差示分光光度法鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑成分

伍小勇，康娟娟，张晓丹，金丽，卜莹，古卓良（南京军区联勤部药品仪器检验所，江苏南京210002）

差示分光光度法鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑成分

伍小勇，康娟娟，张晓丹，金丽，卜莹，古卓良
（南京军区联勤部药品仪器检验所，江苏南京210002）

目的建立一种鉴别复方薄荷脑滴鼻液中樟脑成分的方法。方法分别对乙醇提取的供试品溶液和参比溶液，加入活性炭进行优化处理，采用差示分光光度法，在230～350 nm的波长范围内测定最大吸收波长，用以鉴别樟脑。结果液体石蜡会干扰樟脑的测定，采用差示分光光度法处理后可排除液体石蜡的干扰；专属性试验和耐用性试验表明该方法结果准确可信；测定7批样品中的樟脑成分发现均在（289±2）nm处有最大吸收峰，吸光度为0.3～0.6。结论差示分光光度法具有操作简单方便，对仪器要求低，结果快速、准确的优点，值得推广应用。

分光光度法；复方合剂；投药，鼻内；薄荷脑/分析；樟脑/分析

复方薄荷脑滴鼻液是一种常用的制剂，由薄荷脑和樟脑研磨液化后溶于液状石蜡制成。该制剂具有润滑黏膜、消炎、止痛等作用，主要用于治疗干燥性和萎缩性鼻炎及伤风、鼻塞等。质量标准采用紫外分光光度法对樟脑进行鉴别[1]。该标准中采用乙醇提取，而乙醇提取液中有微量液体石蜡（液体石蜡微溶于乙醇），其在230～350 nm波长范围内有吸收，并且不同厂家、不同批号的液体石蜡对紫外线吸收强度不一，因此容易干扰樟脑的鉴别测定。多年来，已有大量文献报道采用升华法[2-3]、水蒸馏法[4]、冰浴法[5]、紫外分光光度法[6]、差示分光光度法[7-8]、高效液相色谱法[9]和气相色谱法[10-11]等方法鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑成分，但前4种方法均无法彻底排除液体石蜡的干扰，而高效液相色谱法和气相色谱法又不适用于广大基层实验室，因而均未得到广泛应用。本研究采用差示分光光度法，对乙醇提取的供试品溶液和参比溶液加入活性炭进行优化处理，排除液体石蜡的干扰，可较好地鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑成分，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器电子天平（MS105型，Mettler Toledo公司）；紫外分光光度计（UV2550、UV2450型，日本岛津公司）；气相色谱仪（GC-2010型，日本岛津公司）。

1.1.2 试剂

1.1.2.1 对照品樟脑（中国药品生物制品检定所，批号：110747-201008，纯度99.0％）；薄荷脑（中国食品药品检定研究院，批号：110728-200508）。

1.1.2.2 原辅料薄荷脑（南通薄荷厂有限公司，批号：130702）；樟脑（广州黄埔化工有限公司，批号：20130222）；轻质液体石蜡（南昌白云药业有限公司，批号：20130904）；液体石蜡（广东光华科技股份有限公司，批号：20130411）。

1.1.2.3 样品复方薄荷脑滴鼻液样品A、B、C（南京军区南京总医院，A、B、C批号：130801、130802、130806），样品D（解放军第81医院，批号：130206），样品E（解放军第98医院，批号：130301），样品F（解放军第97医院，批号：20130308），样品G（解放军第94医院，批号：130207）。

1.2 方法

1.2.1 供试品溶液的制备（1）樟脑对照品溶液：称取樟脑对照品0.025 01 g，置于10 mL容量瓶中，加乙醇适量使其溶解并稀释至刻度，震荡混匀。（2）薄荷脑对照品溶液：称取薄荷脑0.025 04 g，置于10 mL容量瓶中，加乙醇适量使其溶解并稀释至刻度，震荡混匀。（3）轻质液体石蜡和液体石蜡供试品溶液：各取轻质液体石蜡和液体石蜡0.1 g，分别加入乙醇20 mL，震荡混匀。分别以3 000 r/min离心10 min，分离的上清液作为供试品溶液。

1.2.2 樟脑鉴别方法的建立取样品A 5 mL，加乙醇10 mL振摇提取，分取上层乙醇液，加活性炭0.1 g，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。取下层液体石蜡溶液，用乙醇20 mL洗涤，弃去洗涤液，再加入乙醇10 mL，振摇提取，取上层乙醇液，加活性炭0.1 g，摇匀，滤过，续滤液作为参比溶液，紫外分光光度法测定，分别在230～350 nm的波长范围内测定最大吸收。

1.2.3 紫外吸收光谱的确定以乙醇为空白，紫外分光光度法测定，在波长230～350 nm处分别测定2种对照品溶液（樟脑、薄荷脑）以及2份液体石蜡供试品溶液。观察各自吸收峰及相互间干扰情况。

