LRP16和E-cadherin在子宫内膜腺癌中的表达研究

刘 玲，詹 平，汪春燕，聂 丹，钱燕萍，毛熙光

(泸州医学院附属医院妇产科，四川泸州646000)

LRP16基因是ER信号通路上的应答基因，其 表达依赖雌激素，可作为雌激素调控细胞功能或形态特点的中间信号因子［1］，其高表达增强了子宫内膜癌细胞的侵袭转移能力，说明LRP16基因可能促进子宫内膜癌的侵袭转移［2］。E-钙黏着蛋白(E-cadherin)与E2信号通路有关，是ER直接作用的靶基因［3］。研究发现LRP16过表达Ishikawa细胞中E-钙黏着素基因的蛋白水平显著下调，由此推测LRP16通过下调E-钙黏着素水平增加其侵袭能力［4］。子宫内膜癌组织中LRP16蛋白的表达情况及其与E-cadherin之间的调控关系尚不清楚，为近一步证实LRP16对子宫内膜癌发生发展可能的作用，本研究采用免疫组化方法检测比较子宫内膜腺癌组织中LRP16表达情况，分析子宫内膜腺癌中LRP16蛋白与临床病理特征及与E-cadherin表达的关系，以探讨两者在子宫内膜腺癌病理进程中的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2009年10月至2011年3月在泸州医学院附属医院因子宫内膜癌行手术治疗患者的病理标本共60例(其中高分化腺癌18例、中分化腺癌26例、低分化腺癌16例)。根据2009FIGO子宫内膜癌手术病理分期，Ⅰ期24例，Ⅱ期20例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例。术前均未接受放、化疗和激素治疗。平均年龄(54．52±5．79)岁。正常子宫内膜组织来源于同期因子宫肌瘤行子宫全切除术标本共20例，术后病理学证实子宫内膜无恶性病变及其他病变存在，平均年龄(51．04 ±5．57)岁。

1.2 方法

所有新鲜标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm切片。兔抗人多克隆的LRP16抗体、鼠抗人单克隆E-cadherin抗体和SP-9001试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。两种抗原均行微波修复，按试剂盒说明书操作，苏木素复染。用已知的阳性片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。均采用采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP)染色。

1.3 结果判断

LRP16阳性结果判断:评分标准参照田丽媛等报道的方法［5］。LRP16核内、胞浆内着色分别记录。每张切片低倍镜下选取典型肿瘤部位，高倍镜(放大400倍)下观察并拍摄，计数1 000个肿瘤细胞，阳性细胞数量和着色强度分别记录并进行量化处理，结果判定由病理科两位医师分别测定并统计。(1)着色强度按下列标准评分:无色(阴性)0分，淡棕黄色(弱阳性)1分，棕黄色(阳性)2分，棕褐色(强阳性)3分。(2)阳性细胞数量按下列标准评分:无阳性细胞记为0分，＜30% 为1分，30%～60%为2分，＞60%为3分;(3)上述两者评分之和，0-1分者为(-);2分为(+);3-4分为(++);5-6分为(+++)。E-cadherin阳性结果判断:评分标准参照Birner法［6］。由两名病理学专家双盲法观察切片，若两专家结果不一致，重新判定。染色结果以半定量方法进行判定，根据染色的强度和范围评分。先按染色强度评分:1分:表达缺失或染色弱;2分;中等强度染色;3分:强染色。再按阳性细胞数的百分比进行评分:1分:阳性细胞数＜10%;2分:阳性细胞数10%～50%;3分阳性细胞数51%～80%;4分:阳性细胞数＞80%。两项评分相乘所得的积分为得分:不管其染色强度，只要阳性细胞数＜10%者为(-);3分为(+);4～5分为(++);6～7分为(+++)。表达阳性率=根据评分判为(+)例数/总例数×100%

1.4 统计学处理

应用SPSS17．0软件包进行统计分析，两组间比较采用 Mam-Whitneyu U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，P＜0．05为有统计学意义。

2 结果

2.1 LRP16在子宫内膜腺癌中的表达

LRP16表达于细胞核或细胞浆，呈浅黄色或棕褐色，在肌层及血管中未见表达(见图1)。LRP16在各组中的表达情况见表1。Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织中，LRP16细胞浆和细胞核表达均高于对照组，差异有统计学意义(P＜0．05);子宫内膜腺癌G1、G2、G3级组织中LRP16浆和核表达均高于对照组，差异有统计学意义(P＜0．05)。对LRP16表达强度评分与组织学分级进行相关分析，发现LRP16核表达与组织学分级呈正相关(r=0．465，P=0．00)，而与手术病理分期无相关性(r=-0．233，P=0．073);LRP16 浆表达与手术病理分期呈负相关(r=-0．33，P=0．01)，而与组织学分级无相关性(r=-0．067，P=0．61)。

2.2 E-cadherin在子宫内膜癌中的表达

图1 子宫内膜癌组织中LRP16表达情况

表1 细胞内不同部位LRP16蛋白的表达与临床病理特征

E-cadherin完全表达于子宫内膜组织的腺上皮细胞细胞膜，呈棕黄(褐)色，呈线性分布(见图2～4)。E-cadherin在各组中的表达情况见表2。子宫内膜腺癌组中E-cadherin的阳性表达率为86．67%，而正常组中为90．00%，二者差异无统计学意义(P＞0．05)。Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织中，E-cadherin表达均低于对照组，差异无统计学意义(P＞0．05);子宫内膜腺癌 G1组织中E-cadherin表达低于对照组，差异有统计学意义(P＜0．05);G2组织中E-cadherin表达高于对照组，差异有统计学意义(P＜0．05);而G3组织中其表达高于对照组，差异无统计学意义(P＞0．05)。对E-cadherin表达强度评分与组织学分级进行相关分析发现，E-cadherin的表达与组织学分级无相关性(r=-0．033，P=0．804)，E-cadherin 的表达与手术病理分期无相关性(r=0．107，P=0．417)。

