EV71病毒引起手足口病患儿免疫状态变化分析

张寿斌黄呈辉李 涛廖 华肖 艺龙 瑜黄日妹谭庆瑜黄 艳

1.南方医科大学附属深圳宝安医院儿科，广东深圳 518100；2.南方医科大学附属深圳宝安医院感染内科，广东深圳518100

EV71病毒引起手足口病患儿免疫状态变化分析

张寿斌1黄呈辉2李 涛1廖 华1肖 艺1龙 瑜1黄日妹1谭庆瑜1黄 艳1

1.南方医科大学附属深圳宝安医院儿科，广东深圳 518100；2.南方医科大学附属深圳宝安医院感染内科，广东深圳518100

目的 探讨EV71病毒引起手足口病患儿免疫状态变化。 方法 收集2013年6月～2014年12月我院收治的手足口病患儿120例，按照病情程度分为轻症组、重症组各60例，收集同期来我院进行健康体检的正常健康体检儿童60例作为对照组，测定三组IL-10水平、体液免疫功能及细胞免疫。 结果 轻症组、重症组IgM、IL-10水平均高于对照组，重症组IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于轻症组（P＜0.05）。轻症组、重症组CD16+56+、CD23+、CD19+高于对照组，CD25+低于对照组（P＜0.05），重症组CD19+高于轻症组，CD16+56+、CD25+低于轻症组（P＜0.05）；重症组CD4+、CD8+低于轻症组及对照组（P＜0.05）。 结论EV71病毒引起的HFMD患儿存在细胞免疫、体液免疫功能紊乱，疾病程度越严重，细胞免疫、体液免疫功能紊乱程度越严重，应提高重视，及时检测，提高患儿的预后，降低死亡率。

手足口病；EV71；免疫功能

手足口病（HFMD）是肠道病毒引起的常见传染病之一，以科萨奇病毒16型（CVA16）和肠道病毒71型（EV71）感染最为常见[1]。患儿以口腔、手心、足底、臀部位散在红色疱疹，可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等为主要临床表现[2]。HFMD患儿疾病的预后随着病情的不同而有较大的差异，大部分患儿给予及时有效的对症治疗后可痊愈，但少数重症患儿可并发心肌炎、肺水肿、肺出血、脑炎、心力衰竭等并发症，危及患儿的生命健康[3]。本研究收集我院收治的手足口病患儿，依据病情程度分为轻症组及重症组，并检测其免疫状态的变化，观察与疾病程度的关系，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

收集2013年6月～2014年12月我院收治的HFMD患儿120例，均符合卫生部发布《手足口病诊疗指南》（2010年版）的HFMD诊断标准[4]，并且确定为EV71病毒引起。按照《手足口病诊疗指南》（2010年版）的标准将120例HFMD患儿分为轻症组和重症组[4]，轻症组60例，男29例，女31例，年龄10个月～4.5岁，平均（2.7±0.4）岁，主要临床表现为发热伴手、足、口、臀部皮疹；重症组60例，男25例，女35例，年龄11个月～4.3岁，平均（2.9±0.5）岁，均有神经系统受累、呼吸或循环功能障碍等表现；收集同期来我院进行健康体检的正常健康体检儿童60例作为对照组，男27例，女33例，年龄10个月～5岁，平均年龄（2.5±0.6）岁，三组患儿的年龄、性别等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

表1　三组免疫球蛋白及IL-10水平比较

表1　三组免疫球蛋白及IL-10水平比较

注：与对照组比较，*P＜0.05；与轻症组比较，#P＜0.05

组别　n　IgG（g/L）　IgA（g/L）　IgM（g/L）　IL-10（ng/L）对照组　60　7.67±1.29　0.74±0.12　1.08±0.17　58.97±4.32轻症组　60　8.12±1.31　0.79±0.15　1.43±0.22*　176.05±6.17*重症组　60　11.53±1.96#　1.48±0.27#　1.82±0.31*#　294.41±10.04*#F 4.31　3.85　4.06　9.50 P＜0.05　　＜0.05　　＜0.05　　＜0.05

