木霉菌与毛壳菌组合防治两种蔬菜病害

柳婷婷

（山东省聊城市植保站，聊城 252053）

1 菌株研究概况及现状

1.1 木霉T95和T88菌株

木霉 (Trichoderma)是一类重要的植物病害的生防真菌，隶属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丝孢科，常见于土壤中、植物残体、植物的根围、叶围、种子、球茎表面及动物粪便上，并对许多真菌有拮抗作用。常见的重要菌种有绿色木霉、哈茨木霉、康宁木霉等。

国内研究已证明哈茨木霉 （TrichodermaharzianumRifai）T88菌株 （以下简称 T88）和绿色木霉 （TrichodermaatrovirideBissett）T95菌株 （以下简称T95）能对严重危害杨树烂皮病菌和杨树水泡溃疡病菌有拮抗和重寄生现象[1]。

1.2 球毛壳ND35菌株

球毛壳 (C.globosum)ND35菌株是分离自毛白杨的内生真菌优势菌株，并显示对几个普通果树和森林病原真菌等多种病原菌的拮抗活性。另外，已经证明了ND35菌株及其产生的次生代谢物质的具有较强的生防活性[2]，能对多种植物的根部病害、叶部病害、枝干病害等多种病害的病原菌产生抑制作用，并能够促进寄主植物生长。

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 供试植物材料

黄瓜：津研四号 （新泰市某种业有限公司）菜豆：良选一号地豆王 （天津市某种业）

2.1.2 菌种来源

生防菌种:球毛壳 （Chaetomium globosum）ND35菌种、哈茨木霉 （Trichoderma harzianum）T88和绿色木霉（Trichoderma viride）T95 菌株。

病原菌种：黄瓜猝倒病菌 （Pythium aphanidermatum）Pa菌株和 （Rhizoctonia solani）Rs-1菌株。

以上菌株均由山东农业大学植物病理系资源微生物研究室提供。

2.2 室内平皿对峙培养

在超净工作台内用灭过菌的直径6mm的打孔器分别取同质同量的新鲜培养的T95、T88及ND35和Pa、Rs-1菌丝块，分别移接到已制备好的直径为90mm的PDA平板培养基上进行对峙培养，距平皿中心15mm处接生防菌菌丝块，以平皿中心为对称点的另一侧同时接病原菌菌丝块，以病原菌单置平板培养基上培养做对照，各3个重复，置于25°C下培养。3天后测量两接种点连线上各菌落半径，计算病原菌生长抑制率。同时做木霉菌和毛壳菌的对峙培养，方法相同。

当两菌落接触相交后，观察记载生防菌对病原菌的抑制、包围、侵入并占领病原菌营养空间的过程。

2.3 温室中的生防试验

2.3.1 对黄瓜猝倒病的防治试验

营养盆内播种刚萌发的黄瓜种子，营养土中分别掺入生防菌的麦粒培养物，每盆3g。7天后接种含病原菌Pa的麦粒培养物，以只接种病原菌Pa培养物而不接生防菌的为对照。每处理4盆，每盆3株，接种4天后调查发病情况，计算防治效果。

防治效果%=（对照组发病率-防治组发病率）/对照组发病率×100%

2.3.2 对菜豆幼苗立枯病的防治试验

营养盆内播种刚萌发的菜豆种子时，营养土中分别掺入生防菌的麦粒培养物，每盆3.5g。同时根部接种长满生防菌的PDA菌丝块，每株2块，要注意长菌丝的一面靠在根上。接种生防菌7天后接种病原菌菌饼，并加掺病原菌的麦粒培养物每盆3.5g左右。同时以只用土壤培养的为空白对照。每处理6盆，每盆3株。7天后调查病情指数，计算防治效果。

防治效果=（对照组病情指数-处理组病情指数）/对照组病情指数×100%。

豆立枯病病害严重度分级标准 （方中达，1998；田淑慧，2006）：

(y=根部病斑横向直径/根周长)

