自拟治疗弓形虫病中药复方的筛选试验

吕江（河北省张家口市动物卫生监督所 075000）丁勇（河北省怀安动物疫病预防控制中心 076150）

自拟治疗弓形虫病中药复方的筛选试验

吕江（河北省张家口市动物卫生监督所 075000）丁勇（河北省怀安动物疫病预防控制中心 076150）

研究以寻求高效、安全治疗弓形虫病的复方中药为目的，用自拟治疗弓形虫病的方剂对人工感染的小白鼠进行复方中药的筛选试验。结果表明，筛选出的复方中药是低毒、安全、疗效确切的抗弓形虫病药物，为临床应用提供了试验依据。

中药方剂；弓形虫；筛选试验；安全性试验

弓形虫病是刚第弓形虫引起的一种人和多种动物共患寄生虫病。这一病原体于1908年由Nicolle和Manceaux在北非突尼斯的啮齿类梳趾鼠体内发现，并正式命名。现在猪弓形虫病多以隐性感染、继发和并发感染等形式存在于一些猪场。不少病例报告以及血清学调查结果证明，猪弓形虫病仍然是养猪生产以及公共卫生的一大隐患[1]。因此，本病给人类健康和畜牧业发展带来很大危害和威胁。鉴于原有常用治疗药物，包括磺胺类、乙胺嘧啶、螺旋霉素及氯化林可霉素等，单或联用，均存在疗程长，毒副反应较多，疗效尚不理想、且不能根治等问题，迫切需要探索新的治疗方法和寻找抗弓形虫药[2]。针对存在问题，我们进行本试验，为寻求一种简便、高效治疗弓形虫病的中药方剂提供一定的理论根据。

1 材料和方法

1.1 试验材料

小白鼠为河北北方学院物资科动物室繁殖的昆明种，体重为18～25g的健康小白鼠，雌雄各半。

试验药物：方剂一：黄芪、白术、青蒿、草果、槟榔。方剂二：黄芩、甘草、槟榔、黄芪。所有中药均购自张家口市南山堂大药房。

1.2 试验方法

1.2.1 弓形虫速殖子悬液的制备

将本室保种的RH株弓形虫速殖子常规腹腔接种小鼠数只，72h后断颈处死，收集腹水，用生理盐水洗涤并稀释，暗视野下计数，调整虫数浓度至5×104/ml，试验时每只小鼠腹腔注射0.2ml。

1.2.2 复方中药的制备

复方中药水煎液的制备：将配好的复方中药置砂锅内，加入6～8倍的冷水浸泡30～60min，用火加热，开始用强火，沸后改用文火，煮沸30min，用纱布过滤。药渣加3～5倍量水继续按上法煎煮，沸后煎煮30min，滤过，合并得两次滤液，于水浴上浓缩成每毫升相当于原药材1g的药液，即配成100%的水煎剂，经高压灭菌20min，冷却后置冰箱中备用。试验前按需要稀释。

复方中药醇提液的制备：取原药100g，加95%乙醇200ml浸泡24h，倾取上层液过滤于蒸发皿内，残留再加100ml乙醇提取二次，合并提取液滤液，自然干燥得提取物。提取率为9.12%。临用前按需要进行稀释。

1.2.3 试验动物分组

筛选试验60只感染弓形虫的小鼠随机分为3组，每组20只，第1组为弓形虫阳性对照组（A组）；第2组为方剂一治疗组（B组），第3组为方剂二治疗组（C组），感染弓形虫4h后灌胃，每次0.5ml，连续14天给药，每天1次；另取20只未感染小鼠每天灌胃0.5ml生理盐水作为对照组（D 组）。

急性毒性试验：取健康小白鼠30只，雌雄各半，随机分成6组，每组5只，分别采用水煎剂灌胃和腹腔注射醇提液两种给药途径，按每kg体重5g、10g和15g三个剂量，使用时加适当的水使每只小白鼠灌胃量在0.5ml。

亚慢性毒性试验：取健康小白鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，第1组为对照组，第2组和第3组分别将复方中药按10%和20%比例混入小白鼠饲料中，然后做成块状饲料喂给小白鼠。

2 结果

2.1 复方中药的筛选试验结果

2.1.1 自拟方剂对正常小鼠影响

生理盐水对照组小鼠在给药期间未出现异常反应，小鼠死亡时间与正常小鼠死亡时间差别无显著性（P＞0.05），表明自拟方剂对小鼠无明显毒害作用。

2.1.2 自拟方剂对感染小鼠腹水中弓形虫数量的影响

在感染弓形虫24h和72h分别从各组随机取5只小鼠解剖，其中常规腹腔接种RH株弓形虫速殖子的小白鼠72h后大肠严重便秘，腹水明显增多，取腹水计数虫体。结果见图1，2，表1。生理盐水对照组小鼠于存活1月后解剖，取腹水镜检，未见虫体。