表2　三组淋巴细胞亚群比较

表2　三组淋巴细胞亚群比较

注：与对照组比较，*P＜0.05；与轻症组比较，#P＜0.05

组别　n　CD4+　CD8+　CD16+56+　CD23+　CD25+　CD19+对照组　60　37.91±6.31　26.14±4.37　21.09±3.51　5.98±0.85　7.31±1.25　17.52±2.79轻症组　60　38.32±6.47　27.58±4.62　26.47±4.38*　14.75±2.63*　5.06±0.87*　21.83±3.64*重症组　60　28.15±4.73*#　21.46±3.57*#　11.86±1.97*#　17.21±3.19*　3.82±0.64*#　31.59±5.28*#F 6.32　4.59　8.25　10.06　3.97　9.17 P＜0.05　　＜0.05　　＜0.05　　＜0.05　　＜0.05　　＜0.05

1.2研究方法

留取静脉EDTA抗凝血3mL。（1）IL-10表达测定和分析：取静脉EDTA抗凝血1mL。采用双抗体夹心ELISA法测定IL-10的浓度，按照试剂盒（美国R&D公司生产）说明操作。（2）体液免疫功能IgA、IgG、IgM检测：采用HITACHI7600型全自动生化分析仪检测，采用免疫透射比浊法测定。（3）细胞免疫应用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群检测项目包括：CD4+、CD8+、CD16+56+、CD23+、CD25+T淋巴细胞计数，以及CD19+B淋巴细胞计数。流式细胞仪（FCM）分析10000个以上细胞。

1.3统计学处理

采用SPSS17.0统计软件进行数据处理和分析。计量资料以表示，组间比较用单因素方差分析及t检验，计数资料用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1三组免疫球蛋白及IL-10水平比较

轻症组、重症组IgM、IL-10水平均高于对照组，重症组IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于轻症组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2三组淋巴细胞亚群比较

轻症组、重症组CD16+56+、CD23+、CD19+高于对照组，CD25+低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），重症组CD19+高于轻症组，CD16+56+、CD25+低于轻症组，差异有统计学意义（P＜0.05）；重症组CD4+、CD8+低于轻症组及对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3　讨论

HFMD是由肠道病毒感染导致的传染性疾病，在各个年龄均可发病，但由于小儿免疫系统功能还没有发育完全，且处于较大的变化之中，因此，HFMD多见于5岁以下的婴幼儿，全年均可发病，但在夏、秋季节发病率相对较高，传染性较强，流行速度快，常群体性发病[5]。HFMD主要的临床表现为发热、皮疹，重症患儿出现严重并发症，如脑干脑炎、血管神经性肺水肿等，使患儿的生长发育受到严重影响，严重者甚至危及到生命安全。

HFMD患儿体内存在过度炎症反应现象，IL-10是中性粒细胞的趋化和活化因子，是重要的免疫调节因子之一，可调节机体免疫，主要表现在趋化性的作用中，主要为诱导细胞形态的改变，释放超氧化物和溶酶体酶，促进炎症反应[6]。轻症组、重症组IL-10水平均高于对照组，重症组高于轻症组（P＜0.05）。提示HFMD患儿机体存在炎症反应，体内IL-10存在过度表达，并随着炎症反应进展持续大量产生，患儿免疫状态紊乱。IL-10主要是由Th2细胞、B细胞和巨噬细胞分泌，抑制Th1细胞和单核-巨噬细胞增殖和活化，促进B淋巴细胞增殖和活化，可对Th细胞免疫平衡进行调节，使过度的免疫反应受到抑制[7]，IL-10水平较高提示患儿存在细胞免疫的异常，推测可能是小儿的免疫系统发育不完善，对轻度炎症刺激反应不灵敏导致[8]。

在HFMD发病过程中体液免疫具有重要的免疫监视及病毒感染预防作用，体液免疫是机体特异性免疫的重要组成部分。其中IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，仅以单体形式存在，主要用于中和多种病原体及其有害代谢产物[9]。轻症HFMD患儿IgM与对照组比较明显较高，主要由于急性感染期体内的体液免疫被激活，产生抗体中和病毒，延缓疾病的进展[10]。重症组IgG、IgA、IgM水平高于轻症组，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示随着手足口病疾病越来越严重，体液免疫能力增强，该结果与相关报道具有一致性[11]。

