恶性肿瘤患者胸腔积液结核杆菌DNA检测的临床意义

杨亚利，彭小东，韩文群

成都市第二人民医院 肿瘤科（成都 610017）

近年来，恶性肿瘤的发病率急剧增高，肺结核在全球的发病率呈增加趋势。大多数恶性肿瘤患者年龄较大，免疫力低下，因此合并肺结核的概率大大增加［1］。对于恶性肿瘤患者，胸腔积液的性质可能是结核性，也可能是癌性，也可能二者兼之。目前结核性胸膜炎的检测方法有胸膜活检、结核杆菌培养和涂片查结核杆菌等，但阳性率都较低。聚合酶链反应（PCR）技术自1985年以来因其快速、特异和敏感等优点已广泛应用于多个领域，取得了许多突破性进展［2］。本研究应用PCR技术检测恶性肿瘤患者胸水中结核杆菌DNA，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2013年1月至2014年12月成都市第二人民医院住院的恶性肿瘤（病理确诊）伴胸腔积液患者121例，其中，男67例，女54例，年龄40～80岁。排除肝硬化、风湿免疫系统疾病、高血压、糖尿病以及慢性支气管炎等疾病。

1.2 材料

结核杆菌培养基为罗氏培养基，由上海科兴生物科技有限公司提供。胸水标本来自于上述住院病人恶性肿瘤患者。结核杆菌引物及结核菌PCR诊断试剂盒，购自上海复华科技开发总公司生物技术开发中心。扩增仪购自华美生物工程公司。

1.3 检测方法

1.3.1 胸水涂片 离心（离心半径3cm，转速3 000r／min）取沉淀按常规方法涂片作抗酸染色镜检，结核杆菌培养鉴定按照中国防痨协会结核病细菌学检查方法进行。

1.3.2 PCR检测结核杆菌DNA 应用结核菌PCR诊断试剂盒，提取结核菌DNA，扩增过程中，92℃21min，92℃45s，55℃45s，72℃90s，循环35次，72℃5min延伸，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析，紫外检测仪300nm下观察，见123bp扩增带为结核菌DNA阳性，同时设人型结核菌DNA扩增结果作为阳性对照，并另设阴性对照。

1.4 统计学方法

以患者结核杆菌DNA阳性（编码1）和结核杆菌DNA阴性（编码0）为因变量Y，设咳嗽、咯血、胸痛、发热、盗汗、消瘦、贫血、性别、血性胸水、PPD试验、胸水ADA、LDH、CEA和GLU等为自变量危险因素，进行logistic回归分析，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 不同恶性肿瘤类型结核杆菌检测结果分析

121 例合并胸腔积液的恶性肿瘤患者，胸水涂片阳性率4.96%，胸水培养阳性率12.40%，而结核杆菌DNA阳性率15.70%，明显高于前两种检测方法。其中在各种类型恶性肿瘤中，肺癌结核杆菌DNA阳性率最高，达20.00%，食管癌发生率最低（表1）。

2.2 恶性肿瘤结核性胸水的多因素分析

对恶性肿瘤结核性胸水进行多因素分析，研究发现恶性肿瘤结核性胸水的危险因素为盗汗和胸水ADA水平高于正常，而与咳嗽、咯血、胸痛、发热、消瘦、贫血、性别、年龄、血性胸水、PPD试验、胸水LDH、CEA和GLU水平无关（表2）。

表1 不同恶性肿瘤类型结核杆菌检测结果分析［n（%）］

表2 恶性肿瘤患者发生结核性胸水的多因素分析

3 讨论

胸腔积液是胸膜腔内液体的异常积聚，其病因以结核和恶性肿瘤多见。结核性胸膜炎的确诊依据之一是在胸水中找到结核杆菌。一百多年来结核病的病原学诊断通常依赖于分支杆菌的抗酸染色和结核菌的培养，前者特异性和敏感性均低，后者敏感性低，且费时较长（通常4～8周），故两者在临床中的应用都受到了明显限制。另一种方法是胸膜活检，但胸膜活检取材不易，且阳性率偏低［3］。聚合酶链反应（PCR）技术在传统检测方法检查结果为阴性的标本包括胸水中，也能检测结核菌DNA的存在，从而大大提高了结核病的诊断效率。整个过程仅需1～2d，尤其适合于结核性胸腔积液的早期诊断［4－5］。

本研究采用恶性肿瘤胸水PCR扩增的方法检测结核杆菌DNA，结果发现121例合并胸腔积液的恶性肿瘤患者，胸水涂片阳性率4.96%，胸水培养阳性率12.40%，而结核杆菌 DNA 阳性率15.70%，远远高于胸水涂片和培养两种检测方法。对恶性肿瘤结核性胸水进行多因素分析发现，恶性肿瘤结核性胸水的危险因素为盗汗和胸水高ADA水平，而与咳嗽、咯血、胸痛、发热、消瘦、贫血、性别、年龄、血性胸水、PPD试验、胸水LDH、CEA 和GLU水平无关。

本研究发现在各种类型恶性肿瘤中，肺癌结核杆菌DNA阳性率最高，达20.00%。很多学者注意到某些结核杆菌与病毒一样可引起恶性肿瘤。迄今为此，已在宫颈癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等多种肿瘤组织中分离出结核杆菌［6－7］。关于恶性肿瘤与结核感染的联系，一般有两种假设：一是结核杆菌感染发生在癌变之后，即过路感染；二是结核杆菌感染发生在癌变之前，并在瘤的形成中起一定作用［8］。研究［9］表明，细菌持续感染引起的慢性炎症是恶性肿瘤发生的重要危险因素，可能通过炎症介质（如NO等）诱导癌变。

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，其病理变化过程中有大量的T淋巴细胞浸润、活化，并伴有单核细胞浸润、活化和转变成巨噬细胞。腺苷脱氨酶（ADA）是活动性肺结核辅助性T淋巴细胞CD4＋的一种标志物，结核病是T淋巴细胞介导的细胞免疫［10］。本研究也发现ADA水平增高是恶性肿瘤结核性胸膜炎的危险因素，与上述研究结果一致。

总之，对合并胸腔积液的恶性肿瘤患者应常规行胸水结核杆菌DNA检测，可降低结核病的漏诊率，尤其应该注意合并盗汗和胸水高ADA水平的肿瘤患者。

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