CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

陈 敏

（武汉市江夏区第一人民医院老年病科 武汉430200）

甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是人类内分泌器官中最常见的恶性肿瘤，占所有恶性甲状腺肿瘤的60%－80%。在一些碘摄入量高的国家，如日本，PTC发病率更高，占到所有甲状腺癌患者的85%以上［1］。近年来，我国甲状腺癌的发病率呈明显上升的趋势［2］。为了使甲状腺癌患者得到正确诊断和及时有效治疗，我们需要进一步研究和探讨甲状腺癌的发病机制。

CBX7（ehromoboxhomolog7）与黑腹果蝇的异染色质蛋白（Heteroehromatin Protein，HPI）具有同源性，主要分布于染色质、核，其分子功能通过与染色质结合实现。目前已有研究表明CBX7在肿瘤细胞中有表达，但不同肿瘤中CBX7表达情况与肿瘤的恶性程度的关系有不同表现，部分肿瘤CBX7高表达提示肿瘤恶性程度高，在另外的肿瘤则相反［3－5］。

通过应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的表达水平，以探讨其在甲状腺乳头状癌发生、发展、转移和侵袭过程中的作用机制，为临床上治疗甲状腺乳头状癌提供理论依据。

材料和方法

1.材料

1.1 材料来源

收集江夏区人民医院病理科2009－2013年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织20例。其中甲状腺乳头状癌中男12例，女28例；年龄23－68岁。癌旁组织中男6例，女14例；年龄20－60岁。随访时间为8－36个月，平均随访时间20.3个月，中位随访时间18个月。

1.2 材料分组

蜡块切片厚5μm，粘片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色，用免疫组织化学S－P法检测CBX7蛋白在各组中的表达。

2.主要试剂和仪器

2.1 主要试剂

（1）浓缩型兔抗人CBX7蛋白多克隆抗体（北京中杉生物技术有限公司）；

（2）超敏即用型S－P通用型免疫组织化学试剂盒（北京中杉生物技术有限公司）；

（3）显色试盒及多聚赖氨酸（北京中杉生物技术有限公司）。

3.方法

3.1 免疫组织化学S－P法检测CBX7蛋白相关抗原

主要步骤：

（1）4μm组织切片常规脱蜡入水；（2）抗原修复（柠檬酸缓冲液微波抗原修复法）；（3）滴加3%H2O2，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性；（4）正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景；（5）分别滴加一抗；（6）滴加链霉素抗生物素蛋白－过氧化物复合物37℃湿盒孵育；（7）滴加新鲜配置的DAB显色液显色；（8）苏木素复染；（9）梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检；（10）用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为CBX7的阳性对照组。

3.2 免疫组织化学结果判断

3.2.1 以胞浆和胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。

3.2.2 采用HPIAS－2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对CBX7的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400），测定每个视野下RECK和MT1－MMP的阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。

（阳性面积率＝单位面积中阳性反应的总面积／单位面积中细胞的总面积×100%）

4.统计学处理

对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK－q检验，检验水准α为0.05。

结 果

CBX7蛋白的表达 甲状腺乳头状癌组织内可见少量的棕黄色颗粒，CBX7蛋白表达弱（图1）；癌旁组织中可见密集分布的棕黄色颗粒，CBX7蛋白表达呈强阳性（图2）。图像分析结果显示：癌旁组织和甲状腺乳头状癌组织之间CBX7蛋白表达的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义（P＜0.05）见表。

表 甲状腺乳头状癌与癌旁组织中CBX7蛋白表达的平均光密度和阳性面积率（）Table the average optical density and the rate of positive area of CBX7protein in thyroid papillary carcinoma and in Carcinoma adjacent tissue（）

表 甲状腺乳头状癌与癌旁组织中CBX7蛋白表达的平均光密度和阳性面积率（）Table the average optical density and the rate of positive area of CBX7protein in thyroid papillary carcinoma and in Carcinoma adjacent tissue（）

▲甲状腺乳头状癌与癌旁组织比较 （P＜0.05）▲ comparison between thyroid papillary carcinoma and Carcinoma adjacent Tissue P＜0.05

组别Group ositive area甲状腺乳头状癌thyroid papillary carcinoma 40 0.0924±0.0386▲ 0.0906±0.0383例数n平均光密度average optical density阳性面积率rate of p▲癌旁组织Carcinoma adjacenttissue 20 0.2852±0.0750 0.2796±0.0735

