顶空气相色谱法测定交联透明质酸钠凝胶中异丙醇的残留量

李红梅，张素文，朱肖杰，郈秀菊，孟建文，王晓晨，朱小敏

(山东省药学科学院， 山东省医用高分子材料重点实验室，济南 250101)

1 引 言

透明质酸(HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基葡糖双糖单元重复连接组成的一种链状聚阴离子粘多糖[1]，是人和动物皮肤、玻璃体、关节滑液和软骨组织的重要成分。高纯度的注射级HA已被制成注射剂，用于眼科手术、骨科手术、预防术后粘连、治疗骨性关节炎和类风湿性关节炎[2]。此外，也被用于面部注射美容，改进皮肤外观和结构、减轻皱纹、阻止皮肤衰老或改进唇部形状[3-4]。HA具有良好的生物相容性，极少产生副作用，但由于它在体内降解太快，难以维持理想效果。近年来，透明质酸经修饰或交联后获得了一些毒性小、生物相容性好的抗降解产物，陆续被开发为多种面部注射美容产品[5]。目前，国外最热销的美容产品PERLAN和RESTYLANE(瑞典Q-MED公司)即属该类交联产品；国内近几年已有同类产品生产和上市，如华熙福瑞达生物医药有限公司的润百颜，上海其胜生物制剂有限公司的海薇，北京爱美客生物科技有限公司的逸美，科妍生物科技股份有限公司(台湾)的水微晶等。

我们研制的交联透明质酸钠凝胶主要用于注射美容，因在制备过程中使用了异丙醇。故应严格控制异丙醇的残留量。本试验采用气相色谱法测定交联透明质酸钠凝胶中异丙醇的残留量[6]。

2 仪器与试药

气相色谱仪(检测器：Agilent6897，顶空自动进样装置：Agilent7697A，美国Agilent)；氢火焰离子化检测器；电子分析天平(上海精密电子分析天平JA003N)。

异丙醇(天津市科密欧化学试剂有限公司，≥99.7%)；交联透明质酸钠凝胶(自制，批号：20140806、20140809、20140811)。

3 实验方法与结果

3.1 色谱条件

安捷伦DB-624(30 mX0.535 mmX3.0 μm)毛细管柱；进样口温度180℃，分流比10：1；检测器温度为180℃；载气为氮气，流速为2.0 mL/min，氢气流速为2.0 mL/min；柱温采用程序升温，初始温度为50℃，保持1 min，以10℃/min升温至160℃，后运行温度：50℃，保持1min。顶空自动进样装置，加热箱温度为80℃，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃；样品平衡时间为30 min。进样量为1 ml。色谱图见图1(保留时间Rt=6.212)。

图1异丙醇的色谱图

Fig1Chromatographyofisopropanol

3.2 对照品溶液的制备

取色谱纯异丙醇适量置于容量瓶中，精密称定，用纯化水稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含10.83 mg的对照品储备液。

3.3 线性与范围

精密量取对照品储备液1 ml于100、50、25 ml容量瓶中，加水至刻度，作为2、3、4号标准溶液；精密量取对照品储备液2 ml于25 ml容量瓶中，加水至刻度，作为5号标准溶液；于2号标准溶液中精密量取10 ml于100 ml容量瓶中，加水至刻度，作为1号标准溶液。各精密量取4 ml分别加入10 ml的顶空瓶中，密封，放入顶空自动进样装置中，按3.1条件进样，记录峰面积。以异丙醇峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，求得线性回归方程为：

A=1701.2C+20.101

R=0.9990

由上可知，浓度在0.01083～0.8664 μg/mL范围内与各自峰面积线性关系良好。

3.4 精密度试验

取3号异丙醇标准溶液，按3.1条件连续进针6次，测得异丙醇的峰面积的RSD为 2.9% 。精密度良好。

3.5 溶液稳定性试验

取3号异丙醇标准溶液，按3.1条件于0、2、4、6、8 h进行测定，测得异丙醇的峰面积的RSD为3.0%。

3.6 最小检测限测定

取3.3项下1号异丙醇标准溶液进行稀释，每一次稀释，取样进样，要求：S/N≥3，测得异丙醇的最小检测限为0.060μg/mL。

3.7 回收率试验

称取交联透明质酸钠凝胶9份，每份2 g，精密称定，加入到10 ml顶空瓶中，每三份分别加入适量浓度的异丙醇溶液2 ml，摇匀，密封，放入顶空自动进样装置中，按3.1条件进样测定，计算异丙醇的平均回收率 99.1%，RSD为1.2%。

3.8 样品残留量测定

取各批号交联透明质酸钠凝胶2 g ，精密称定，置10 ml顶空瓶中，准确加人纯化水2.0 ml，混合均匀。另精密量取异丙醇标准溶液各4.0 ml，置10 ml顶空瓶中，摇匀，密封，放入顶空自动进样装置中，按3.1条件进样测定，记录峰面积；按外标法以峰面积计算。交联透明质酸钠凝胶的异丙醇残留为分别为24.49、24.12、25.08 μg/g。色谱图见图2。

图2样品的色谱图

Fig2Chromatographyofsample

4 讨论

异丙醇沸点为82℃，易溶于水，挥发性好，也容易气化，可直接采用顶空气相色谱法进行测定。潘华先等[7]采用气相色谱法测定医用透明质酸钠凝胶中乙醇残留量，样品制备中密封后放入80℃恒温干燥箱中平衡20 min，直接进样。《YY0308-2004 医用透明质酸钠凝胶》行业标准中样品制备也是密封后放入80℃恒温干燥箱中平衡20 min，直接进样。参照乙醇残留量值为应不大于400 μg/g的要求[8]，将交联透明质酸钠凝胶中异丙醇的残留量定为其值应不大于400 μg/g。

本试验建立了一种简单、快速、准确的交联透明质酸钠凝胶中异丙醇残留量的测定方法，精密度在3.0%以下，最小检测限为0.060μg/mL，浓度在0.01083～0.8664 μg/mL范围内，与各自峰面积线性关系良好。测定的交联透明质酸钠凝胶中异丙醇残留量符合要求。

综上所述，通过顶空气相色谱分析法，在本研究中确定的色谱条件下，可以快速、准确地分析交联透明质酸钠凝胶中异丙醇的残留量。