老年脓毒症患者免疫调理治疗前后T淋巴细胞亚群的变化

陆非平，陈 炜，甄 洁，马 莉

（1.首都医科大学北京世纪坛医院重症医学科，北京 100038；2.吉林大学第二医院急救医学科，吉林 长春 130041）

脓毒症及其导致的多器官功能障碍综合征是重症监护病房 （ICU）中最常见的疾病。其中老年脓毒症患者日益增多。这些老年脓毒症患者大多存在可控性器官功能障碍和反复发生的院内感染，其原因可能与长期的免疫抑制有关联［1］。淋巴细胞是机体免疫系统的重要组成部分，由介导细胞免疫的T淋巴细胞，介导体液免疫的B淋巴细胞和NK细胞组成。根据免疫效应功能T细胞可分为辅助性T细胞 （help T cell，Th）、细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell，Tc） 和 调 节 性 T 细 胞（regulatory T，Treg）。T细胞表面有许多重要的膜分子，CD3是所有T细胞表面的特征性标志。成熟的T细胞可表达CD4或CD8分子，即CD4＋T细胞或CD8＋T细胞。CD4＋T细胞具有辅助调节T淋巴细胞转变为效应细胞、B淋巴细胞转化为浆细胞和活化巨噬细胞等作用。CD8＋T细胞包括Tc和抑制性 T淋巴细胞 （Ts）。CD4＋／CD8＋比值的变化可反映机体免疫功能。CD19＋是B淋巴细胞的表面分子。NK细胞不需要抗原预先致敏，能直接杀伤靶细胞，释放杀伤介质，分泌细胞因子，参与细胞免疫和体液免疫。有关老年脓毒症患者T淋巴细胞亚群的变化鲜见报道。本文作者观察了76例ICU中反复发生感染的老年脓毒症患者的淋巴细胞亚群变化，并应用胸腺肽α1进行免疫调理治疗，了解其对淋巴细胞亚群的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月—2013年12月于本院ICU住院的老年脓毒症患者共76例，其中男性49例，女性27例，年龄65～92岁，平均年龄 （76.2±7.4）岁。脓毒症的诊断均符合2008国际脓毒症诊断标准［2］。76例患者中肺部感染48例，腹腔感染18例，泌尿系感染7例，中枢神经系统感染3例。排除标准：各种肿瘤、血液病及风湿免疫系统疾病；近期使用糖皮质激素者；脑血管病急性期及严重肝肾功能障碍和糖尿病患者。同时选择本院门诊20名健康体检者为正常组 （男性14名，女性6名），年龄65～86岁，平均年龄（73.8±6.4）岁。本研究经本院伦理委员会批准。所有治疗均获得家属知情同意。

1.2 治疗方案 76例老年脓毒症患者按照随机数字法分为对照组和治疗组，每组38例。2组患者的性别、平均年龄、感染灶和APACHEⅡ评分及各项基本指标比较差异无统计学意义，具有可比性，见表1。2组患者的治疗均按照2008年国际脓毒症治疗指南实施，包括抗菌素治疗、病灶引流和营养支持等。治疗组患者加用胸腺肽α1免疫调理治疗。胸腺肽α1给药方法：胸腺肽α11.6mg皮下注射，每日1次，连续15d。测定用药前和用药15d后各组患者的淋巴细胞亚群。2组脓毒症患者的淋巴细胞亚群分析应用本院肿瘤研究室的流式细胞仪 （FACS Calibur，美国BD公司）测定。

1.3 统计学分析 采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析。研究对象年龄、APACHEⅡ评分以表示，组间均数比较采用t检验；淋巴细胞亚群指标以表示，组间比较采用χ2检验。以α＝0.05为检验水准。

表1 2组脓毒症患者的基本临床指标Tab.1 Clinical characteristics of patients with sepsis in two groups （n＝38）

2 结 果

应用胸腺肽α1治疗前，与正常组比较，对照组和治疗组患者血浆T淋巴细胞 （CD3＋）、辅助性T淋巴细胞 （CD4＋）、Th1淋巴细胞、B淋巴细胞 （CD19＋）、自然杀伤细胞 （NK）比率、辅助与抑制性T淋巴细胞 （CD4＋／CD8＋）比值均明显降低 （P＜0.05或P＜0.01）。而调节性T淋巴细胞 （Treg）和抑制性T淋巴细胞 （CD8＋）比率均升高 （P＜0.05或P＜0.01）。对照组患者Th2淋巴细胞比率较正常组轻度升高 （P＞0.05）。对照组和治疗组患者各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

应用胸腺肽α1治疗后，与对照组比较，治疗组患者血浆CD3＋、CD4＋和Th1淋巴细胞比率明显升高 （P＜0.05或P＜0.01）、CD4＋／CD8＋比值、CD19＋和NK细胞比率有所升高，但组间比较差异无统计学意义 （P＞0.05）；CD8＋淋巴细胞比率明显下降 （P＜0.05）。Th2和Treg淋巴细胞比率有降低趋势，但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 各组研究对象治疗前后淋巴细胞亚群比率Tab.2 Ratios of lymphocyte subsets of objects in various groups before and after treatment （，η／%）

表2 各组研究对象治疗前后淋巴细胞亚群比率Tab.2 Ratios of lymphocyte subsets of objects in various groups before and after treatment （，η／%）

＊ P＜0.05，＊＊ P＜0.01 vs healthy group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs control group.