在免疫应答过程中，末梢血淋巴细胞发育分化成为T、B、NK细胞等功能不同的亚群，生理状态下T细胞的多个亚群相对平衡、稳定对机体免疫功能起着调节作用，维持着机体的正常免疫应答反应[5]。当亚群的数量及功能发生异常时，导致机体免疫紊乱并产生病理变化[12]。有学者研究发现，T细胞通过释放多种细胞因子参与机体的免疫应答在手足口病的发生发展过程中起了重要的介导作用。研究发现，轻症组、重症组CD16+56+、CD23+、CD19+高于对照组，CD25+低于对照组（P＜0.05），重症组CD19+高于轻症组，CD16+56+、CD25+低于轻症组（P＜0.05）；重症组CD4+、CD8+低于轻症组及对照组（P＜0.05），说明EV71病毒引起的HFMD患儿存在细胞免疫功能紊乱，紊乱程度随疾病程度加重。临床通常根据T细胞亚群判定机体免疫细胞功能，T细胞中CD8+、CD4+两者的比值为机体免疫系统内环境指标[13]；轻症组、重症组CD25+较对照组明显降低提示HFMD患儿T淋巴细胞及NK细胞均显著降低，患儿机体的细胞免疫功能下降，抵御病毒感染的能力降低，不能将受感染的细胞有效杀灭，延长了病程，而机体的免疫功能又由于病程的延长而进一步受损，导致病情越来越严重[14]。HFMD患儿CD23+较对照组升高，但轻症组和重症组无统计学差异，CD23+主要存在于B淋巴细胞表面，是B淋巴细胞活化的标志之一[15]。有报道表明，对肠道病毒感染主要是T淋巴细胞或NK细胞参与防御，在机体有病毒入侵时，NK细胞首先参与应答，NK细胞为固有的免疫应答细胞，无需抗原致敏，可对病毒感染的靶细胞直接进行杀伤，是机体防御病毒感染的第一道防线[16]。

综上所述，EV71病毒引起的HFMD患儿存在细胞免疫、体液免疫功能紊乱，疾病程度越严重，细胞免疫、体液免疫功能紊乱程度越严重。提示对HFMD患儿入院时应对上述三项指标进行及时检测并观察变化，与患儿的临床表现相结合，使重症患儿在早期就可准确的识别并及时采用相应的措施干预，以延缓疾病的进展，以提高患儿的预后，降低死亡率。

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Analysis on the change of HFMD caused by EV71 virus immune status of children

ZHANG Shoubin1HUANG Chenghui2LI Tao1LIAO Hua1XIAO Yi1LONG Yu1HUANG Rimei1TAN Qingyu1HUANG Yan1
1.Department of Pediatrics，Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China;
2.Department of Infectious, Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China

Objective To investigate the cause of EV71 HFMD child immunization status changes. Methods 120 cases with hand, foot and mouth disease were selected from June 2013 to December 2014 in our hospital, according to severity they were divided into the mild group(n=60), the severe group(n=60), 60 cases of children were collected came to our hospital for normal healthy physical examination as the same period as the mild group and the severe group and considered them as the control group. IL-10 level, humoral and cellular immune function of three groups were measured. Results IgM, IL-10 levels of the mild group, severe group were higher than the control group, IgG, IgA, IgM, IL-10 levels of the severe group was higher than mild group (P＜0.05). CD16+56+, CD23+, CD19+of Mild group, severe group was higher than the control group, CD25+of the Mild group, severe group was lower than the control group (P＜ 0.05), CD19+ of the severe group was higher than the mild group, CD16+56+，CD25+was lower than the mild group (P＜0.05); CD4+, CD8+of the severe group was lower than the mild group and the control group (P＜ 0.05). Conclusion Children with HFMD caused by EV71 virus exists cellular immunity, humoral immune dysfunction, the more severe the disease extent, cell-mediated immunity, humoral immune dysfunction more serious degree, should increase attention to timely detect and improve the prognosis of children and reduce mortality.

HFMD; EV71; Immune function

R725.1

B

2095-0616（2015）09-49-03

广东省深圳市卫生和人口计生委员会医疗卫生类科研项目（201302164）。

（2015-02-13）