1.2.4 复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的可行性试验按处方，分别用轻质液体石蜡和液体石蜡制备100mL复方薄荷脑滴鼻液模拟样品S1、S2。各取3 mL，加乙醇6 mL，摇匀，以3 000 r/min离心10 min，取上清液作为供试品溶液。另取同厂家、同批号的轻质液体石蜡和液体石蜡各3 mL，分别加乙醇5 mL，摇匀，以3 000 r/min离心10 min，取上清液作为参比溶液，紫外分光光度法测定230～350 nm波长内吸光度（A）值。

1.2.5 专属性试验阴性供试品溶液制备：取薄荷脑原料药1 g，置于干燥乳钵中，研磨，加液体石蜡至100 mL，研匀即得。按1.3.2项下方法同法试验。分别用轻质液体石蜡和液体石蜡制得阴性供试品溶液S轻质阴、S液阴。

1.2.6 耐用性试验

1.2.6.1 不同样品量对鉴别结果的影响中国药典2010版二部[12]中樟脑鉴别项下，供试品溶液樟脑浓度为2.5 mg/mL，参照此标准，作为样品量的取量范围，取样品A 1～7 mL，按1.3.2项下方法处理，测定吸光度。

1.2.6.2 加入活性炭不同量对鉴别结果的影响分别在鉴别样品A中加入不同量（0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 g）的活性炭，观察其对鉴定结果的影响。

1.2.6.3 提取参比液前加入洗涤液乙醇不同量对鉴别结果的影响采用样品A考察，分别加入不同量洗涤液乙醇[0、10、20（分2次加入）、20 mL（1次加入）]，观察其对鉴别结果的影响。

1.2.6.4 不同型号紫外分光光度计的检测结果将7批样品A～G按1.2.1项下方法处理，分别在2种型号（UV-2550、UV-2450）的紫外分光光度计上检测。

1.2.7 样品测定按1.2.2项下方法，同时测定3批本次制定标准用样品A、B、C和本所2013年4批抽样样品D、E、F、G。

1.2.8 气相色谱法验证将樟脑、薄荷脑对照品溶液，液体石蜡供试品溶液、阴性供试品溶液S轻质阴及5个不同厂家的供试品溶液，参照文献[9-10]中的气相色谱法测定，并进行验证。测定条件：柱温120℃，进样口和检测口温度均为190℃，火焰离子化检测器（FID）。毛细管柱：RTX-WAX型（聚乙二醇20mol/L，柱长30m，内径0.32mm，薄膜厚0.25 μm），进样量1 μL。

2 结果

2.1 各纯组分的紫外吸收光谱测定在290 nm处樟脑有最大吸收，薄荷脑无吸收峰，液体石蜡有明显吸收，且2批液体石蜡的图谱有较大差异。液体石蜡对樟脑紫外吸收峰有较大的干扰，而薄荷脑几乎没有干扰。

2.2 复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的可行性试验试验结果表明，两模拟样品在290 nm处均有最大吸收。用同厂家、同批号的液体石蜡对樟脑紫外吸收峰无干扰。由于实际检测工作中，无法得到与原制剂同厂家、同批号的液体石蜡，因而樟脑紫外吸收峰常产生漂移，无法鉴别。参考文献[2-8，13]中的方法，通过多次改进实验操作，均无法得到满意的结果；最终采用二次提取法，提取原制剂中的液体石蜡，并加入活性炭作适当的优化处理，作为参比溶液，则可实现用紫外分光光度法对樟脑的鉴别。

2.3 专属性试验两阴性供试品溶液的吸光度较小，且在（289±2）nm处均无最大吸收峰，结果表明该方法不会产生假阳性，见图1。

图1 阴性供试品溶液紫外图谱

2.4 耐用性试验

2.4.1 不同样品量对鉴别结果的影响按方法1.2.6.1项操作，结果见表1。结果发现：当取样量为1 mL时，由于取样量过少，供试液提取并用乙醇20 mL洗涤后，剩余的液体石蜡量已很少，因而参比溶液中提取的液体石蜡未达饱和，与供试品溶液中提取的液体石蜡不平衡，测得的紫外图谱有时存在部分漂移；取样量为5～7 mL时，乙醇2次提取法得到的樟脑最大吸收波长在（289±2）nm处，可基本消除液体石蜡对樟脑紫外吸收峰的干扰，并且樟脑的A值为0.3～0.6。

表1 不同样品量下樟脑紫外分光光度法测定结果

2.4.2 加入不同量活性炭对鉴别结果的影响按1.2.6.2项操作采用样品A考察加入活性炭量对鉴别结果的影响，见表2。结果表明，微量的活性炭即可去除液体石蜡的干扰。为方便活性炭称量和样品过滤，活性炭加入量为0.1 g较佳。

