5min，上清液即为模板，留取备用。

1.3.3 荧光定量PCR检测PCR反应管中加入2μlDNA模板提取液，用已知EBV-DNA含量的标准阳性对照品制备标准曲线，置于荧光PCR仪检测，结果低于5000拷贝/ml判定为阴性。

1.4 统计学方法采用SPSS 16.0统计学软件进行统计分析，率的比较采用卡方检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 儿童和成人PBMC中EBV-DNA检测结果见表1。

表1 儿童和成人PBMC中EBV-DNA阳性率的比较

2.2 儿童疑似感染者中（0～3岁）组及（＞3岁）组的检测结果见表2。

2.3 儿童疑似感染者的初步诊断分布情况见表3、表4。

表2 儿童疑似感染者中0～3岁组及＞3岁组阳性率的比较

表3 年龄＜3岁EB病毒阳性儿童疾病分布情况

表4 年龄＞3岁EB病毒阳性儿童疾病分布情况

3 讨论

EBV属于γ疱疹病毒亚科淋巴滤泡病毒属，主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。EBV长期潜伏在淋巴细胞内，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合在染色体内。对于免疫功能正常的个体，由于EBV特异性的免疫监视作用，EBV并不会大量复制导致疾病，而在细胞免疫功能受损后，EBV复制可加速，引起一系列临床病变[3]。大多数实验室采用ELISA方法检测各项抗体辅助临床诊断EBV感染，但它实际上是检测人体对EBV感染的免疫状态，无法检测病毒自身（的真实含量），也就无法更准确灵敏地反映EBV感染的情况。本资料应用荧光定量PCR技术检测EBV载量，具有高特异性、高灵敏度的特点。

从本资料可以看出就诊的疑似EB感染患者335例中，儿童占大多数（306/335），阳性率为31.7%(97/306)；成人占（29/335），阳性率为41.4%（12/29）。成人的阳性率比儿童高，不过成人病例数较少，准确性有待进一步确证。

儿童防御能力低下是EBV感染的重要原因，EBV感染者年龄以婴幼儿和学龄前儿童较为多见[4]。在我国3~5岁儿童感染率超过90%[5]，发现EB病毒感染患儿首先以呼吸道感染为主[6]。本资料阳性患儿中，主要以小于3岁（70/97）的幼儿为主，主要临床表现为上呼吸道感染27例(38.57%)、肺炎16例（22.86%）、支气管炎14例（20.0%），另外，扁桃体炎9例（12.86%），疱疹性咽炎等。同样，大于3岁的27例EBV感染患儿中，主要临床表现亦为肺炎7例（25.92%）、上呼吸道感染6例（22.22%）和扁桃体炎6例（22.22%）。与陈倩等报道一致[7]。戴伟[8]报道反复上呼吸道感染患儿EB病毒阳性25.8%，远高于单纯呼吸道感染的患儿EB病毒阳性10.2%，和本资料结果一致。荧光定量PCR方法对EB病毒感染的检测具有早期、快速等优点并易于推广应用。李素娥等报道[9]EB病毒感染与儿童原发性肾病综合征有一定的关联，本文中统计的EBV阳性患儿，有诊断为肾炎的，亦可能为[10]EB病毒在侵犯B淋巴细胞后，使B淋巴细胞发生抗原性改变，并进一步引起T淋巴细胞的防御性反应，形成细胞毒效应，导致受感染机体细胞的溶解和死亡。

综上所述，成人疑似患者的病例较少，需增加病例数进一步比较。而在儿童方面，EBV感染的隐匿性及致癌性对儿童的健康构成威胁，临床予以EB病毒DNA检测，有利于EBV相关疾病的早期诊断和治疗，从而减少患儿痛苦，改善患儿的预后及减轻经济负担。

[1]谢正德，申昆玲.重视儿童非肿瘤性EB病毒感染的研究[J].首都医科大学学报，2010，31（2）：213-216.

[2]李金明.EB病毒实时PCR监测.实时荧光PCR技术[M].北京：人民军医出版社，2007：291-298.

[3]段红梅，谢正德，申昆玲.慢性活动性EB病毒感染的研究进展[J].临床儿科杂志，2007，25（2）：153-156.

[4]窦蕾，张斌，贾娜儿，等.乌鲁木齐地区住院呼吸道感染患儿EB病毒感染的调查[J].临床儿科杂志，2012，30（8）：757-759.

[5]陈丽芳.小儿EB病毒感染92例临床分析[J].现代医药卫生，2010，26（5）：712-713.

[6]廖细生，朱庆雄.EB病毒感染患儿的诊疗体会[J].江西医药，2014，49（10）：1058-1060.

[7]陈倩，胡正，张其华.761例住院儿童EB病毒感染分析[J].中国当代儿科杂志，2013，15（3）：183-186.

[8]戴伟.小儿反复上呼吸道感染诱发相关因素分析[J].白求恩军医学院学报，2013，11(5)：406-407.

[9]李素娥，唐骏，吴乐天.EB病毒感染与儿童原发性肾病综合征关系的研究[J].新医学，2014，45（5）：342-344.

[10]张慧，李双杰，袁远宏，等.儿童EB病毒感染不同临床疾病类型免疫功能研究[J].中国实用儿科杂志，2013，28（6）：464-466.

R446.62

A

1674-1129(2015)06-0749-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.020 EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一个具有复杂基因组的人类疱疹病毒，EB病毒感染在全球均较普遍，并且是儿科常见的一种感染性疾病[1]，大多数的初次感染发生在幼儿时期，且多数感染后无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染，但终身携带病毒[2]。机体感染EBV后，可以产生传染性单核细胞增多症、EBV相关性嗜血细胞综合征等，免疫缺陷患者容易发生淋巴组织增殖性疾病，常合并一系列的并发症。此外，EBV感染与鼻咽癌和淋巴瘤的发病密切相关。本研究应用荧光定量PCR反应方法定量检测了335例疑似EBV感染者的外周血EB病毒DNA载量，以探讨EBVDNA检测的临床应用价值和了解儿童及成人的EBV感染状况。

2015-06-08；

2015-07-09)