HPLC-ELSD法测定闽台薏苡仁中甘油三油酸酯的含量

曾建伟 ，李春燕 ，陈敏健 ，黄水珍 ，林忠宁 ，谢善松 ，陆 烝

（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350122；2.福建省农业科学院农业生态研究所，福建 福州 350013；3.南平市农业科学研究所，福建 南平 353000）

薏苡仁为禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的干燥成熟种仁，具有利水渗湿除痹、健脾止泻、排脓解毒散结之功效，用于水肿、脚气、小便不利、脾虚泄泻、湿痹拘挛、肺痈、肠痈、赘疣、癌肿等治疗［1］。薏苡仁是药食两用植物，一方面含有蛋白质、脂肪、多糖、氨基酸、脂肪酸等营养成分［2-3］；另一方面含有类脂类、甾醇、木脂素、黄酮类和生物碱等成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、免疫调节、抗氧化、镇痛、降血糖、降血钙、降血压等方面的药用价值［4-7］。薏苡仁在全国大部分地区均有分布，但未见有关台湾与大陆薏苡仁的质量比较。产地环境影响薏苡仁的品质，薏苡仁中甘油三油酸酯和薏苡素常作为其品质评价的指标

［8-13］。本文建立HPLC-ELSD法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量，比较闽台品种的含量差异，为从台湾引种优质高产药食两用品种提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵，G1329A自动进样器，G1316A柱温箱，Alltech 3300蒸发光检测器（美国安捷伦公司）；LK-1000A摇摆式中药粉碎机 （上海隆拓仪器设备有限公司）；MS105DU十万分之一电子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；AR2130千分之一电子天平（美国奥豪斯仪器有限公司）；KQ-500型超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q超纯水机（法国Millipore公司）。

1.2 试药 甘油三油酸酯对照品 （批号：111692-201203，中国食品药品检定研究院）；二氯甲烷（色谱纯，批号：D116146，美国阿拉丁工业公司）；乙腈（色谱纯，批号：201310726，国药集团化学试剂有限公司）；薏苡仁，采自台湾花莲及福建浦城、宁化、建瓯和建阳，经林忠宁副研究员鉴定为薏苡Coix lacryma-jobi L.var.meyuan （Romen.） Stapf的种仁。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－二氯甲烷（60∶40）；流速：1.0 mL ／min；进样量：10 μL；柱温：30℃；ELSD 检测器参数：氮气流速 1.5 L／min，漂移管温度70℃，增益4。在此色谱条件下，甘油三油酸酯对照品色谱图见图1，样品色谱图见图2。

图1 甘油三油酸酯对照品HPLC图

图2 薏苡仁样品HPLC图

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取甘油三油酸酯对照品15.43 mg，置10 mL的容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，配成浓度为1.543 mg／mL对照品储备液。精密吸取4 mL对照品储备液，置10 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得浓度为0.617 mg／mL对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末 （过60目筛）约2.0 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入流动相50 mL，称定重量，浸泡2 h，超声（功率 300 W，频率50 kHz）提取 30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.3 线性考察 分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 μL 依次注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，以对照品进样量（μg）对数值为横坐标（X），峰面积对数值为纵坐标（Y），绘制标准曲线， 得回归方程为：Y＝1.317X＋3.298，r＝0.9993。甘油三油酸酯在3.086～15.43 μg范围内，峰面积对数与进样量对数呈良好的线性关系。

2.4 精密度考察 取对照品溶液，重复连续进样5次，记录色谱峰面积，计算RSD为0.69%。

2.5 稳定性考察 取台湾供试品溶液，按“2.1”色谱条件下，每隔2 h进样1次，共进样5次，记录色谱峰面积，计算RSD为1.54%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.6 重复性考察 取台湾薏苡仁粉末约2.0 g，共5份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进样，记录色谱峰面积，计算甘油三油酸酯的含量平均值为0.94%，RSD为2.34%。

2.7 回收率考察 取台湾薏苡仁约1.0 g，共5份，分别置具塞锥形瓶中。另精密称取甘油三油酸酯对照品81.62 mg，置25 mL容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，分别精密吸取3 mL置上述具塞锥形瓶中，按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进样，测定，计算甘油三油酸酯的平均回收率为99.76%，RSD为1.32%。结果见表1。

表1 甘油三油酸酯回收率考察

2.8 含量测定 称取闽台两地薏苡仁样品约2.0 g，每个产地样品平行取3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进样，记录各样品峰面积，采用标准曲线方程计算含量，结果见表2。

表2 闽台薏苡仁中甘油三油酸酯的含量测定（n＝3）

3 讨 论

3.1 提取方法 参考2010版《中华人民共和国药典》［1］，薏苡仁粉碎过60目筛，以流动相为提取溶剂，采用超声法提取药材中甘油三油酸酯，经验证切实可行。

3.2 流动相的确定 流动相曾用分析纯二氯甲烷，发现ELSD噪音特别大，严重干扰了信号峰，导致无法正常检测。后改用进口色谱纯的二氯甲烷，解决了ELSD噪音太大的问题，保证ELSD的正常检测。《中华人民共和国药典》规定流动相的比例为乙腈-二氯甲烷（65∶35），结果发现保留时间过长，峰形较钝。经摸索，流动相修定为乙腈-二氯甲烷（60∶40），甘油三油酸酯出峰时间控制在10 min以内，峰形改善，分离度亦能满足要求。

3.3 含量分析 从表2可知，闽台两地薏苡仁中甘油三油酸酯的含量差异明显，台湾薏苡仁中甘油三油酸酯的含量最高，福建浦城的次之。如何提高福建省薏苡仁的品质，从台湾引种栽培不失为一条捷径。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：353-354.

［2］王颖，赵兴娥，王微，等.薏苡不同部位营养成分分析及评价［J］.食品科学，2013，34（5）：255-259.

［3］李泽锋，郝云良.薏苡营养成分及综合利用［J］.农业科技与装备，2012（5）：74.

［4］TATSUMI S，MABUCHI T，ABE T，et al.Analgesic effect of extracts of Chinese medicinal herbs Moutan cortex and Coicis semen on neuropathic pain in mice［J］.Neurosci Lett，2004，370（2）：130-134.

［5］黄锁义，李容，潘勇，等.薏苡研究的新进展［J］.食品研究与开发，2012，33（11）：223-227.

［6］周爱芬，朱虹，叶挺梅，等.薏苡药效物质基础研究进展［J］.亚太传统医药，2012，8（4）：188-190.

［7］袁建娜，张小华，郭明晔，等.薏苡生药学研究进展［J］.现代生物医学进展，2012，12（27）：5385-5389.

［8］李厚聪，刘圆，袁玮，等.HPLC测定薏苡中薏苡素的含量［J］.华西药学杂志，2009，24（5）：530-532.

［9］李厚聪，刘圆，袁玮，等.RP-HPLC法测定薏苡中薏苡素的含量［J］.西南大学学报：自然科学版，2009，31（11）：154-157.

［10］任江剑，俞旭平，张斌，等.不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较［J］.中国现代中药，2011，13（4）：15-17.

［11］陈勇，陈碧莲，何云珍，等.高效液相色谱法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量［J］. 中国现代应用药学，2005，22（3）：246-247.

［12］袁桂平，姜军华，眭荣春.HPLC法测定薏苡仁饮片中甘油三油酸酯的含量［J］.江西中医学院学报，2013，25（1）：52-54.

［13］李楠，卢亚婷，宋娟娜，等.HPLC法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量［J］.陕西科技大学学报：自然科学版，2013，31（4）：101-104.