茶多酚对大鼠骨折早期愈合及TNF-α表达影响的实验研究

严 斌

（深圳市坪山新区人民医院外科，广东 深圳 518118）

茶多酚对大鼠骨折早期愈合及TNF-α表达影响的实验研究

严 斌

（深圳市坪山新区人民医院外科，广东 深圳 518118）

目的 探讨茶多酚对大鼠骨折早期愈合及TNF-α 表达的影响，为茶多酚促进骨折愈合提供理论参考。方法 选取90只大鼠进行茶多酚造模，随机分为两组，模型组45例只给予造模，药物组45例在造模后给予茶多酚干预，另外选取45只大鼠仅给予生理盐水干预作为正常组，比较三组的骨折愈合情况及TNF-α的表达情况。结果 模型组与药物组在整个实验过程中，TNF-α结果均显著高于正常组，有统计学差异（P＜0.05）。TNF-α检测结果显示，药物组合模型组在第14天和第21天差异具有显著性，尤其是第21天，差异具有非常显著性（P＜0.05）。模型组与药物组中组织中TNF-α的表达明显高于正常组，有统计学意义（P＜0.05）。药物组的TNF-α表达阳性率显著低于模型组，有统计学意义（P＜0.05）。第3天，药物组与模型组的骨痂厚度及成熟度无明显差别，第7天开始，药物组的骨痂厚度大于模型组，并且出现了新生血管，术后14 d出现骨折端出现肉芽组织，纤维性骨痂开始形成，显著优于模型组。结论 茶多酚对大鼠骨折早期愈合具有积极的促进作用。

茶多酚；大鼠；骨折；早期愈合；TNF-α

骨折是骨科最常见的病种，临床多采用手术的方式治疗，术后如何通过药物治疗达到促进愈合的目的是广大骨科工作者关注的重点。茶多酚是现在医学研究的热点，其临床作用广泛［1］，本研究采用动物实验方法，研究了茶多酚对大鼠骨折愈合的影响作用，建立了茶多酚生物效应下的骨折愈合模型，应用HE染色法检测了骨痂厚度与成熟度和免疫组化染色法检测骨痂中肿瘤坏死因子（TNF-α）表达水平三个指标，来探讨茶多酚对骨折愈合的早期影响。通过本项目研究，目的在于揭示茶多酚摄入机体对骨折早期愈合影响的规律，为茶多酚在骨科临床推广应用中提供理论依据。

1　资料与方法

1.1研究流程：①建立茶多酚生物效应作用下的骨折愈合模型；②采集标本，取材后标本固定，脱钙，石蜡切片。③采用HE染色观察大鼠早期骨折中的骨痂厚度及骨痂成熟度。④采用免疫检测TNF-α的含量。⑤统计软件对实验数据进行统计分析。⑥分析茶多酚摄入机体对骨折早期愈合影响规律。

1.2.2方法：选取90只大鼠进行茶多酚造模，随机分为两组，模型组45例只给予骨折造模，给予等量生理盐水皮下注射，药物组45例在造模后给予茶多酚干预，另外选取45只大鼠给予生理盐水干预作为正常组（不进行骨折造模），比较三组的骨折愈合情况及TNF-α的表达情况。

1.3技术路线

1.3.1第一阶段：选择实验动物及分组。①SD大鼠要求：SPF级；雄性；7周龄、体质量（260±20）g。②适应性喂养1个月。③随机分组。

1.3.2第二阶段：建立茶多酚生物效应作用下的骨折愈合模型。①制造骨折前茶多酚生物效应（茶多酚皮下注射）3周，剂量为10 mg/（kg·d）。②造成骨折，继续产生茶多酚生物效应，10 mg/（kg·d），建立不同时间点（7、14、21 d）的骨折愈合模型。

1.3.3第三阶段：标本采集及标本处理。①不同时间点的标本采集及标本固定、脱钙、包埋切片处理。②标本Elisa法检测TNF-α的含量。③HE染色观察骨痂厚度及成熟度情况、免疫组化切片观察TNF-α表达强度。