0级：根部无病斑；

Ⅰ级： 0＜y≤25%；

Ⅱ级：25%＜y≤50%；

Ⅲ级：50%＜y≤75%；

Ⅳ级： y＞75%。

3 结果与分析

3.1 平皿对峙培养结果

试验结果表明，木霉T88和T95以及毛壳菌ND35对两种病原菌腐霉Pa和立枯丝核Rs-1均有明显的抑制作用，生长抑制率分别为74.4%、79.3%和47.0%，而绿色木霉T95的拮抗效果最好。在木霉菌与毛壳菌的对峙培养中，T95和T88对ND35的生长抑制率分别为29.1%和32.8%，这可能是由于木霉菌的生长速度较快，迅速占领并扩大生存空间所致。

表1 ND35、T88和T95与Rs-1对峙培养结果

表2 3种生防菌与黄瓜猝倒病病菌Pa对峙培养结果

3.2 对黄瓜猝倒病的生防效果

因为黄瓜苗很小，受腐霉侵染发病的苗均因根茎腐烂而迅速倒伏，所以无法分级记数。仅统计发病率，计算防治效果。试验结果见图1，黄瓜幼苗只接种毛壳菌ND35的防治效果最好，达86.7%，而只接种木霉菌T88和T95及两种生防菌组合防治的效果都不及前者，分别为46.7%，73.3%，55.3%，80%。可以看出，栽培条件下ND35对黄瓜猝倒病的防治作用十分明显，这可能是ND35的几种生防机制综合作用的结果。分析其原因可能是提前3天向黄瓜苗接种的ND35能够定殖于植物根部，激发了植物的抗病防御反应，同时ND35又对病原菌Pa有很强的抑制作用如重寄生作用等。

3.3 对菜豆幼苗立枯病的生防效果

菜豆苗从感染R.solani到发病枯死，通常需要一个较长的时间。因此实验中选择了接种病原菌后7天取样调查病情指数。从试验结果 （图2）可以看出，菜豆幼苗只接种木霉菌T88和T95的防治效果最好，达91.0%，而只接种毛壳菌ND35及两种生防菌组合防治的效果都稍低，分别为77.4%，45.5%，27.3%。可以看出，栽培条件下木霉菌对菜豆立枯病的防治作用十分明显，木霉菌与毛壳菌的组合防治效果则明显低于其中一种菌的单独防治效果。

图1 木霉菌和毛壳菌对黄瓜猝倒病的生防效果

图2 木霉菌和毛壳菌对菜豆幼苗立枯病的生防效果

4 讨论

试验结果表明，T88、T95和ND35对P.aphanidermatum和R.solani（即Pa和Rs-1）两种病原真菌菌丝生长的抑制作用效果是不尽相同的。ND35与Rs-1对峙后，能形成明显的抑菌带，且对峙后期出现菌丝缠绕，平行生长等现象。由于木霉菌T95、T88生长速度较快，占领生存空间早，且能产孢较多，因此抑制效果要好于球毛壳菌ND35。

在栽培条件下球毛壳菌ND35对黄瓜猝倒病有较好的防治效果，木霉菌T88和T95则防治菜豆立枯病非常有效，而这两种生防菌的组合防治对这两种蔬菜病害的防治效果都比单独一种生防菌的效果低得多。因此推荐使用毛壳菌ND35防治黄瓜猝倒病，木霉菌T88和T95防治菜豆立枯病，不建议使用组合防治，以免降低生防效果。

随着人类环境保护意识的增强，尤其是杀菌剂的大量使用后的恶果，开发出具有生防潜力、活性的各种微生物来控制管理各类病害的发生是人类要迫切需要解决的问题。因此木霉菌和毛壳菌在农业中的实际应用，将能够在园艺作物、农作物以及森林枝干等病害管理的安全和环保方面，开拓一条有前途的新道路，具有广阔的应用前景。

[1]高克祥，刘晓光.木霉菌对杨树树皮溃疡病菌拮抗作用的研究.林业科学，2001，37(5):82～88

[2]Gao Kexiang，Liu Xiaoguang,et al.Biocontrol potential of Chaetomium spirale ND35 against canker of apple tree(in English).In:Yang Q(ed).Biological Control and Bio-technology.Harbin:Heilongjiang Science and Technology Press，2003，132～140