VIDAS荧光免疫分析仪检测血清肌钙蛋白Ⅰ的分析性能评价

陈 佩， 王奇军， 罗建平

(宁波市鄞州人民医院检验科，浙江宁波315040)

2007年针对急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的文件［1］指出:如果心肌肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)检测值高于参考区间第99百分位值［要求检测方法不精密度(CV)在第99百分位值处≤10%］，并有相应的临床症状或心电图的改变，可考虑诊断为AMI。随着临床应用需求和科学技术的发展，cTn检测方法不断更新［2］。我们参照美国临床实验室标准化协会(the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)评价方案对 VIDAS荧光免疫分析仪(简称VIDAS)检测cTnI的性能进行了分析验证。

一、材料与方法

1.对象 (1)疑似AMI组:收集宁波市鄞州人民医院以胸痛入院的疑似或确诊AMI患者新鲜样本46例，要求无溶血、黄疸、脂浊;(2)表面健康人组:收集宁波市鄞州人民医院常规健康体检者20名，男12名，女8名，年龄18～78岁，实验室及心电图检查均正常，无急性炎症，半年内均无输血和大手术史，排除心脑血管疾病。

2.仪器与试剂 VIDAS及原装配套试剂、校准品、质控品。DXI800化学发光免疫分析仪(简称DXI800)及原装配套试剂、校准品，BIO-RAD心肌标志物质控品。

3.精密度评估 参考CLSI EP5-A2文件［3］，自配低、高2个浓度混合血清(cTnI浓度为0.56和16.08 ng/mL)，－20℃冻存。每天测定2批，2批间隔＞2 h，每批重复测定2次，连续测定20 d，计算批内、批间检测值的均值()、标准差(s)及变异系数(CV)。

4.线性范围 参考CLSI EP6-A文件［4］，选取cTnI高值(27.83 ng/mL)和低值(0.01 ng/mL)血清各1 份，按5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5 的比例混合，制备成6个浓度梯度的样品，每个样品随机重复测定2次，计算，将与理论值做直线回归。

5.干扰实验 参考CLSI EP7-A2文件［5］，在低(0.08 ng/mL)、高(0.80 ng/mL)2 个浓度样本中分别添加血红蛋白(hemoglobin，Hb)、总胆红素(total bilirubin，TBil)、甘油三酯(triglyceride，TG)配成一定浓度，每个浓度测定3次，计算，以偏差＜±10%为评判标准。

6.方法学比较 参考CLSI EP9-A2文件［6］，用DXI800(X)和VIDAS(Y)同时检测40份新鲜样本，对检测结果进行线性回归分析，评价两者相关性。

7.参考区间验证 参照 CLSI C28-A2文件［7］，用20个表面健康体检者标本，对参考区间进行验证。如2个以下检测值在参考区间外，则该参考区间可以接受。

8.统计学方法 采用 Microsoft Excel 2007、SPSS 18.0软件进行统计分析。回归分析采用线性回归，相关分析采用Pearson相关。以P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.质量控制 VIDAS和DXI800均处于良好的受控状态。

2.精密度评估 VIDAS测定2个浓度混合血清的批内、批间CV均低于厂商说明书所提供的CV。见表1。

3.线性范围分析 不同稀释比例cTnI测定结果及理论结果见表2。当cTnI浓度为0.01～27.83 ng/mL时线性良好，偏倚较小;直线方程为Y=0.997X－0.330，R2=0.999，P＜0.001。见图1。

表1 cTnI方法批内、批间检测不精密度

表2 cTnI线性测定结果 (ng/mL)

图1 VIDAS测定血清cTnI的线性范围

4.干扰实验 当TG＜14 mmol/L、TBil＜684 μmol/L、Hb＜10 g/L时对高、低2个浓度血清样本cTnI检测结果的干扰均＜±10%，相应浓度的干扰物对上述两个样本的cTnI检测能力无明显影响。

5.方法学比较 两种检测系统40份样本检测结果比对的回归方程为Y=0.451X+0.158，R2=0.959。两种检测系统的相关性良好(P＜0.001)。见图2。

图2 VIDAS荧光免疫分析仪和DXI800检测血清cTnI结果比对

6.参考区间验证 20例表面健康者血清cTnI检测结果均在厂商给定的参考区间内，故采用0.01～0.11 ng/mL作为本实验室的参考区间。

三、讨论

VIDAS荧光免疫分析仪是由免疫夹心法和酶联荧光法组成的检测系统，由一个试剂条和一个固相包被针组成，全封闭式、自动化检测，无携带交叉污染。

性能评价实验显示VIDAS测定2个浓度样本的批内、批间精密度均低于厂商说明书提供的CV。cTnI浓度在0.01～27.83 ng/mL范围内线性良好，偏倚较小。Hb＜10 g/L、TBil＜684 μmol/L、TG＜14 mmol/L对低、高2个浓度样本的检测结果均无干扰。与DXI800的检测结果进行比对，回归方程为Y=0.451X+0.158，R2=0.959，两种检测系统相关性良好(P＜0.001);但检测结果差异较大。分析其原因，可能是因为两种检测系统是建立在不同的技术平台上，由于不同抗体免疫反应性的差异和标准化的因素，使得同一样本的检测值差异较大。因此，本实验室对cTnI项目在检验报告单上注明了检测仪器，并建立了各自的参考区间。20名表面健康者血清cTnI检测结果均在厂商提供的参考区间内。

综上所述，VIDAS检测血清cTnI精密度、线性、抗干扰性、相关性均符合临床检验要求，标本用量少，操作简便，反应快速，荧光活性稳定性好，仪器设备小巧，尤其适于急诊快速检测。

［1］Thygesen K，Alpert JS，White HD，etal.Universal definition of myocardial infarction［J］.Circulation，2007，116(22):2634-2653.

［2］宋凌燕，吴炯，郭玮.高敏感心肌肌钙蛋白检测方法的临床应用［J］.检验医学，2010，25(8):664-668.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline-second edition［S］.EP5-A2，CLSI，2004.

［4］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach;approved guideline［S］.EP6-A，CLSI，2003.

［5］Clinical and Laboratory Standards Institute.Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition［S］.EP7-A2，CLSI，2005.

［6］Clinical and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient samples;approved guideline-second edition［S］.EP9-A2，CLSI，2010.

［7］Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline second edition［S］.C28-A2，CLSI，2010.