讨 论

临床研究结果显示，PTC的预后和很多因素有关，其中对甲状腺乳头状癌预后产生不利影响的因素包括：年龄（＞50岁），男性，肿瘤尺寸较大，缺乏包膜，甲状腺外浸润，多灶性和远处转移［8－9］。尽管大多数PTC患者表现为无痛性甲状腺肿块，治疗后无病生存期长且治愈率高，但PTC的一些组织学亚型具有胞膜侵犯和远处转移的生物学特性，导致病人死亡。早期诊断和及时正确的治疗是提高生存率的关键。深入认识甲状腺癌的发病机制，将有可能为治疗提供新的线索和途径［10］。

CBX7蛋白是PolyColnb家族一员；Polycomb group（PcG）蛋白家族是基因调控决定细胞命运的组成部分，它被认为能通过下调INK4a／ARF肿瘤抑制因子的表达控制细胞增殖，它的紊乱能够导致肿瘤发生.已有的研究表明CBX7在淋巴瘤、胃癌、前列腺癌中表达上调，但另外一些研究表明CBX7在一些其他恶性肿瘤中表达量却下调。目前CBX7在大部分恶性肿瘤中的表达情况还未明确。近年来研究发现，CBX7在甲状腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多种肿瘤组织和细胞中低表达，CBX7的缺失与肿瘤形成、生长 、转移及预后密切相关 ，被认为是一种新的抑癌基因［11－12］。

在甲状腺癌、胰腺癌、结肠癌等各种肿瘤患者中，CBX7 低 表 达 均 预 示 预 后 不 良［13］。Pallante等［14］使用自制的多克隆抗体进行免疫组化研究发现，结肠癌组织呈CBX7低表达，CBX7低表达的结肠癌患者生存时间低于高表达者。本实验研究结果显示：CBX7在癌旁组织中呈高表达，而在甲状腺乳头状癌组织中呈低表达。图像分析结果显示：甲状腺乳头状癌与癌旁组织之间，CBX7的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0.05）。结果提示：CBX7在甲状腺乳头状癌中呈现的表达异常可能与肿瘤的发生和发展密切相关。CBX7基因可能对甲状腺乳头状癌的诊断和治疗提供辅助参考价值，但其作用机制尚不清楚，仍有待进一步的研究。

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［2］Chan AC，Lang BH，Wong KP.The pros and cons of routine central compartment neck dissection for clinically nodal negative （cN0）papillary thyroid cancer.Gland Surg，2013，2（4）：186－195

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［4］Mansueto G，Forzati F，Ferraro A，et al.Identification of a New Pathway for Tumor Progression：MicroRNA－181bUp－Regulation and CBX7Down－Regulation by HMGA1Protein.Genes Cancer，2010，1（3）：210－224

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［10］Varinot J，Ménégaux F，Bitker MO，et al.Renal metastasis from thyroid carcinoma：a case report.Anal Quant Cytol Histol，2014，36（1）：46－50

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［12］Forzati F，Federico A，Pallante P，et al.CBX7is a tumor suppressor in mice and humans.J Clin Invest，2012，122（2）：612－623

［13］Federico A，Pallante P，Bianco M，et al.Chromobox protein homologue 7protein，with decreased expression in human carcinomas，positively regulates E－cadherin expression by interacting with the histone deacetylase 2 protein.Cancer Res，2009，69（17）：7079－7087

［14］Pallante P，Federico A，Berlingieri MT，et al.Loss of the CBX7gene expression correlates with a highly malignant phenotype in thyroidcancer.Cancer Res，2008，68（16）：6770－6778

图 版 说 明

图1 CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达 可见少量的棕黄色颗粒，CBX7蛋白表达弱（S－P×200）；

图2 CBX7蛋白在癌旁组织中的表达 可见密集分布的棕黄色颗粒，CBX7蛋白表达呈强阳性（S－P×200）；

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1Expression of CBX7in thyroid papillary carcinoma There were few brown particles in the cytoplasm of thyroid papillary carcinoma，CBX7was weakly masculine.S－P×200

Fig.2Expression of CBX7in Carcinoma adjacent tissue There were plenty of brown particles in the cytoplasm of carcinoma adjacent tissue.CBX7was strongly masculine.S－P×200