红细胞血型血清学技术综述

刘玥　冯震

【中图分类号】R392.7 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0798-01

血 型是人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成分的遗传多态性。人类红细胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奥地利维也纳大学的Kar Landsteiner发现人类第一个血型——ABO血型后，迄今发现的血型系统已接近30个，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。

1 红细胞血型鉴定

1.1 ABO血型鉴定

1.1.1原理

根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和 B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。应用筛选红细胞检测鉴定标本的血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。

1.1.2 结果判读

细胞均匀无凝集者为阴性（-），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。

1.2.1 原理

Rh血型系统是继ABO血型系统之后又一重要的血型系统，与ABO血型系统不同的是，在没有相应的抗原免疫的情况下，一般不会产生Rh抗体[1] 。红细胞表面存在正常D抗原，则该细胞与抗D（IgM）试剂发生直接凝集，与抗D（IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为阳性；若红细胞表面D抗原位点数减少或抗原结构产生变异，则该细胞与抗D（IgM）试剂不发生直接凝集，与抗D（IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为D弱反应型；红细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中发生凝集都应为RhD阳性。若不存在D抗原，则该细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中均不发生凝集，该细胞Rh血型为阴性。

用抗C、抗c、抗E、抗e這4种Rh定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存在相应抗原。

用筛选红细胞检测RhD阴性确证血清中是否存在不规则抗体，如果存在用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。

1.2.2 结果判读

细胞均匀无凝集者为阴性（-），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。

1.3 血型鉴定操作时注意事项

1.3.1 所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。

1.3.2加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。

1.3.3虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。

1.3.4幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。

1.3.5玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。

1.3.6正、反定型结果一致才可发报告。

2 交叉配血实验

2.1原理

交叉配血试验主要是检查受血者血清/红细胞与供血者红细胞/血清之间的相容性。受血者血清对供血者红细胞即主侧配血，是测定受血者血清中有无针对供血者红细胞的抗体；受血者红细胞对供血者血清即次侧配血，是测定供血者血清中有无针对受血者红细胞的抗体。应用筛选红细胞检测受血者血清中是否存在不规则抗体，如果存在，须用谱细胞进行抗体特异性鉴定。

2.1.1盐水介质法

IgM类血型抗体可与对应的红细胞在室温盐水介质中出现凝集反应，通过离心观察主、次侧有无凝集现象。主、次侧均无凝集反应表示配血相合；任何一侧凝集或两侧均凝集为配血不合。

2.1.2 酶介质法

蛋白酶（木瓜酶、菠萝酶、无花果酶）能破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。蛋白酶可修饰红细胞膜上的抗原，从而促进某些血型系统（尤其是Rh和Kidd）的抗原抗体反应；但会改变其他系统（尤其是M，N，Fya ，Fyb ）抗原的构型破坏其抗原性。酶还可能改变细胞悬液的物理性质，可导致红细胞的非免疫性聚集。

2.1.3 抗人球蛋白介质法

抗人球蛋白试验又称coombs试验。在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞出现凝集，加入抗球蛋白试剂后，抗人球蛋白分子的Fab片段与包被在红细胞上的抗体Fc段结合，从而通过抗人球蛋白分子的搭桥造成红细胞的凝集。coombs试验包括“直接抗人球蛋白”和“间接抗人球蛋白”试验，均可使用试管法和微柱凝胶法。直抗试验检测红细胞上已包被的抗体或补体；间抗试验检测血清或血浆中游离的不完全抗体。

2.1.4 凝聚胺法

聚凝胺是一种由四个铵聚合而成的高阳离子聚合体。聚凝胺可使正常红细胞聚集，而在加入柠檬酸盐时又可使聚集的红细胞散开。当红细胞上有IgG抗体结合时，聚凝胺所造成的凝集是不可逆的。在此实验中，红细胞与血清在低离子介质中孵育，以促进抗体结合到红细胞上。然后加聚凝胺，离心后通过加入柠檬酸盐使聚凝胺形成的凝集散开。此时，由抗体介导的凝集在加入柠檬酸盐后仍然维持，而无抗体致敏的红细胞凝集则会散开。如果需使用加入柠檬酸盐后散开的红细胞做进一步的抗球蛋白试验，则散开后的细胞需经过三次洗涤。

2.1.5 微柱凝胶免疫技术

微柱凝胶试验（Microtubes Gel Test，MGT）是20世纪90年代先后进入国内实验室并用于交叉配血的新方法。在一些先进国家已成为常规的红细胞血型血清学检测技术。

2.1.6 结果判读

先观察上清液的颜色，然后再轻摇试管观察有无红细胞凝集现象发生； 如试管内红细胞呈均匀混浊无颗粒出现即无凝集，上清液呈正常血清状颜色为交叉配血试验相合。如上清液呈红色即有溶血现象，红细胞成块即为凝集现象，为交叉配血试验不相合。

3不规则抗体的筛选和鉴定

不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即除抗A、抗B之外的血型抗体。若OC管呈阳性反应，则可能存在不规则抗体，应用谱细胞进行抗体鉴定。若可疑为亚型标本，增加抗A、抗B抗血清反应量，加抗AB、抗H、抗A1试剂做正定型。用A1、A2、B、O细胞做反定型。如果以上试验不足以确认亚型类型，要加做唾液中血型物质的测定。

4 血型抗体效价测定

凝集强度 效价评分4+ 123+ 102+ 81+ 5W+ 20 0抗体效价测定时一种抗体半定量的分析方法[2] 。血清经连续倍比稀释后与选定的红细胞进行反应，通常以肉眼可见的明显凝集的最高血清稀释度数值的倒数来表示效价，这个半定量的方法能提供血清中抗体的量或红细胞上抗原的量的情况。细胞均匀无凝集者为阴性（0），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。

参考文献

[1] 车玲玲，宿军，李敏等.RhD（-）献血者中检出IgM抗-D1例.中国输血杂志，2012，（12）：1331-1332.

[2]韩兆东，郭立霞，汪桂霞等.临床检验学.中医古籍出版社，2013：216.