图1 常规腹腔接种RH株弓形虫速殖子的小白鼠72h后大肠便秘

图2 常规腹腔接种RH株弓形虫速殖子的小白鼠72h后腹水明显增多

表1 感染弓形虫24h和72h小白鼠腹水中虫数（个/ml）

2.1.3 各试验组小白鼠平均存活天数的比较

阳性对照组小白鼠平均存活5.6d，方剂二治疗组小白鼠平均存活12.8d，生理盐水对照组小鼠在第21天时死亡1只。经统计学分析，与阳性对照组小白鼠生存时间相比，方剂二治疗组小白鼠生存时间有显著性延长（P＜0.01）。详细结果见表2。

2.2 复方中药的安全性试验结果

2.2.1 急性毒性试验

用药后每天观察小白鼠的状况，连续7天，各组小白鼠均无死亡，未出现中毒症状。在此基础上，另取20只小白鼠分成两组，按kg体重20g剂量采用上述两种途径给药，24h内未见死亡，72h后又重复给药一次，并连续观察7天，小白鼠无死亡，且健康活泼，食欲良好。结果表明该复方中药LD50＞20g/kg，按急性毒性分级属无毒物。

2.2.2 亚慢性毒性试验结果

在90天试验期内观察，各组小白鼠饮食、粪便、体态、运动、声、光反射均未见异常，无死亡。血常规各项指标、肝体比和肾体均属正常（表3、表4）。采血致死后尸体剖检，各组小白鼠心、肝、脾、肺和肾的大小、颜色、质地均未见异常。

3 结论与讨论

自拟方剂阴性对照组小鼠在用药期间无任何不良反应，且其生存时间与正常小鼠生存时间一致，表明自拟方剂本身毒性较小，与文献报道的乙胺嘧啶的毒副作用（肝肾功能的损害，骨髓抑制、过敏、致畸及消化道不适等不良反应）则有明显的差异[3]。因此自拟方剂是低毒可靠的药物。

表2 试验组与阳性对照组小白鼠平均存活天数的比较

表3 血常规检查结果

表4 肝体比、肾体比测定结果

试验观察了感染弓形虫后不同时间（24h、72h和死亡后）各试验组与阳性对照组小鼠腹水中虫体数量的变化，结果表明自拟方剂经口灌服能明显减少感染小鼠腹水中虫体数量，表明自拟方剂能明显抑制弓形虫的繁殖。同时从表1可见方剂二对感染小鼠腹水中弓形虫数量的影响更显著（P＜0.01），通过进一步观察小鼠存活天数，方剂二能有效延长小鼠存活时间，治疗效果更明显，方剂组成更合理。该方剂中黄芪补气，槟榔杀虫，黄芩抗菌、解毒，甘草调和诸药，显著提高机体的细胞免疫应答水平，从而提高了药物的使用效率[4,5]。

弓形虫Rh株属于强毒株，小白鼠感染1个滋养体后即可引起死亡。感染10个滋养体7～8d内死亡率达100%。Grimwood（1980）腹腔接种小白鼠后，小白鼠平均存活5d[6]。曾艳波等报道，小鼠感染弓形虫后，死亡时间通常在5.5～7d[7]。于恩庶报道试验小鼠3d内全部死亡。本试验方剂二治疗组平均存活时间为12.8d，是对照组存活时间（5.6d）的2倍多，按照徐淑云[8]疗效判定标准判定方剂二治疗弓形虫病有效。

复方中药对小鼠进行的急性毒性试验和亚慢性毒性试验，采用水煎剂醇提液两种给药途径，按kg体重5g、10g和15g三个剂量以及在90天试验期内的观察。结果表明，用药后各组小白鼠均无死亡，未出现中毒症状。血常规检查、肝体比、肾体比、尸体剖检、病理组织切片检查均无异常。说明该复方药物在适宜剂量时属无毒物。本试验对小鼠进行的急性毒性试验和亚慢性毒性试验观察，采用两种给药途径，三个剂量证明该方剂在适宜剂量时安全可靠的。

综上所述，自拟复方中药是低毒，疗效确切的抗弓形虫药物，为临床应用提供了试验依据。

[1]李祥瑞.弓形虫病的流行的新趋势[J].动物医学进展，2010，31（S1）：234-236.

[2]王明建，鞠玉林，高威，等.4种中药治疗急性弓形虫感染小鼠的疗效观察[J].中国兽医杂志，2010，46（1）：32-33.

[3]司开卫,李哲,程彦斌.扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病的效果[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2001，19（1）:59-60.

[4]蒋蔚，陈永军，张花景，等.磺胺氯吡嗪钠中药复方对小鼠体内抗弓形虫疗效的观察[J].畜牧兽医学报，2013，44（12）：2022-2028.

[5]万红娇，杨翠萍，蔡长春，等.自拟抗弓形虫汤对小鼠急性弓形虫感染的治疗机制研究[J].中国热带医学，2006，6（9）：1551-1553.

[6]于恩庶.弓形虫病学 [M].福建：福建科学技术出版社，1992:45,240.

[7]曾艳波，朱顺海，韩红玉，等.不同保种时间及复苏代次弓形虫对小鼠致病性研究[J].动物医学进展，2011，32（6）：55-59.

[8]徐淑云.药物试验方法学习[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1995:13-20.

河北省教育厅自然基金项目（2007103）。

丁勇（1970.3-），男，畜牧兽医师，主要从事畜牧兽医临床、实验室化验、疾病预警、动物疫病防控技术、生物制品研究与推广工作。