Group n CD3＋ CD4＋ Th1 Th2 Treg.6 Control Before treatment 38 53.4±10.8＊＊ 17.9±5.4＊＊ 10.3±4.5＊＊ 3.8±1.7 3.3±0.6＊After treatment 38 54.7±10.2 21.5±9.2 14.6±5.7 3.6±1.4 3.1±0.5 Treatment Before treatment 38 54.6±11.2＊＊ 18.3±6.1＊＊ 9.9±9.7＊＊ 4.1±2.1 3.8±0.7＊After treatment 38 62.6±13.2△ 34.2±9.6△△ 28.4±7.3△△ 2.8±1.6 2.6±0.6 Group n CD8＋ CD4＋／CD8＋ CD19＋Healthy 20 68.3±12.6 45.2±7.6 30.2±7.6 2.5±1.6 1.4±020 22.8±6.8 2.0±0.3 14.3±5.2 21.2±11.6 Control Before treatment 38 34.8±10.1＊＊ 0.5±0.2＊＊ 7.2±2.4＊＊ 9.8±12.6＊＊After treatment 38 32.5±9.1 0.6±0.3 7.6±2.7 10.6±11.4 Treatment Before treatment 38 35.6±9.4＊＊ 0.5±0.1＊＊ 7.6±2.7＊＊ 11.4±11.2＊＊After treatment 38 28.9±6.8△△NK Healthy 1.1±0.5 9.2±5.1 14.8±12.3

3 讨 论

机体的细胞免疫和体液免疫均随衰老而降低，其中T淋巴细胞功能降低为免疫衰老的重要特征［3］。免疫调理治疗可通过促进淋巴细胞增殖，调整淋巴细胞亚群比例，从而维持机体良好的免疫反应状态。

文献［3］报道：脓毒症可造成严重的凋亡介导的免疫细胞丢失，表现为CD4＋T细胞、B细胞和滤泡样树突细胞数量明显降低。脓毒症时大量T淋巴细胞发生凋亡。凋亡细胞清除了大量活化的T淋巴细胞，且使得T淋巴细胞增殖活性下降［4］。因此脓毒症患者外周血淋巴细胞数目减少，呈免疫功能抑制状态。本研究结果显示：老年脓毒症患者CD3＋、CD4＋、NK和CD19＋细胞比率及CD4＋／CD8比值均明显低于正常组，而CD8＋淋巴细胞数量减少不明显，其比率高于正常组。CD4＋T淋巴细胞数量的减少将导致其诱导原始淋巴细胞向成熟T、B淋巴细胞转化并激活细胞和体液免疫的作用减弱。因此老年脓毒症患者的细胞免疫和体液免疫均处于较低水平。

活化的CD4＋T细胞依据其分泌的细胞因子不同分为辅助性T细胞1（Th1型）和辅助性T细胞2（Th2型）亚群。Th1主要分泌干扰素γ（IFN－γ）和白细胞介素2 （IL－2），Th2主要分泌IL－4和IL－10。Th1细胞产生的细胞因子可反馈促进Th1细胞和Tc细胞增殖，活化中性粒细胞，促进其杀伤病原体。Th2细胞分泌的IL－10为重要的抗炎因子。文献［5］报道：脓毒症患者IL－10的持续高水平与病死率相关。IL－10抑制T细胞增值，促进Th1淋巴细胞凋亡，增强Th2型免疫反应。研究［6］显示：脓毒症死亡组患者Th1型细胞因子水平明显低于存活组，而Th2型细胞因子水平则高于存活组，呈现偏向Th2型免疫反应的分化，Th1和Th2亚群平衡与否直接影响着机体免疫功能，与疾病发生发展密切相关［6］。本文作者观察到老年脓毒症患者Th1水平较正常组明显下降，间接反映了老年脓毒症患者处于细胞免疫功能抑制状态。

Treg细胞是具有免疫负调控作用的一组CD4＋T细胞亚群，主要分泌IL－10和前列腺素E2（PGE2）等抑制性介质，对细胞免疫功能起到抑制作用。研究［7］显示：Treg抑制多种免疫细胞，包括抗原提呈细胞、Th1和CD8＋T细胞。Treg细胞表达与APACHEⅡ评分和血乳酸水平呈正相关关系。提示随病情严重程度增加，Treg细胞水平升高，对脓毒症患者免疫功能抑制加强［8－9］。本研究结果显示：老年脓毒症患者Treg细胞水平较正常老年人明显升高，反映了老年脓毒症患者免疫抑制细胞活性增加。

严重感染使得老年脓毒症患者大量淋巴细胞凋亡，CD4＋细胞数量明显减少，Treg细胞水平升高，Th1和Th2亚群比例失衡，呈现为倾向于Th2型的免疫反应。对于免疫功能紊乱的老年脓毒症患者，可应用胸腺肽α1进行免疫调理治疗。胸腺肽α1具有以下药理作用：①诱导T细胞增殖、分化和成熟；②抑制淋巴细胞凋亡；③提高Th1细胞的活力和数量，抑制IL－4，IL－10的产生；④增加CD4＋T 细胞IFN－γ和IL－2表达及释放；⑤提高单核细胞的抗原呈递能力［10］。本研究结果显示：应用胸腺肽α1治疗后，治疗组患者CD3＋、CD4＋、CD19＋和Th1细胞比率及CD4＋／CD8＋比值明显高于对照组，而Th2和Treg细胞比率较对照组下降。提示胸腺肽α1可促进辅助性T淋巴细胞的辅助诱导作用，增强了细胞体液免疫，同时削弱了抑制性T淋巴细胞对机体免疫系统的抑制作用，促进了淋巴细胞亚群的平衡。

本研究对老年脓毒症患者T淋巴细胞亚群变化进行了初步观察，但脓毒症患者的免疫反应是一复杂的网络系统，复杂性、易质性共存［11－14］，尚需要多中心大样本的深入研究。

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