免疫鼠抗AT1受体自身抗体的类型分布研究

郑荣华，张苏丽，刘慧荣

(1.临汾职业技术学院，山西 临汾　041000；2.首都医科大学，北京　100069)



免疫鼠抗AT1受体自身抗体的类型分布研究

郑荣华1，张苏丽2，刘慧荣2

(1.临汾职业技术学院，山西 临汾041000；2.首都医科大学，北京100069)

[摘要]目的：明确免疫鼠血中抗AT1受体自身抗体的类型分布，为该抗体的作用机制研究提供一定的实验依据。方法：以AT1R-ECII为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠，待大鼠血清中含有高滴度的抗AT1受体自身抗体后，用ELISA法检测血清中抗AT1受体抗体的水平、类型及亚类。结果：雌性Wistar大鼠免疫4周后，抗AT1受体抗体滴度时明显升高，8周时处于稳定高峰值(免疫组OD值2.99±0.11 vs. 同期对照组0.44±0.06，P<0.05)；该抗体属于免疫球蛋白的IgG类；在大鼠IgG的4个亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b， IgG2c)中，该抗体大部分属于IgG2b亚类(OD值为0.33±0.04 vs. 同期对照组OD值0.08±0.01，P<0.05)，极少部分属于IgG2a亚型(OD值为0.10±0.01 vs. 同期对照组OD值0.07±0.05，P<0.05)。结论：通过主动免疫大鼠体内产生的抗AT1受体抗体主要属于IgG类，IgG2b亚类。

[关键词]AT1R受体；抗体；类型

Study on Distribution of the Types of Autoantibodies against AT1Receptor in the Sera of Immunized Rats

ZHENG Ronghua1, ZHANG Suli2, LIU Huirong2

(1.LinfenVocationalandTechnicalCollege,Linfen041000,Shanxi,China; 2.CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)

[ABSTRACT]Objective: To detect distribution of the types of autoantibodies against AT1receptor in the sera of immunized rats, providing the experimental basis for the research of the action mechanism. Methods: Adult female Wistar rats were actively immunized with AT1R-ECII. When the titer of anti-AT1R antibody reached a peak, the titers, types and subtypes of anti-AT1R antibody in the sera of rats were detected by SA-ELISA. Results: The titers of serum anti-AT1R antibody in immunized group were increased at the 4th week and attained a peak value at the 8th week as compared with the control group at the same time point(OD value, 2.99±0.11 vs. 0.44±0.06, P<0.05). It was shown that anti-AT1R antibody was IgG type immunoglobulin(IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG2c). Meanwhile, the antibody was mainly determined as IgG2b subtype(OD value, 0.33±0.04 vs. 0.08±0.01, P<0.05), and a few belonged to IgG2a subtype(OD value, 0.10±0.01 vs. 0.07±0.01, P<0.05).Conclusion:The anti-AT1R antibodies in immunized rats aremainly determined as IgG2b subtype, and a few belongs to IgG2a subtype.

[KEYWORD] AT1receptor; antibodies; types

先兆子痫患者的发病与抗血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)密切性备受关注[1]。但由于临床研究具有的局限性及抗体收集的困难性，有关这些抗体与疾病的相关性研究大多数集中到动物身上，其中较为广泛采用的是主动免疫大鼠获取相应抗体而进行进一步机制研究。本研究通过主动免疫大鼠体内产生的抗AT1受体抗体，测定其类型及亚类的分布，为先兆子痫患者发病机制的研究提供一定的实验依据。

1材料与方法

1.1材料

Wistar雌性大鼠由山西医科大学实验动物中心提供，年龄体重相当。佐剂购自美国Sigma公司。北京中杉金桥生物技术有限公司提供生物素化羊抗兔IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c二抗、亲和素标记辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)。酶联免疫测定仪为该实验室购自美国Molecular Device产品。

1.2方法

1.2.1主动免疫动物模型的建立随机将11只Wistar雌性健康大鼠，分为对照组(n=6)和免疫组(n=5)。用合成的人AT1受体细胞外第二环肽段(AT1R-ECII)为抗原进行免疫，每2周加强免疫1次，每次免疫前鼠尾采血，-40℃备用。

