sCTLA－4与早期梅毒血清固定的相关性

刘树萍史同新∗孙 敏徐敬星李 民姜玉暇

sCTLA－4与早期梅毒血清固定的相关性

刘树萍1史同新1∗孙 敏1徐敬星2李 民2姜玉暇2

目的: 明确血清可溶性T细胞相关抗原－4(sCTLA－4)与早期梅毒血清固定的相关性。方法: ELISA检测60例早期梅毒血清固定患者、20例早期梅毒治疗后血清学转阴患者及20名健康志愿者血清中sCTLA－4水平；同时对血清固定患者sCTLA－4水平与RPR滴度及临床分期进行相关分析。结果: 早期梅毒血清固定患者外周血sCTLA－4水平明显高于血清学转阴组及健康志愿者，差异有统计学意义(P＜0.05)。血清sCTLA－4水平与血清RPR固定滴度及临床分期无相关性(P＞0.05)。结论: 血清sCTLA－4表达水平增高可能与早期梅毒血清固定相关。

梅毒； 血清固定； 可溶性细胞毒T细胞相关抗原－4

梅毒是一种性传播疾病，多数患者经正规驱梅治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验在一定时间内转阴，但仍有15.00%～34.02%1的梅毒患者治疗后该类试验维持在某一水平不变而形成血清固定(sero－resistance)。2，3发生血清固定的具体机制目前尚不明确。免疫学研究表明，血清固定患者存在免疫失衡和细胞免疫抑制。4细胞毒T细胞相关抗原－4(cytotoxic T－lymphocyte associated antigen 4，CTLA－4)具有抗炎和免疫抑制作用，5sCTLA－4是其可溶性形式，它同样是CTLA－4基因转录的产物，其生物学活性同CTLA－4，6尚未见其在梅毒血清固定中作用的研究。因此，本实验通过对梅毒血清固定患者的血清sCTLA－4水平的检测，初步了解其在梅毒血清固定形成中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床资料 收集2013年5月至2014年6月于本院、青岛市皮肤病防治院及青岛市市立医院就诊的梅毒血清固定患者60例。其中男33例，女27例；年龄20～54岁，平均34.22±8.88岁；一期梅毒19例，二期梅毒41例。阴转组为经正规驱梅治疗后血清学转阴患者共20例，男12例，女8例。平均年龄36.45 ±8.25岁。其中，一期梅毒9例，二期梅毒11例。对照组为本院及青岛市市立医院查体中心20名健康志愿者。所有观察对象均排除HIV感染。3组观察对象在年龄及性别上均无统计学差异。入选标准:7，8早期梅毒患者；治疗后6个月以上RPR及TRUST试验检测均阳性；RPR滴度1∶1～1∶8。血清固定后经过2～4个规范疗程的复治。所有研究对象均无神经系统的临床症状及体征，且脑脊液生化及常规正常，脑脊

液RPR及TRUST检测均为阴性，排除神经梅毒。排除标准:9－12恶性肿瘤患者，SLE、Graves病等自身免疫性疾病患者，合并其他感染性疾病及性传播疾病患者，近期有不洁性行为者。

1.1.2 标本 抽取患者及健康对照者空腹血3 mL置于不含热源和内毒素的试管中，操作过程中避免任何细胞刺激，3000 r/min离心10 min，将血清小心分离后保存于－20℃冰箱内待测。

1.1.3 试剂 人共刺激分子CTLA－4(CD152)ELISA检测试剂盒(北京诺亚杰公司提供，为进口分装产品)；RPR及TRUST检测试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司)。

1.2 方法 sCTLA－4的检测采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA法)进行检测。检测范围3.12 ng/mL～100 ng/mL。实验操作严格按说明书进行。操作结束后15 min内于450 nm波长测吸光度(OD值)，并根据线形曲线方程计算sCTLA－4浓度，用酶标仪(Rayto RT－6000，深圳雷社生命科学股份有限公司)直接打印结果。RPR检测由青岛大学医学院附属医院检验科按照说明书完成。

1.3 统计学方法 用SPSS 17.0对数据进行分析。不同组别间sCTLA－4水平比较以 ¯x±s表示，采用单因素ANOVA检验，若差异具有显著性则进一步行LSD检验作组间两两比较；对血清固定患者按其临床相关因素分类的sCTLA－4水平比较以中位数及四分位数间距表示，采用秩和检验(Kruskal－Wallis检验或Mann－Whitney U检验)。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组别外周血sCTLA－4水平比较 3组外周血sCTLA－4水平之间的差异有统计学意义(P＜0.01)。进一步行LSD检验两两比较，梅毒血清固定组与梅毒血清学试验阴转组及健康对照组外周血sCTLA－4水平有明显统计学差异(P＜0.01)。而梅毒治疗后血清学阴转组和健康对照组之间外周血sCTLA－4水平无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