表2 不同活性炭加入量下樟脑紫外测定结果

2.4.3 提取参比液前加入洗涤液乙醇不同量对鉴别结果的影响按1.2.6.3项操作采用样品A考察加入洗涤液乙醇量对鉴别结果的影响，见表3。

表3 不同洗涤液乙醇量下樟脑紫外测定结果

2.4.4 不同型号紫外分光光度计的检测结果各样品在2种型号紫外分光光度计均检测出在（289±2）nm处有最大吸收峰，见图2。

图2 不同型号紫外分光光度计测定样品的紫外图谱

2.5 样品测定7批样品均能通过本法较好的鉴别出樟脑成分，并且樟脑的A值为0.3～0.6，见图2。

2.6 气相色谱法验证5个厂家的样品均检出樟脑，液体石蜡和阴性样品无干扰，结果表明本差示分光光度法检测结果较为准确、可靠。见图3。

图3 对照品、阴性样品及样品的气相色谱图谱

3 讨论

3.1 参比溶液中存在部分的樟脑，但是供试品中的浓度C供要比参比溶液C参高几倍。根据Beer定律，设定任意两波长λ1和λ2，当用乙醇提取同厂家、同批号液体石蜡所得的空白溶液作参比溶液时，两波长处的吸光度比值为A1/A2=E1CL/E2CL=E1/E2；当用乙醇二次提取溶液作为参比溶液时，λ1处A1=E1（C供-C参）L；λ2处A2=E2（C供-C参）L，因而两波长处吸光度比值也为A1/A2=E1（C供-C参）L/E2（C供-C参）L=E1/E2，所以虽然参比溶液中含有检测成分樟脑，但是峰形不会变化，最大吸收峰也未变化。

3.2 陈新善等[13]报道，采用化学方法鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑是可行的。但是由于液体石蜡（特别是轻质液体石蜡，而制备本制剂时南京战区大部分医院采用轻质液体石蜡）溶液起初显浑浊状，会干扰实验结果的判断，且最终实验结果需等待较长时间（静置4 h也未见明显的絮状沉淀析出），因而未采用其作为质量标准。

3.3 研究还发现，样品D、F不论采取离心、静置、加盐还是冰浴等各种方法处理，均无法得到理想的结果，样品D无最大吸收峰或最大吸收波长在270 nm左右，样品F最大吸收波长在282～284 nm处，有5～7 nm的偏移。究其原因，是用乙醇提取时，由于液体石蜡与乙醇不互溶，振摇提取后，乙醇溶液中悬浮微小石蜡液滴，离心或长时间放置也难以完全分层，因而干扰样品的测定。当加入少量的活性炭后，可吸附溶液中的液体石蜡，因而可去除液体石蜡的干扰。

本研究结果显示，取用样品量设定为5 mL，洗涤液加入量为20 mL，活性炭加入量为0.1 g时，可测得樟脑最大吸收波长在（289±2）nm处，樟脑的A值为0.3～0.6，测定的误差较小，并且符合药典[12]中紫外分光光度法对樟脑A值的要求（0.3～0.7）。

综上所述，差示分光光度法鉴别复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑成分，方法操作简单、方便，适用于仪器配置较低的基层实验室采用；且测定结果快速准确，值得推广应用。

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Identification of camphor in compound menthol nasal drops by differential spectrophotometry

Wu Xiaoyong，Kang Juanjuan，Zhang Xiaodan，Jin Li，Bu Ying，Gu ZhuoLiang
（Nanjing Institute for Quality Control of Medical Material and Equipment，Jiangsu，Nanjing 210002，China）

Objective To establish an method for identification of camphor in compound menthol nasal drops.Methods Adding activated carbon to optimize the ethanol extract of the test solution and reference solution from alcohol，differential spectrophotometry was adopted to determine the maximum absorption wavelength in the wavelength range of 230-350 nm for identification of camphor.Results Liquid paraffin may intervene into the determination of camphor.The application of differential spectrophotometry can avoid of the interference.The results of specificity test and durability test demonstrate the new method is accurate and reliable.Camphor were detected in seven batches of samples by the new method，all of which had maximum absorption peak at wavelength（289±2）nm and the absorbance ranged 0.3-0.6.Conclusion The differential spectrophotometry is simple and avaliable to operate，low in instruments requirements，rapid and accurate results，which is worthy to expand and apply further.

Spectrophotometry；Drug combinations；Administration，intranasal；Menthol/analysis；Camphor/ analysis

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.02.001

A

1009-5519（2015）02-0161-03

2014-07-31）

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题（13ZJZ07）。

伍小勇（1975-），男，江西新余人，硕士研究生，主管药师，主要从事药物分析相关研究；E-mail：wuxy5@163.com。

古卓良（E-mail：gujulia@163.com）。