1.2.2血清抗AT1R抗体的检测采用SA-ELISA法检测免疫雌鼠体内抗AT1R抗体产生情况[2]，并测定该血清抗体的类型及亚类，其中二抗浓度分别为IgA(1∶8 000)、IgM(1∶3 000)、IgG1(1∶6 000)、IgG2a(1∶6 000)、IgG2b(1∶8 000)、IgG2c(1∶8 000)，于405 nm波长处测定OD值。

1.3统计学方法

2结果

2.1建立主动免疫大鼠模型

到免疫4周时，大鼠血清中已明显检测出抗AT1R抗体，8周时达稳定值(稀释度1∶10时OD值2.99±0.11vs. 0.44±0.06，P<0.05，见图1)。

2.2免疫鼠血中抗AT1R抗体类型及亚类

用ELISA方法检测证明免疫雌鼠血清中抗AT1R抗体属于IgG类(OD值2.79±0.02 vs. 0.40±0.05，P<0.05)，而非IgM及IgA类(vs. 同期对照组，P>0.05,见图2)。该抗体以IgG2b亚型为主(OD值0.33±0.04 vs. 0.08±0.01，P<0.05)，极少部分属于IgG2a亚型(OD值0.11±0.01 vs. 0.07±0.01，P<0.05，见图3)。

图1　免疫不同时间段抗AT1R抗体水平值

图2　抗AT1R抗体的类型分布

图3　抗AT1R抗体亚类分布

3讨论

在先兆子痫发病机制的研究中，从发现抗血管紧张素Ⅱ1型受体的自身抗体(AT1-AA)存在后，AT1-AA与先兆子痫疾病发展的相关性引人关注。AT1-AA在疾病中发挥多种的病理生理效应，与该抗体的类型密切相关。但是由于临床研究的局限性，关于AT1-AA在先兆子痫疾病中的作用机制研究受到很大的限制。

AT1-AA与疾病的相关性研究大多数集中到动物身上，其中较为广泛采用的是主动免疫大鼠获取相应抗体而进行进一步机制研究。本实验通过免疫获得的抗AT1R抗体其性质属于IgG类免疫球蛋白，这与 Dechend等[3]证实的先兆子痫患者血中的AT1-AA类型恰巧一致，并且IgG是唯一可通过胎盘的免疫球蛋白，这一结果提示通过免疫大鼠获得的抗AT1R抗体与先兆子痫患者体内AT1-AA性质具有相似性。

本研究检测进一步发现，免疫大鼠血清中的抗AT1受体抗体大部分为IgG2b类，极少部分属于IgG2a。大鼠的IgG共有4个亚型，分别为IgG1，IgG2a，IgG2b， IgG2c，其中IgG2b和IgG2a类与FcRn结合力强，而IgG的胎盘穿透功能与IgGFc片段结构有关，说明免疫大鼠获得的抗AT1R抗体具有经胎盘传播的可能性。抗AT1受体抗体亚类主要为IgG2b，主要受辅助性T细胞1(Th1)型调节，是参与炎症相关的抗体类型，与先兆子痫患者体内表现炎症反应过度相吻合[4]。抗AT1R抗体亚类的研究，再次提示免疫鼠血中的抗AT1R抗体与临床上先兆子痫患者体内AT1-AA具有一致性基础。

综上所述，本研究利用主动免疫大鼠获得的抗AT1R抗体，能够成为先兆子痫发病机制研究的一种工具。

[参考文献]

[1]任玉玲，金达茂，马成文，等. 脑卒中患者血清抗血管紧张素受体Ⅱ1型和α1肾上腺素受体自身抗体的观察[J]. 中国神经免疫学和神经病学杂志，2005，12(1)：53.

[2]郑荣华，王澎，张苏丽，等.抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体阳性孕鼠模型的制备[J].中国心血管病研究，2010，8(4): 290-293.

[3]Dechend R, Dominik NM, Wallukat G,etal. AT1Receptor Agonistic Antibodies,Hypertension, and Preeclampsia[J]. Elsevier Inc. 2004，24:571-579 .

[4]郑荣华.抗AT1受体自身抗体对人体胎盘血管的收缩作用[D]. 太原：山西医科大学，2010.

本文编辑：王知平

·基础医学·

[作者简介]郑荣华，女，讲师，从事生理学教学工作及相关教学管理工作

[基金项目]国家自然科学基金青年科学 (30900584)

[中图分类号]R714.24+4

[文献标识码]A

[文章编号]1671-0126(2015)02-0001-03