表1 3组观察对象血清sCTLA－4测定结果

2.2 血清固定组外周血sCTLA－4水平与临床相关性的比较 将梅毒血清固定组外周血sCTLA－4水平与患者性别因素、血清固定滴度以及临床分期进行相关性分析，结果均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 血清固定患者血sCTLA－4水平与临床参数比较

3 讨论

目前国内外对于梅毒出现血清固定的具体时间尚无统一判定标准。为符合梅毒治疗的早期足量规范的原则，而定义在早期梅毒6个月、晚期梅毒12个月较为合理。13临床上血清固定发生率较高，患者容易出现情绪障碍，严重影响其生活质量。14因此探讨梅毒血清固定形成的原因有重要的临床意义，它将有助于临床医生更好的掌握梅毒的治疗，减少梅毒血清固定的产生。

目前，对于梅毒血清固定形成机制的研究众多，其中的免疫学因素15－17是目前研究的热点，尤其是T细胞免疫在梅毒血清固定中的作用研究。国内外数个基于不同研究对象的细胞免疫学研究表明，梅毒血清固定患者有严重的Th1/Th2免疫失衡和细胞免疫抑制。有研究发现梅毒血清固定患者较健康人和驱梅治疗后血清学转阴者调节性T细胞比例升高，IL－6、IFN－γ水平降低，而IL－10水平升高。18与健康人相比，血清固定患者外周血淋巴细胞中Treg细胞比例及其转录因子Foxp3的表达升高，而Th17细胞比例及其转录因子ROR－γt的表达降低，19进一步证实了血清固定患者存在细胞免疫抑制。

CTLA－4属于免疫球蛋白超家族，它通过下调T细胞的功能而达到抑制免疫的作用。其具体作用机制有如下研究和假说20－23:(1)可介导不依赖Fas途径的T细胞凋亡。(2)促进TGF－β产生，抑制IL－2的分泌及细胞由G0/G1期向S期的转化从而抑制T细胞的功能。(3)与CD28竞争性结合B7而阻断共刺激信号的传递，从而抑制T细胞的功能及活化。(4)促进酪氨酸SHP－2与TCR/CD3ζ结合，使 TCRP/ CD3ζ复合物脱磷酸，从而使TCR不能传递T细胞活化信号，抑制T细胞的活化。综上可见CTLA－4在细胞免疫中的重要地位。

本研究结果发现，梅毒血清固定患者血清中sCTLA－4的水平明显高于血清学转阴组及健康人群，同

时血清学阴转组水平与健康人群无明显差异性，说明CTLA－4的免疫抑制作用可能在梅毒血清固定的形成中起到某些影响。同时还发现血清中sCTLA－4的水平与患者的性别、血清固定的滴度、临床分期无明显相关。

总之，sCTLA－4可能参与了梅毒血清固定的形成，但是本研究样本量较少，对结果的分析可能产生误差，有待进一步的临床研究证实。

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(收稿:2014－11－13 修回:2014－12－12)

Correlation between the level of sCTLA－4 and seroresistance in the patientswith early syphilis

LIU Shu－ping，SHITong－xin，SUNMin，etal.The Affiliated Hospital ofMedical College Qingdao University，Qingdao，266003

Objective:To determine the correlation between soluble cytotoxic T lymphocyte associated antigen－4(sCTLA－4)and seroresistance in the patientswith early syphilis.M ethods:The serum level of sCTLA－4 wasmeasured by ELISA in 60 seroresistance syphilis patients，20 syphilis patientswhose antibodies in the sera were negativity after treatment and 20 healthy controls.The correlation between the level of sCTLA－4 and the RPR titers and the stage of syphilis were analyzed among the non－seroresistance patients after treatment.Results:The level of sCTLA－4 in seroresistance group was significantly higher than that in other two groups(P＜0.05).Therewas no correlation between the level of sCTLA－4 and the RPR titers and the stage of syphilis(P＞0.05).Conclusion:The sCTLA－4may relate to the developmentofseroresistance in the patients with early syphilis.

syphilis；seroresistance；sCTLA－4

山东省自然科学基金资助项目(编号:ZR2010HM113)

1青岛大学医学院附属医院，山东青岛，266003 2青岛大学医学院附属青岛市市立医院皮肤科，山东青岛，266001∗通信作者