图4 E-cadherin在子宫内膜癌G3组织中的表达(SP×200)

表2 不同分化程度的子宫内膜腺癌中E-cadherin的阳性表达情况(例)

2.3 LRP16与E-cadherin在子宫内膜腺癌中表达的相关性

对60例子宫内膜腺癌LRP16与E-cadherin的表达进行等级相关分析发现，子宫内膜腺癌胞核中LRP16表达和E-cadherin的表达差异无明显相关性(P＞0．05)，胞浆中 LRP16表达和E-cadherin的表达差异无明显相关性(P＞0．05)。(见表3)。

表3 LRP16在细胞不同部位着色强度与E-cadherin关系

3 讨论

3.1 LRP16表达与子宫内膜癌的关系

研究发现LRP16在多种恶性肿瘤中表达，且表达水平与肿瘤组织学分级及临床分期相关，而目前LRP16在肿瘤的侵袭和转移中的作用尚不甚明确。臧丽等［7］研究发现LRP16在乳腺癌中的表达与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、临床分期、ER表达呈正相关。梁朝阳等［8］研究显示，LRP16基因在肺腺癌与肺鳞癌组织中呈过表达，且在有淋巴结转移组呈过表达，与肺癌的分期相关。田丽媛等［5］研究表明LRP16在癌细胞浆和胞核内均有分布，LRP16在核内的表达强度与浆液性卵巢癌临床分期的高低呈正相关。陈美霞［9］等研究发现LRP16在子宫内膜腺癌细胞中均有表达，其在胞浆中的表达与手术病理分期呈明显负相关，LRP16在胞浆中的表达可能提示预后良好。刘佳等［10］研究发现LRP16 mRNA在子宫内膜癌组织中存在表达缺失或低表达，其阳性表达率与组织学分级、手术-病理分期及子宫肌层浸润深度均有关。

本课题前期研究发现子宫内膜癌组织中LRP16 mRNA的表达明显高于正常子宫内膜组织，且LRP16蛋白产物核表达水平与癌细胞的分化程度呈负相关［11］。本研究显示LRP16表达于胞核或胞浆，呈浅黄色或棕褐色，在肌层及血管中未见表达，由此推测LRP16可能并不直接参与子宫内膜癌局部侵袭转移及远处血行转移，其参与子宫内膜癌的发生发展过程可能有需其他信号途径的协同参与。本研究亦发现Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织中，LRP16浆和核表达均高于对照组，子宫内膜腺癌G1、G2、G3组织中LRP16浆和核表达均高于对照组，与本课题前期结果相一致［11］。同时，研究显示LRP16核表达与组织学分级呈正相关，而与手术病理分期无相关性;LRP16浆表达与患者的手术病理分期呈负相关，而与组织学分级无相关性，由此推测可能LRP16核表达提示预后不良，LRP16浆表达提示预后良好，可能LRP16在组织细胞的不同部位表达存在某种反馈调节机制，发挥恶性转变及保护作用的双重调节。由此我们推测LRP16在子宫内膜癌的发生和发展中发挥重要作用，可能与子宫内膜癌的侵袭、转移和预后相关。

3.2 E-cadherin与子宫内膜癌的关系

E-cadherin是一种Ca2+依赖性细胞黏附分子，其结构和功能的变化通过影响细胞的脱落与再附着而直接关系到细胞的生物学行为的改变，表达下降或基因突变等使E-cadherin粘附系统紊乱，导致E-cadherin功能降低，可降低细胞间的粘附作用［12-13］，研究发现子宫内膜癌组织中存在E-cadherin的表达降低现象［14］，E-cadherin作为参与细胞间粘附作用的重要粘附分子，它的表达下降与子宫内膜癌细胞间的粘附力下降密切相关，可能参与子宫内膜癌细胞的浸润转移过程。本研究结果显示E-cadherin定位于细胞一细胞交界处，呈线性、均匀一致，E-cadherin可能与上皮细胞间粘附的功能有关。本研究亦发现Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织E-cadherin表达均低于对照组，子宫内膜腺癌G1组织中E-cadherin表达低于对照组，而G2、G3组织中E-cadherin表达高于对照组;但E-cadherin的表达与子宫内膜癌病理分级及分期无相关性，与Feng［14］的研究结果不一致，可能因选择的病例选择样本量小、病例临床病理因素构成比不同，导致统计分析的结果存在偏差。因此，进行大样本的E-cadherin表达与子宫内膜癌临床病理因素的联系的分析可能有助于得出较为肯定性的结论。

3.3 LRP16与E-cadherin在子宫内膜癌中的关系

目前越来越多研究致力于探讨LRP16对肿瘤侵袭转移的影响。韩为东等从细胞水平阐明LRP16基因通过下调E-cadherin的表达促进肿瘤侵袭转移，LRP16在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin表达呈负相关［15］，本研究对60例子宫内膜腺癌中LRP16与E-cadherin的表达情况分析，LRP16与E-cadherin表达间未显示出相关性，基于子宫内膜癌Ishikawa细胞系中的研究结论在组织中没有得到证实，可能由于免疫组化方法对分析蛋白间的关系缺乏灵敏性。因此LRP16与E-cadherin在子宫内膜癌侵袭和转移中的作用还需要深入研究。

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