某地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T/G1764A双变异和前C区G1896A突变分析及临床意义

黄远虹　陈鸿恩

（赣州市市立医院，江西 赣州 341000）

某地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T/G1764A双变异和前C区G1896A突变分析及临床意义

黄远虹陈鸿恩

（赣州市市立医院，江西 赣州 341000）

目的 探讨江西省赣州地区乙型肝炎病毒感染者血清中HBV基因BCP区双变异（A1762T/G1764A）和前C区G1896A突变的情况及其临床意义。方法 收集116例本土感染者一般资料及血清，运用速率法检测丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）含量；ELISA检测HBeAg；荧光定量PCR检测HBV DNA拷贝数；采用巢式PCR扩增及测序方法检测HBV C启动子A1762T/G1764A双变异和前C区G1896A突变情况并进行统计分析。结果 ①肝细胞癌患者在年龄、HBeAg阴性率、ALT和AST水平方面均高于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01），而HBV DNA拷贝数则低于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01）；②肝细胞癌患者的A1762T/G1764A、G1896A变异率及联合变异率均高于慢性乙型肝炎患者（P＜0.01）。③HBeAg阴性患者A1762T/G1764A、G1896A变异率及联合变异率均高于HBeAg阳性患者（P＜0.05）。结论 乙型肝炎患者常规的相关指标检测对病情的评估是不全面的，在条件许可情况下，对HBV基因区的BCP双变异（A1762T/ G1764A）和前C区G1896A的常见突变位点进行检测，再结合其他的临床资料进行综合分析，可做出更为正确的诊断。

乙型肝炎病毒；BCP双变异；G1896A；测序

乙型肝炎病毒感染是一个全球性的公共卫生问题，全世界约有20亿人曾感染过HBV，其中4亿为慢性感染，有可能发展成为活动性肝炎、肝硬化、肝细胞癌［1-4］。HBV变异的研究在近年已有较大的突破，目前研究的焦点多集中在X基因BCP区和前C基因区。本试验对116例HBV感染者血清X基因、前C基因扩增后进行测序，对其中的BCP双变异（A1762T/G1764A）和G1896A点突变进行统计分析，并探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料：收集2012年1月至2014年12月本院门诊及住院HBV DNA阳性患者116例，其中慢性乙型肝炎65例、乙型肝炎相关性肝细胞癌51例；其中男性85例，女性31例，年龄17～74岁，平均年龄48.6岁，均土生土长于赣州市。慢性乙型肝炎（CHC）的临床诊断均按照2010年我国《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准，HCC诊断标准参照2010年美国肝病年会推荐的HCC指南中的诊断标准。

1.2方法

1.2.1清晨抽取受试者静脉血3 mL，2000 rpm离心10 min，取上清于-70 ℃冻存至检测。

1.2.2HBeAg采用ELISA法，PCR产物送至上海申友生物有限公司进行测序，测序用引物为5’端引物。

1.3统计学处理：采用SPSS17.0软件进行统计学处理，计量资料应用方差分析或χ2检验，均数比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1基本情况：根据诊断，将116例患者分为CHB组和HCC组。见表1所示，HCC组患者在年龄、HBeAg阴性率、ALT水平和AST水平方面均高于CHB组（P＜0.01）；而HBV DNA水平低于CHB组（P＜0.01）；两组患者性别比例无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1　研究对象一般资料分析

2.2HBV BCP双变异（A1762T/G1764A）和前C区G1896A突变情况。统计分析测序结果：HCC组患者A1762T/G1764A变异检出率为58.82%，G1896A突变为25.49%，联合突变率11.76%，均远高于CHC组（P＜0.01）；而HCC组无突变率则远低于CHC组（P＜0.01），见表2。

表2　CHB组和HCC组HBV A1762T/G1764A双突变和G1896A突变情况

2.3HBV BCP区双变异和前C区G1896A突变与HBeAg的关系：根据HBeAg的携带情况，将116例研究对象分为HBeAg阴性组和HBeAg阳性组。HBeAg阴性组的A1762T/G1764A双变异、G1896A突变和二者联合变异均高于HBeAg阳性组（P＜0.05）。

3　讨　论

HCC是常见的肿瘤之一，病死率居恶性肿瘤第3位，全球每年新发病例62万，每年死亡人数接近100万。本研究对116例本地区HBV感染者的血清标本进行实验并统计分析，发现HCC组在年龄、HBeAg阴性率、ALT水平和AST水平均高于CHB组，而HBV DNA复制程度低于CHB组。在慢性HBV感染中，HBeAg是临床表达病毒复制较实用的血清标志物，传统认为HBeAg阴转常标志病变活动性的缓解，但上述研究结果表明，HBeAg阴性未必表示病毒复制终止，病情也可能正在向恶化方向发展，尤其要引起临床的注意。

本研究中，赣州地区HBV感染者A1762T/G1764A 双变异率为48.3%，且HCC组突变率明显高于CHB组，提示 A1762T/A1764G双变异与肝癌的形成相关。BCP位于基因组nt1742～1849位核苷酸，它可启动前C区mRNA的转录。前C基因组mRNA编码HBeAg，C基因组mRNA编码核心蛋白和DNA聚合酶，因此BCP是HBV复制的关键性调控原件，对HBV的复制和转录起着重要的调节作用。发生在前C基因区的变异可能会终止或减低HBeAg表达，进而增强HBV DNA的复制或逃避宿主免疫应答。前C区变异可使病毒蛋白的产生减少，使病毒能够逃避免疫监视，使机体的免疫功能紊乱，最终导致癌变。

本研究无论前C区G1896A突变还是BCP区A1762TIG1764A双变异的检出率，HBeAg阴性患者均高于HBeAg阳性患者。此两种变异都能影响HBeAg的产生，但其发生机制不同。BCP区是富含AT区域，是肝脏富含因子的独立结合点，变异的BCP可改变这种结合，降低前C区的RNA转录，最终使HBeAg表达减少，再者G1896A突变使病毒不能编码HBeAg，肝细胞表面靶抗原HBeAg消失，使病毒可能发生免疫逃逸，使得HBV感染得以长期持续。

综上所述，乙型病毒性肝炎患者病情轻重是由宿主和病毒两方面所决定，取决于本身的遗传素质，也与病毒的因素密切相关，仅凭传统的血清学实验判断病情的进展明显不足，条件允许的情况下，对HBV感染者的HBV BCP区A1762TIG1764A双变异位点及前C区G1896A突变的常见位点进行检测，有利于对患者病情的可能发展进行预测并采取有效的防治措施，对患者长期观察，定期复查，尽量延缓病变的发展。由于HBV基因型存在地域性差异，不同地区统计各自地区的基因类型，可更好地指导HBV病毒感染的地区性防治。

［1］谭炳芹，王昌源，杜磊，等.乙型肝炎病毒X基因突变与疾病进展的相关性［J］.中华传染病杂志，2011，29（6）:366-368.

［2］中华医学会肝病学分会肝癌学组，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）［J］.中国医学前沿杂志，2011，3（1）:66-78.

［3］骆抗先.乙型肝炎基础和临床［M］.北京:人民卫生出版社，1997:1-244.

［4］刘悦晖，丁静娟，张权.慢性乙型肝炎病毒感染者病毒前C区和基本核心启动子区变异检测及意义［J］.中华消化杂志，2005，25（9）:526-529.

R512.6+2

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1671-8194（2015）17-0166-02