两种抗凝剂对大熊猫血液生理指标的影响

何永果，李果，李德生，李才武*

（中国保护大熊猫研究中心，四川 雅安 625000）

两种抗凝剂对大熊猫血液生理指标的影响

何永果，李果，李德生，李才武*

（中国保护大熊猫研究中心，四川 雅安 625000）

目的：比较分析两种抗凝剂对大熊猫血液生理指标的影响。方法：将60只成年大熊猫，分别用EDTA.K2和肝素钠抗凝采血后，用麦道尼克（MEDONIC）CA620全自动血细胞分析仪（瑞典原装进口）测定血液生理指标。结果：使用不同的抗凝剂，同一样本的血液生理指标中：血小板数目（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板压积（PCT）、大血小板数（LPCR）、中值细胞（MID）、中值细胞百分比（MID%）、淋巴细胞绝对值(LYM)、淋巴细胞绝对值百分比（LYM）%、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）和平均红细胞体积（MCV）10个指标差异极显著（P＜0.01）。结论：不同抗凝剂对大熊猫血小板和白细胞分类计数参数影响极显著，进行相关实验时应妥善选择血液抗凝方式。

大熊猫；抗凝剂；血液生理指标

大熊猫（Aluropod a melanoleuca）属于我国特有的珍稀濒危动物，也是我国的国宝，具有极高的研究价值和观赏价值。如何更好的保护好大熊猫，对大熊猫的健康状况进行监测与评估，判断大熊猫血液正常生理指标，对大熊猫的健康监测、疾病诊断和治疗均具有重要意义。临床检验工作当中一份标本结果准确性如何，与抗凝剂的选择等有很大关系。国外对肝素和EDTA.K2在血液生化指标，血常规及其他生物学特性的不同效应都做了不少研究，但是对大熊猫血液生理的效应研究目前国内外还未见报道。

为了观察抗凝剂的选择对大熊猫血液生理指标有何影响，我们将60份大熊猫血液样本分别用肝素和EDTA.K2抗凝剂抗凝，用麦道尼克（MEDONIC）CA620全自动血细胞分析仪（瑞典原装进口）测定，将其检测结果进行分析，现将结果报告如下。

1 研究方法

1.1 材料

大熊猫血液，一次性真空EDTA.K2、肝素抗凝采血管及注射器（江苏康健医疗用品有限公司）。

1.2 主要仪器

麦道尼克（MEDONIC）CA620全自动血细胞分析仪（瑞典原装进口）。试剂由仪器厂家提供原装试剂，仪器质控值均在靶值范围内。

1.3 试验动物

圈养成年大熊猫60只，所属国家级卧龙自然保护区管理局，中国保护大熊猫研究中心。

1.4 方法

试验采集60只大熊猫取得60份大熊猫血液样品，每份血液样品分装于一次性真空EDTA.K2抗凝采血管和肝素抗凝采血管各2mL，检测以WBC、RBC、PLT、Hb为主的20项血液生理指标，血液样本保存在低于20℃的环境温度下。

1.5 数据分析

将获得的四组试验数据采用SSPS13.0软件执行统计分析，组间差异比较采用配对样本T检验，所有数据均以平均值±标准误（Mean±SE）表示。

2 结果

2.1 大熊猫20项血液生理指标中，血小板数目（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板压积（PCT）、大血小板数（LPCR）、中值细胞（MID）、中值细胞百分比（MID%）、淋巴细胞绝对值（LYM）、淋巴细胞绝对值百分比（LYM）%、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、平均红细胞体积(MCV)10项指标结果差异极显著（P＜0.01），其它10项指标结果无统计学差异。详见表1。

表1 大熊猫血液用EDTA.K2、肝素抗凝检测结果比较

3 讨论

3.1 动物血液生理指标的重要性

动物血液生理指标是生物医学研究中重要的指标，是判断健康动物状态和选择合格动物的标准，是病理学、毒理学等研究的重要参考依据。动物血液生理参数主要受动物自身的遗传因素和环境因素决定与控制。往往遗传因素是决定动物血液生理参数的内在物质基础，环境因素是决定血液生理参数的外在条件。其中遗传因素决定的大小，常常用遗传度表示。某种动物的血液生理生化参数都有特定的波动范围，这种范围构成了每种动物特有的生物学特性参数。

