MCV与MCH联合血红蛋白电泳筛查常见地中海贫血

2015-11-20李红萍李培培朱淑娥杨庆伟陈伟光吴晓洋

检验医学 2015年7期

李红萍，李培培，张轩，朱淑娥，林洁，杨庆伟，陈伟光，吴晓洋

(广州医科大学附属沙井医院，广东深圳518104)

目前临床上仍然缺乏治疗地中海贫血(简称地贫)的有效手段。因此，通过合理选择和正确使用实验室检查项目和方法进行地贫的筛查和确诊，进而防止重症地贫患儿的出生是控制该病的最经济有效的措施［1］。

地贫的实验室常规诊断项目(或称筛查试验)主要为血液学检查，包括红细胞参数测定、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白组分分析、血清铁代谢检查等，大量的报道集中在红细胞平均体积(mean corpuscular volume，MCV)、红细胞脆性及血红蛋白电泳联合检测在地贫诊断中的价值［2-3］。MCV和平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)都是良好的指标，如果MCH＜27 pg和/或MCV＜80 fL时，就应高度怀疑为地贫，建议进一步做血红蛋白分析［4-5］。我们回顾了几年的患者资料，发现以MCH联合血红蛋白电泳筛查地贫较MCV联合血红蛋白电泳筛查更敏感，临床应用更可靠。为了简化诊断策略、合理选择检测项目，正确分析和解释检验结果，我们比较了MCV或MCH联合血红蛋白电泳筛查常见地贫类型的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

材料和方法

一、研究对象

2011年7月至2013年8月在沙井人民医院门诊、住院及体检者中通过基因检测确诊为地贫和非地贫患者共903例，包括β-地贫275例、α-复合β-地贫44例、α-地贫186例、非地贫398例，其中男132例，女771例，年龄2～54岁。样本分布与国内外文献报道一致［6-8］。

二、标本采集及保存

采用真空采血管(深圳美瑞公司)抽静脉血2 mL于紫头管中，乙二胺四乙酸二钾(ethylene diamine tetreacetic acid-K2，EDTA-K2)抗凝，颠倒混匀8次备用。红细胞参数在4 h内完成测定，其余项目在3 d内完成。标本保存于2～8℃冰箱内。

三、方法

采用SYSMEX XE-2100血液分析仪(日本希森美康公司)及配套试剂检测MCV和MCH，质控液为原装配套。采用CAPILLARYS 2电泳仪(法国Sebia公司)及配套试剂进行血红蛋白电泳，质控液为原装配套。地贫的基因诊断由广州金域医学检验中心进行。α-珠蛋白基因分析采用跨越断裂点聚合酶链反应(gap-polymerase chain reaction，gap-PCR)，检测3种常见缺失。β-珠蛋白基因分析采用PCR结合反向斑点杂交法，检测17个常见突变位点。

四、质控

XE-2100血液分析仪及CAPILLARYS 2电泳仪均确认质控在控后进行检测。本实验室(编码:114112)参加卫生部临检中心室间质评结果满意。

五、判定标准

红细胞参数:MCV＜80 fL，MCH ﹤ 27 pg［9］。血红蛋白电泳Hb A2值标准为本实验室结合Sebi公司提供的标准拟定(年龄2岁以上者)。(1)HbA2＞4.0%且血红蛋白组份正常:与β-地贫、α-合并β-地贫相关;(2)HbA2≥3.0%且有HbE区带:与βE位点突变导致的β-地贫相关(包括α-合并 βE位点突变);(3)HbA2为2.5%～4.0%且血红蛋白组份正常:正常人群;(4)1.0%＜HbA2＜2.5%且血红蛋白组份正常:与α-地贫、δ-地贫、缺铁性贫血相关;(5)HbA2≤2.0%且有HbH和Bart's区带:与α-地贫(HbH病)相关。

六、统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计算MCV或MCH联合血红蛋白电泳筛查常见类型地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

结果

一、基因检测结果

505例地贫的基因检测结果见表1。样本分布与国内外文献报道［8-9，11］接近。

表1 基因检测结果分布

二、血红蛋白电泳检测结果

见表2。

三、红细胞参数检测结果

β-地贫和α-复合β-地贫的血红蛋白电泳结果显示HbA2均≥4.0%，所以把β-地贫和α-复合β-地贫合并为一组计算。见表3。

四、HbA2、MCV、MCH 单独或联合筛查地贫的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值

血红蛋白电泳(HbA2)可以筛查出95%以上的β-地贫和α-复合β-地贫。MCV联合HbA2筛查α-地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为85.56%、83.26%、57.30%和95.98%;MCH联合HbA2筛查α-地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为92.47%、81.45%、56.39%和97.66%。见表4、表5。

