三氮唑类抗真菌药物的合成及其生物活性检测

张峥++张建峰++谢小强

摘 要：为了探讨三氮唑类抗真菌药物的合成方法和生物活性检测，将间二氟苯作为原料，采用傅里德-克拉夫茨反应（下简称“傅-克反应”）合成中间体物质，再经过缩合、亚甲基转移、开环等合成反应制得氟康唑。选择白色念珠菌和黑曲霉作为抑菌活性检验参照物，利用PDA培养法培养两种真菌，接种合成氟康唑，并记录抑菌活性。根据选择的对照药物和氟康唑抑菌活性对比实验显示，氟康唑和对照药物对白色念珠菌的抑制作用非常明显，但对黑曲霉的抑制作用不明显，同时氟康唑的抑菌作用明显高于对照药品。由此可知，三氮唑类抗真菌药物是一种合成抗菌药物，其合成过程可在实验室内完成，较为简便，同时这种药物对真菌的抑制作用比较明显，具有极大的临床应用价值。

关键词：唑类抗真菌药物；合成方法；氟康唑；中间体物质

中图分类号：TQ463 文献标识码：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2015.22.098

唑类抗真菌药物早在20世纪60年代末就已经被研发和应用，发展速度较快，对真菌的抑制作用非常好，但随着药物应用范围的不断扩大，耐药菌株数量也在不断增加，因此研究者还在不断完善这类药物，以求研制出药效更好的药物。本文主要研究三氮唑类抗真菌药物的合成方法和生物活性检验效果，具体如下。

1 材料及方法

1.1 三氮唑类抗真菌药物的合成

1.1.1 实验材料

合成实验原料为间二氟苯，实验仪器包括恒温水浴锅、蒸发仪、真空泵、紫外线分析仪、搅拌器、烘干箱、调压器、红外光谱仪、核磁共振仪、熔点毛细管。

1.1.2 实验原理

以间二氟苯为原料，通过傅-克反应制得中间体物质（2-氯-2，4-二氟苯乙酮），之后利用缩合反应将1，2，4-三氮唑（一分子量）接入中间体当中，得到2，4-二氟-2（1H-1，2，4-三氮唑-1）-苯乙酮盐酸盐。将实验环境调节为碱性，利用碘化后的三亚基亚砜对盐酸盐的羧基进行亚甲基转移反应，制备得到甲磺酸盐，最终利用三氮唑将氧环开环后即可得到氟康唑。

1.1.3 实验方法

将11.3 g间二氟苯药粉与14.7 g无水三氯化铝混合，在冰浴下搅拌均匀，缓慢加入氯酰氯，然后将溶液转入室温环境中连续搅拌3 h，搅拌后将混合液倒入冰水当中。萃取二氯甲烷，并干燥无水硫酸钠，过滤和蒸发之后得到的白色针状结晶体即为中间体物质。

提取氟康唑的具体实验步骤为：①混合碳酸氢钠和三氮唑，然后用甲苯溶解混合物质，并将溶解后的物质放入三口瓶中加热回流；②用甲苯溶解中间体物质，然后将溶解液滴入三口瓶当中，反应生成的水利用分水器分离，并将溶液温度冷却到室温，采用减压蒸发的方式去除甲苯，再用乙酸乙酯和正己烷同体积混合液洗涤得到的固体，最终得到淡黄色结晶物质；③利用甲苯溶解该淡黄色结晶物质后进行浓缩，加入乙酸乙酯、甲磺酸，析出甲磺酸盐结晶体；④使用无水碳酸钾溶解该甲磺酸盐结晶体，并加入三氮唑，将反应温度设定为90 ℃，并连续搅拌4.5 h，冷却后加入氯仿进行提纯，并用水清洗，最后干燥硫酸镁，减压蒸发得到的结晶物即为氟康唑。

1.2 氟康唑的体外抑菌活性实验

1.2.1 实验材料

实验材料为合成后的氟康唑药剂，对照药剂为2-（2，4-二氟苯基）-3-（1H-1，2，4-三唑-1-基）-1，2-丙二醇（下简称“对照药剂”）。实验真菌为白色念珠菌和黑曲霉。实验仪器有超净工作台、恒温培养床、灭菌器、电子天平和恒温水浴锅等。

1.2.2 实验方法

将200 g马铃薯切成小块放入1 000 mL水当中，将温度设定为80 ℃，浸泡超1 h。用纱布过滤液体，并在100 Pa压力下灭菌，得到马铃薯液。在马铃薯液中加入2 g葡萄糖，煮沸后放入琼脂，边加热边补充水分，在二次高压灭菌后制得PDA培养基。

在培养基斜面上分别接种白色念珠菌和黑曲霉，然后在29 ℃的恒温培养箱内进行培养。培养时间控制在24 h左右，这样就可以使其保持在对数生长期。利用接种环挑出培养后的菌株，放入无菌蒸馏水当中充分震荡，使其能够混合均匀。

选择氟康唑和对照药剂各10 mg，用氯仿进行溶解，然后将菌液接种在无菌培养基上，并用滤纸蘸取药液，用吹风机将其风干后放在菌液接种部位的正中央，在恒温培养箱内进行培养，时间为2 d，观察接种菌落的变化。

2 结果

实验结果显示，在同样的接种浓度下，氟康唑和对照药剂对白色念珠菌均有抑制作用，但两种药剂对黑曲霉的抑制作用不明显，其中，氟康唑的抑制活性明显高于对照药剂。将抑制后的菌株烘干，氟康唑抑制的白色念珠菌干重为0.024 g，而对照药剂抑制的白色念珠菌干重为0.051 g。

在抑制前，黑曲霉的干重为0.099 g，抑制后，氟康唑的干重为0.053 g，而对照药剂为0.072 g。由此可知，两种药剂对黑曲霉的活性也有一定的抑制作用，但相比于白色念珠菌，对黑曲霉的抑制性较低。其中，氟康唑对白色念珠菌和黑曲霉的抑制作用均大于对照药剂。

3 讨论

三氮唑类药物属于抗生素之一，其主要针对真菌进行治疗。早在20世纪60年代末期，国际医学界就研发出了克霉唑和咪康唑这两种唑类药物，并逐步衍生出三氮唑类药品，其中以氟康唑、伊曲康唑等的应用最为广泛。但随着这些药物应用范围的不断扩大，氟康唑的抗菌菌株数量大幅度提升，而伊曲康唑在服用后所产生的不良反应率较高，因此现代医学者还在不断探索新的药物。

氟康唑对真菌的抑制作用明显，且在发挥药效的过程中不会对人体健康细胞造成影响，也不会破坏细胞膜的功能和结构。本次实验验证了氟康唑能够在实验室内合成，生产成本较低，能够满足现代大批量的生产；同时，这一药物对白色念珠菌和黑曲霉具有较好的抑制作用，尤其对白色念珠菌的抑制作用突出，临床应用效果更好。

参考文献

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[2]甘亚，吕丁.三氮唑醇类化合物的合成及抗真菌活性[J].中国药物化学杂志，2011，11（02）：85-90.

[3]华俊国，张丽.三氮唑类抗真菌药物的研究进展[J].江苏化工市场，2012（26）：15-18.

〔编辑：王霞〕