3.2 两种抗凝剂对血液生理指标的影响

分别用EDTA.K2和肝素抗凝的血液生理指标，两种抗凝剂对红细胞计数的影响无差异，对平均红细胞体积MCV和和平均红细胞血红蛋白浓度MCHC的影响差异显著；对白细胞计数无影响，但对白细胞分类的影响差异显著；白细胞分类中，除了中性粒细胞外，对中值细胞（嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞）、淋巴细胞影响差异显著。所以如果检测项目中主要考察的目标是白细胞分类的相关指标，或者血小板相关参数，那么结果分析的时候一定要考虑到抗凝剂对相关指标的影响。平时临床上应选用同一种抗凝剂，尽可能减少抗凝剂不同对血液生理指标的影响。血液生理指标在不同抗凝剂之间存在一定的差异，在一定程度上说明血液生理值除了受遗传基因控制外，抗凝剂的种类对血液生理指标的影响巨大。

3.3 血常规检测优选EDTA.K2抗凝剂

麦道尼克（MEDONIC）CA620全自动血细胞分析仪是以电阻抗法为原理对血细胞进行检测，根据细胞相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的细胞颗粒在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行测定。肝素是一种含硫酸基团的粘多糖，分子量为15000，带有较多的负电荷，具有多方面抗凝作用，主要是对抗凝血酶及凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集，容易引起白细胞聚集。EDTA.K2抗凝剂对血细胞和血小板形态影响很小。

根据本次实验结果，参考其他实验研究结果，大熊猫血液做血常规检测采用EDTA.K2抗凝剂比较稳定可靠。

（致谢：中国保护大熊猫研究中心动管部同事在项目中提供的帮助。）

[1]张志和，等.2006.大熊猫迁地保护：理论与实践[M].北京：科学出版社.460-461.

[2]杨晓丹，等.2010.常规标本采集过程对检测结果的影响[J].中国民族民间医药.010.（7）：66.

[3]M.Mohri,et al.Effects of heparin，citrate，and EDTA on plasma biochemistry of sheep：Comparison with serum[J].Research in Veterinary Science，Volume 86,Issue 1，February 2009，Pages 111-114.

[4]José J.Cerón，et al.The effects of different anticoagulants on routine canine plasma biochemistry[J].The Veterinary Journal，Volume 167，Issue 3，May 2004，Pages 294-301.

[4]Michael Walther,et al.Bioactive TGF-β levels can be preserved in plasma samples collected into heparin but not EDTA.Cytokine,Volume 48,Issue 3,December 2009，Pages 267-272.

[5]J.C.Duvigneau,et al.Heparin and EDTA as anticoagulant differentially affect cytokine mRNA level of cultured porcine blood cells[J].Journal of Immunological Methods，Volume 324，Issues 1-2,31 July 2007,Pages 38-47.

[6]Giuseppe Lippi,et al.Measurement of Elecsys NT-proBNP in serum，K2 EDTA and heparin plasma[J].Clinical Biochemistry，Volume 40，Issues 9-10，June 2007，Pages 747-748.

[7]王洪，等.雌雄金黄地鼠血液生理生化指标的比较分析[J].中国比较医学杂志，2008，18（2）：35-42.

[8]赵毓梅，等.SD大鼠血常规、血液生化指标、脏体比正常参考值范围研究[J].中国卫生检验杂志，2002，12（2）：165-16.

[9]文兴东.EDTA-K2抗凝剂引起血小板减少的结果探讨[J].当代医学.2012，18（10）：51-52.

[10]韩志芳.抗凝剂在试验中的合理选择和应用[J].医学理论与实践.2002，15（4）：378-379.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．10.007

何永果（1981～），工程师，从事大熊猫研究工作

李才武，工程师，兽医硕士，主要从事大熊猫兽医工作