表2 血红蛋白电泳检测结果

表3 红细胞参数MCV、MCH检测结果

表4 血红蛋白电泳(HbA2)筛查α-查地贫、β-地贫及α-复合β-地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值(%)

表5 MCV、MCH单独或联合血红蛋白电泳(HbA2)筛查α-地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值(%)

讨论

毛细管电泳综合了高效液相色谱和凝胶电泳的共同优点，具有快速、高效、高灵敏度、易定、重现性好等优点［11-12］，能有效地分离和准确定量HbA、HbF、HbE、HbA2、HbCS、HbH和 HbBart's。从表4可以看出，血红蛋白电泳可以筛查出95%以上的 β-地贫和 α-复合 β-地贫，但筛查 α-地贫的敏感性和特异性均相对较低，因此需联合其它项目进行筛查。

地贫属于小细胞低色素性贫血，血液学参数改变主要以MCV、MCH降低为特征，但MCV、MCH的降低还见于缺铁性贫血、慢性病贫血、环形铁粒幼细胞性贫血、铅中毒等。本研究由基因检测确诊的398例非地贫中有120例MCV＜80 fL，133例MCH＜27 pg，我们认为不剔除这部分贫血患者标本更符合临床病例分布，更能反应采用HbA2联合MCV或MCH筛查地贫的实际意义。

地贫是单基因遗传性疾病，α-珠蛋白基因簇定位于16号染色体16p13.3位点，β-珠蛋白基因簇定位于11 号染色体 11p15.3 位点［13］。α-地贫由于α珠蛋白链合成部分或完全受抑制，发生不同程度的缺失和缺陷［14-15］。因此，不同类型α-地贫患者的贫血程度差异明显，大多数患者MCV和MCH同时降低，有少数轻度贫血患者只有MCH＜27 pg或 MCV＜80 fL。从表5可以看出，以MCV＜80 fL或 MCH＜27 pg筛查 α-地贫，MCV的敏感性为86.56%，MCH的敏感性为92.47%。β-地贫大多数呈现小细胞低色素轻度贫血表现，MCV和MCH的表现较为一致。而α-复合β-地贫由于α链-和β链相对不平衡，比单一的α-地贫或β-地贫的贫血程度有所减轻，红细胞参数的表现与单纯的β-地贫无明显差异，MCV和MCH的表现也较为一致。

应用MCV与血红蛋白电泳(HbA2)联合筛查α-地贫可以提高敏感性和特异性。从表5可以发现以MCH联合血红蛋白电泳(HbA2)筛查α-地贫较MCV联合血红蛋白电泳(HbA2)更敏感，敏感性从86.56%提升到92.47%。对于筛查项目，应选择敏感性高者，可以减少漏诊病例。

作为常规筛查项目，本研究除外部分异常血红蛋白病和相对比例较少的α-突变基因类型，着重于临床常见类型的地贫资料分析。β-地贫或α-复合β-地贫则一定要通过基因筛查来诊断。地贫的基因突变检测技术是诊断的金标准［10］。

综上所述，血红蛋白电泳可以筛查出95%以上的β-地贫或α-复合β-地贫，MCH联合血红蛋白电泳筛查α-地贫可以提高筛查的敏感性。

［1］RACHMILEWITZ EA，GIARDINA PJ.How I treat thalasaemia［J］.Blood，2011，118(13):3479-3488.

［2］何雅军，杨小华，马福广，等.红细胞平均体积和脆性及血红蛋白电泳联合检测在地中海贫血诊断中的价值［J］.中华检验医学杂志，2005，28(3):244-246.

［3］王晓忠，曾学辉，占葆娥.MCV和RBC脆性及血红蛋白电泳在产前筛查地中海贫血的价值［J］.中国实验诊断学，2009，13(6):761-763.

［4］RYAN K，BAIN BJ，WORTHINGTON D，etal.Significant haemoglobinopathies: guidelines for screening and diagnosis［J］.Br J Haematol，2010，149(1):35-49.

［5］OLD JM. Screening and genetic diagnosis of haemoglobin disorders ［J］.Blood Rev，2003，17(1):43-53.

［6］田佩玲，郑立新，李铭臻，等.14 143名育龄人群β-地中海贫血检查结果分析［J］.中华血液学杂志，2009，30(5):337-338.

［7］李莉艳，李强，宋兰林，等.69例αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型研究［J］.实用妇产科杂志，2011，27(5):378-382.

［8］CHEN FE，OOI C，HAS Y，etal.Genetic and clinical features of hemoglobin H disease in Chinese patients［J］.N Engl J Med，2000，343(8):544-550.

［9］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检检操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社，2006:10.