1.3.4第四阶段：资料汇总、综合分析实验数据。

2　结　果

2.1大鼠血清检测TNF-α结果：结果显示，模型组与药物组在整个实验过程中，TNF-α结果均显著高于正常组，有统计学差异（P＜0.05）。TNF-α检测结果显示，药物组合模型组在第14天和第21天差异具有显著性，尤其是第21天，差异具有非常显著性（P＜0.05）。具体结果见表1。

表1　大鼠血清TNF-α含量水平检测结果［ng/mL，（）］

表1　大鼠血清TNF-α含量水平检测结果［ng/mL，（）］

注：*与模型组相比，P＜0.05；#与正常组相比，P＜0.05

组别　第7天　第14天　第21天模型组（n=45）　10.2±2.35#　14.5±4.08#　14.2±3.56#药物组（n=45）　9.06±2.68#　12.2±3.04#*　10.7±3.65#*正常组（n=45）　5.73±1.24　6.32±1.18　5.39±1.35

2.2大鼠切片的TNF-α表达结果：模型组与药物组中组织中TNF-α的表达明显高于正常组，有统计学意义（P＜0.05）。药物组的TNF-α表达阳性率显著低于模型组，有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　大鼠组织中的TNF-α表达统计表

2.3骨痂厚度及成熟度：正常组不进行骨折造模，故不观察此项目。第3天，药物组与模型组的骨痂厚度及成熟度无明显差别，第7天开始，药物组的骨痂厚度大于模型组，并且出现了新生血管，术后14 d出现骨折端出现肉芽组织，纤维性骨痂开始形成，显著优于模型组。

3　讨　论

研究表明茶有众多保健功效，因此作为一种健康饮品被中国乃至世界的人们所接受［2］。在临床工作中很多骨折患者也有喝茶的嗜好，但喝茶骨折愈合究竟有何影响，由此而引发我们的兴趣。经查阅资料发现，茶的主要成分是茶多酚，而目前国内很少研究探讨茶多酚对于骨折愈合的影响，我们因此进入此领域想进一步探讨茶多酚摄入机体对骨折愈合产生影响［3］。因此我们前期工作进行了大量的文献调研。

本研究拟采用动物实验方法，建立茶多酚生物效应下的骨折愈合动物模型，通过观察骨痂厚度、成熟度和骨痂中TNF-α的角度研究茶多酚对大鼠骨折愈合影响，不仅有助于揭示茶多酚摄入机体对骨折早期愈合影响规律，并有助于人们对饮茶对骨折患者健康影响更深刻理解［4］，从而为寻找提供对骨折愈合影响途径的物质有效的方法提供新的思路。

国内茶多酚对骨折愈合影响的研究现状：目前只有少数相关的基础性研究报道，研究内容主要集中在茶多酚对成骨分化作用影响及炎性因子影响研究［5］。认为茶多酚对促进成骨细胞分化作用及对炎性因子有抑制作用［6］。通过本研究，我们要解决的关键问题，控制大鼠的健康状况同一水平及年龄对实验产生的偏倚：把大鼠的健康状况放为同一水平，控制健康状况差异对骨折愈合的影响。SD大鼠的筛选为SPF级；雄性；7周龄、体质量（260±20）g，减小大龄大鼠骨折后愈合差的干扰。显微镜下观察骨痂厚度测量及成熟度、TNF-α检测的准确性，需要减少主观误差。造模时减少各种影响骨折愈合的外部干扰：包括骨折造模时局部软组织的保护、避免术后感染等。骨折造模骨缺损时的控制力度及偏差，人为产生骨折的误差需要控制［7］。通过本研究我们的目的是指导患者骨折后饮茶的功效，并且为下一步研究打好基础，寻找有效提取茶多酚方法及合理利用［8］。本实验研究分析茶多酚对骨折早期愈合的影响，为患者促进早期康复提供指导意见，并且为进一步研究骨折愈合因素提供依据。综上所述，多酚具有十分复杂的生物效应，能够通过多种途径对细胞和组织产生作用，研究表明茶多酚促进成骨细胞的增殖分化、抑制炎性因子包括TNF-α的活性［9-10］。另一方面有的研究表明茶多酚可通过能保护内皮细胞，分泌血管内皮生长因子从而促进血管新生改善血运［11］。本研究结果再次证明了茶多酚对大鼠骨折早期愈合具有积极的促进作用。

［1］车晓明，陈亮，顾勇，等.茶多酚治疗骨质疏松症的研究进展［J］.中国骨质疏松杂志，2015，21（2）:235-237.

