人参固本丸的质量标准研究

2015-10-27北京同仁堂股份有限公司科学研究所100079彭鹏

首都食品与医药 2015年8期

北京同仁堂股份有限公司科学研究所（100079）彭鹏

人参固本丸[1]收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第一册，由人参、地黄、熟地黄、山茱萸（酒炙）、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓、麦冬、天冬等十味药组成。该方主要功效是滋阴益气，固本培元，用于阴虚气弱，虚劳咳嗽，心悸气短，骨蒸潮热，腰酸耳鸣，遗精盗汗，大便干燥。原标准只收载了茯苓、山药、人参、熟地黄、山茱萸、泽泻、牡丹皮的显微鉴别，不足以对本方进行质量控制，本研究增加了人参[2]、山茱萸[2]、麦冬[2]的薄层鉴别，同时采用高效液相色谱法测定山茱萸中马钱苷的含量。通过研究，该方法简便易行，准确可靠。

1 仪器与材料

①仪器：岛津LC-10AVP高效液相色谱仪。色谱柱：ZORBAX SB-C18 （5μm 150mm×4.6mm）。②材料：人参固本丸样品由北京同仁堂天然药物有限公司提供，批号：3012999、4012002、5012995、5012996。马钱苷（批号为：111640-200503）、人参皂苷Rg1（110703-200425）、人参皂苷Re（110754-200421）、熊果酸（批号742-200212）、丹皮酚（110708-200506），麦冬（批号：121013-200506），均购自中国药品生物制品检定所。实验所用试剂均为分析纯，液相色谱所用试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

附图1 人参的薄层色谱图

附图2 山茱萸的薄层色谱图

附图3 麦冬的薄层色谱图

2.1.1 人参的薄层鉴别取本品15g，剪碎，加硅藻土5g，研匀，加乙醚40ml，超声处理10分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加1%氢氧化钠溶液洗涤两次，每次15ml，弃去碱液，再加正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液；照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见附图1。

2.1.2 山茱萸的薄层鉴别取本品20g，剪碎，加硅藻土10g，研匀，加乙醚60ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取对照品溶液及供试品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

附图4 人参固本丸中马钱苷高效液相色谱图

2.1.3 麦冬的薄层鉴别取本品10g ，剪碎，加水饱和的正丁醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，再加盐酸3ml，置沸水浴上加热回流1小时，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 含量测定 ①色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18（5μm 150mm×4.6mm）色谱柱；流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（8∶4∶88）；检测波长：240nm；柱温：40℃；流速：0.8ml/min；理论板数按马钱苷峰计算应不低于5000。②对照品溶液的制备取马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。③供试品溶液的制备取重量差异检查项下的本品，剪碎，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）15分钟使溶散，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱（100目～200目，4g，内径1cm，干法装柱）上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。④空白试验按处方中药味比例，自配不含山茱萸的群药，按标准中制法制成空白制剂，照供试品溶液制备方法制样，测定，结果阴性对照样品在与马钱苷相同保留时间处，未见色谱峰，故认为无干扰。

⑤线性关系考察精密吸取浓度为0.02452mg/ml的马钱苷对照品溶液3、6、9、12、15、20ul，及浓度为0.1226 mg/ml的马钱苷对照品溶液6、8、10、12 ul注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，马钱苷进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：y= 2057008.79 x + 12650.04 r=0.9999结果表明，马钱苷在0.07356～1.4712μg范围内具良好的线性关系。⑥精密度试验取同一供试品溶液（5012996批）连续进样6次，观察仪器的精密度，测得马钱苷含量的平均值为0.2189mg/g，相对标准偏差RSD=0.45%。⑦稳定性试验取同一供试品溶液（5012996批），分别于配制后0、2、4、8、12、24小时，依法测定，马钱苷平均总量为0.2156mg/g，相对标准偏差RSD=1.30%（n=6），试验结果表明，供试品溶液制备后24小时内基本稳定。⑧重复性试验取同批（5012996）样品，平行制样6份，测定，求得马钱苷平均含量为0.2112mg/g，相对标准偏差分别为RSD=0.89%（n=6）。⑨回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量的同批（5012996，马钱苷含量0.2112mg/g）样品1g，分别精密加入马钱苷对照品（0.28198mg），照2.2.3项下方法操作，平行制样6份，测定，按下式计算回收率，结果表明本方法具有良好的准确度。测得马钱苷的平均回收率为101.56%，相对标准偏差RSD=1.31%（n=6）。⑩马钱苷对照品纯度测定精密称取马钱苷对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取对照品溶液5μL注入液相色谱仪中，归一化法测定含量，马钱苷含量为100%。11样品测定结果分别取4批样品，依上述色谱条件进行测定，每批样品测定2次，测定结果见附表2。

3 讨论

本次研究增加了人参、山茱萸、麦冬的薄层鉴别，通过对多批样品的鉴别，结果表明薄层色谱鉴别方法良好，阴性无干扰，可以作为人参固本丸的质量控制方法之一。

含量测定的供试品溶液制备中，根据马钱苷的性质，参考《中国药典》2010版一部山茱萸项下含量测定项，在30、60、90分钟不同回流时间进行了比较，结果表明提取60分钟后马钱苷的含量不再增加，因此确定提取时间为60分钟。比较了加入提取溶剂的量对马钱苷含量的影响，通过比较，在加入10ml、25ml、50ml时，用25ml与50ml溶剂提取的马钱苷含量相近，故选择25ml溶剂进行提取。