［2］刘庆斌，刘晓波，王树君，等.低氟青砖茶预防饮茶型氟中毒效果观察［J］.中国地方病学杂志，2012，31（5）:41-43.

［3］陈可，谢丽华，赖玉链，等.喝茶与汉族绝经后妇女骨密度关系的临床研究［J］.中国骨质疏松杂志，2011，17（7）:609-612.

［4］谢丽华，陈可，李生强，等.茶多酚EGCG对人骨髓基质干细胞成骨分化基因表达的影响［J］.中医药导报，2012，18（6）:3-5.

［5］李程程，于光前.饮茶型氟中毒和砖茶中抗氧化物质拮抗作用研究进展［J］.中国地方病学杂志，2012，31（3）:188-385.

［6］尚琦松，黄擘，盛文辉.炎性因子TNF-α及IL-18与椎间盘退变的相关性研究［J］.中国矫形外科杂志，2009，17（5）:385-387.

［7］刘庆斌，刘晓波，于冰，等.不同不同含氟量低氟砖茶预防饮茶型氟中毒效果评价［J］.中国地方病防治杂志，2012，4（7）:551-553.

［8］戴冠东，刘国辉，刘东云.尼古丁对大鼠骨折愈合过程中骨痂含量变化及成熟度的影响［J］.中国医师杂志，2013，3（3）:300-302.

［9］陈萍，何多龙，魏生英，等.青海省8-12岁儿童饮茶型氟中毒现况调查［J］.中华地方病学杂志，2014，8（1）:53-55.

［10］李强，赵建民，张元智，等.腰椎退变黄韧带中炎性细胞因子的表达［J］.中国脊柱脊髓杂志，2011，21（1）:63-66

［11］刘连，徐园园，许诺，等.氟对大鼠肝自由基、氧化应激和超微结构影响［J］.中国公共卫生，2009，25（9）:1114-1116.

Experimental Study on Early Healing and TNF-alpha Expression and Effects of Tea Polyphenols on Rat Fracture

YAN Bin
（Department of Surgery， Shenzhen Pingshan New District People's Hospital， Shenzhen 518118， China）

Objective To investigate the effect of early healing and TNF-α expression of tea polyphenols on rat fracture， tea polyphenols and provide a theoretical reference for promoting fracture healing. Methods A total of 90 rats were made model of tea polyphenols， were randomly divided into two groups，the model group 45 patients were treated only by modeling， 45 cases gave her tea polyphenols intervention in the model group， the other 45 rats were selected as normal saline intervention group， the expression of three groups of fracture healing and TNF-alpha. Results In the model group and drug group during the whole experiment， the results of TNF-alpha were significantly higher than those in normal group， there was statistically significant difference （P＜0.05）. TNF-α test results showed that the model group， drug combination had significant differences in 14 days and 21 days， especially the 21 days， the difference was significant （P＜0.05）. Expression of TNF-α in model group and drug group organization in significantly higher than the normal group， with statistical significance （P＜0.05）. The positive expression rate of TNF-alpha in drug group was lower than the model group， there was statistical significance （P＜0.05）. The third day， the callus thickness drug group and model group and maturity had no significant difference， the start of the seventh day， the callus thickness of drug group was higher than that of the model group， and the emergence of new blood vessels， 14 days postoperative fracture appearance of granulation tissue and fibrous callus formation， significantly better than the model group. Conclusion Tea Polyphenols on rat fracture healing has a positive role in promoting.

Tea polyphenols； Rat； Fracture； Healing； TNF-α

R-33

B

1671-8194（2015）17-0005-02